干旱诱导性启动子驱动的海藻糖-6-磷酸合酶基因载体的构建及转基因烟草的耐旱性

通过PCR程序克隆拟南芥 (Arabidopsisthaliana (L .)Heynh .)的干旱诱导性启动子Prd2 9A及来自酿酒酵母(SaccharomycescerevisiaeHansen)的海藻糖_6_磷酸合酶基因 (TPS) ,并将它们组成可在植物中表达的载体RT。通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4介导 ,获得转基因烟草 (NicotianatabacumL .)。Southern分析表明TPS基因已经整合到烟草基因组中。Northern分析表明TPS基因的表达受干旱胁迫的诱导。转基因烟草的形态发生多种改变 ,包括变矮 ,茎变细 ,叶子呈柳叶状 ,腋芽明显 ,同时耐旱性得到增强。

菠菜磷酸丙糖转移蛋白在烟草中正义及反义表达及其对碳水化合物转运的影响

以菠菜 (SpinaciaoleraceaL .)为材料 ,取幼叶分离mRNA ,反转录合成cDNA ,以cDNA第一链为模板 ,通过PCR扩增 ,获得菠菜磷酸丙糖转移蛋白 (Triosephosphatetranslocator,TPT)cDNA目的片段。对其进行序列分析 ,结果表明 ,分离的目的片段核苷酸序列与文献报道相比同源率为 99 9% ,只有 1个碱基发生改变。将得到的菠菜tptcDNA与CaMV 35S启动子和NOS 3′终止子融合 ,分别构建了正义及反义表达载体。通过根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导转化烟草 (NicotianatabacumL .) ,在含有卡那霉素的抗性筛选培养基上再生的植株经PCR及Southern杂交检测 ,证明tpt基因已整合到烟草基因组上 ,菠菜丙糖磷酸转移蛋白基因导入烟草后使叶绿体中TPT的含量表现出明显差异 ,并导致烟草光合作用产物分配的变化 ,表现在叶绿体中淀粉含量的改变。