陈皮酵素对小鼠酒精性肝损伤及肠道菌群的调节作用

目的探讨陈皮酵素(Pericarpium citri reticulatae fermentation liquor,PF)对小鼠酒精性肝损伤和肠道的调节作用。方法将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组[100mg/(kg·d)水飞蓟宾(silibinin,Sly)]和陈皮酵素组[500 mg/(kg·d)PF],每组10只,持续给药干预2周。通过分子生物学检测生物化学和病理学指标;16S rDNA高通量测序技术检测分析粪便微生物群。结果组织切片结果显示陈皮酵素可以显著改善酒精性肝损伤小鼠的肝脏和回肠组织损伤,减少酒精诱导的肝脏脂质积累。此外,陈皮酵素显著降低肝脏组织促炎因子[白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]的水平,缓解酒精引起的氧化应激。同时,陈皮酵素可修复酒精引起的肠道菌群紊乱,维持肠道菌群数量,修复肠道黏膜屏障损伤。结论陈皮酵素可改善酒精性肝损伤,其机制与抗氧化、抗炎和调节肠道菌群紊乱有关,值得推广应用与开发。

广陈皮精油的抗氧化活性研究及其应用

本文以超临界CO_(2)萃取法提取的5年份广陈皮精油为研究对象,利用气相色谱-质谱联用技术对广陈皮精油化学组成成分进行分析,采用体外抗氧化测定方法来综合评价广陈皮精油的抗氧化能力,以壳聚糖包埋方法制备了一种新型的精油纳米乳液并进行应用评价。结果表明:广陈皮精油中有20种主要挥发性成分,其中柠檬烯含量最高(58.41%)。体外抗氧化活性测定结果显示广陈皮精油对ABTS自由基(IC_(50)=5.75 mg/mL)和DPPH自由基(IC_(50)=44.54 mg/mL)均具有一定的清除能力,具有良好的抗氧化活性。扫描电镜(SEM)形态观察结果表明广陈皮精油纳米乳液呈球形,均匀度稳定性良好。在实际应用中,精油纳米乳液可有效延缓苹果的氧化褐变,达到防腐保鲜的效果。

不同酵母菌与植物乳杆菌复合发酵对新会柑酵素品质的影响

为评价不同酵母菌与植物乳杆菌复合发酵对新会柑酵素品质的影响,以新会柑新鲜果浆为原料,采用3种酵母菌种分别与植物乳杆菌进行复合发酵。追踪发酵过程中发酵液的酵母活菌数、总糖含量、pH和总酸的变化趋势,并比较不同发酵体系新会柑酵素的生物活性物质及其体外抗氧化活性。结果显示:三株酵母菌均可在新会柑中正常生长,但酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母在新会柑的生长速率高于单胞酿酒酵母。发酵可以提高新会柑酵素总黄酮、多酚、γ-氨基丁酸的含量和体外抗氧化活性,但会降解部分粗多糖。马克斯克鲁维酵母发酵体系中粗多糖和γ-氨基丁酸含量最高,可达4.37 g/kg和82.85 mg/kg,单胞酿酒酵母发酵体系中总黄酮含量最高为1.54 g/kg。此外,马克斯克鲁维酵母发酵后其发酵液羟自由基清除率和总还原力分别为82.48%和1.09,显著高于其他酵母发酵(P<0.05);同时,其SOD活力、DPPH自由基清除力、ABTS+自由基清除力分别为161.62 U/mL、0.293 mg/mL、0.489 mg/mL,与其他发酵体系相当,表明该体系发酵条件下新会柑酵素的抗氧化活性更高。综上,马克斯克鲁维酵母与植物乳杆菌复合发酵制备新会柑酵素在活性物质含量和抗氧化能力提升方面优于其他两种复合发酵体系。

薄层色谱法快速鉴别广陈皮与陈皮

目的建立薄层色谱方法快速鉴别广陈皮与陈皮。方法采用硅胶G60薄层板,先以环己烷⁃乙酸乙酯(5∶1)为展开剂展至约8 cm,再以乙酸乙酯⁃甲醇(10∶3)为展开剂展至约3 cm,最后以环己烷⁃乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展至约5.5 cm,喷以1%三氯化铝乙醇试液,于紫外灯(365 nm)下验视。结果供试品色谱在与对照品色谱对应的位置显示相同颜色的斑点,且20批广陈皮成分较为相似,均显示出明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点;14批陈皮与广陈皮成分与含量差异较大,且均无明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点。结论该方法能全面反映陈皮药材的信息,可作为快速鉴别广陈皮与陈皮的有效手段。

新会柑汁发酵物对水产养殖尾水的净化效果研究

该研究以一种农业废弃物新会柑汁(直接使用或离心后使用)作为3种微生物菌剂(利生源、酵之源、乳丁宝)的天然培养基,并将发酵物用于去除水产养殖尾水中的TN和NH3-N,以未投加发酵物的养殖尾水作对照组。对比发现,经离心柑汁发酵培养的利生源发酵物,对模拟尾水的净化效果最好,TN和NH3-N去除率分别可达到82.5%和98.7%,而对照组无去除效果。将该最优处理剂进一步用于去除草鱼和罗非鱼池塘尾水中的TN和NH3-N,发现去除速率均明显加快,其中罗非鱼池塘尾水的氮指标达到了淡水池塘养殖水排放要求(SC/T 9101—2007)二级标准。

陈皮酵素可体内抑制小鼠的肝纤维化

目的研究陈皮酵素在体内抗肝纤维化的作用。方法119只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:模型组(n=49)、实验组(n=56)、对照组(n=7)和陈皮酵素组(n=7)。模型组灌胃40%CCl4橄榄油溶液(3×0.1 mL/周);实验组灌胃40%CCl4橄榄油溶液(3×0.1 mL/周)和陈皮酵素(0.26 mL/d);对照组和陈皮酵素组分别给予橄榄油(3×0.1 mL/周)和陈皮酵素(0.26 mL/d),共8周。采用腹腔注射CCl4的方法来构建小鼠肝纤维化模型,模型组和实验组每周处死7只小鼠,对照组和陈皮酵素组小鼠第8周处死,收集肝脏标本和血清。用HE染色和天狼星红染色观察各组小鼠肝组织病理改变,测定血清甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平。结果HE和天狼星染色结果显示,只灌胃CCl4的模型组,肝纤维化程度逐渐加深,表现为汇管区明显的脂肪变性、坏死和炎性细胞浸润。但给予陈皮酵素的实验组炎症程度较模型组减轻,表现为空泡化和炎症细胞浸润减少,胶原沉积减少且实验组Ishak评分显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,实验组血清肝功能指标甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平显著降低(P<0.05)。结论陈皮酵素有肝保护作用,可以显著减轻肝纤维化程度。

新会陈皮保健泡菜的试制及评价

目的试制添加新会陈皮的保健泡菜,并评价其保健功效。方法在室温下自然发酵,探究不同盐浓度、不同陈皮添加量对泡菜腌制过程中对亚硝酸盐含量的影响,对泡菜进行色泽、脆度和风味等感官评价,并分别测定陈皮泡菜清除DPPH自由基和羟基自由基的能力。结果试制保健泡菜中的亚硝酸盐含量与盐浓度相关,6%盐浓度较适宜,高盐浓度会导致亚硝酸盐抑制率下降;添加陈皮的保健泡菜可显著降低亚硝酸盐峰值含量,其中2%陈皮添加量降低最显著,同时添加陈皮的保健泡菜对DPPH自由基和羟基自由基具有明显的清除效果。结论盐浓度6%、陈皮添加量2%时评分较高,风味口感佳。制作陈皮保健泡菜不仅可显著抑制亚硝酸盐产生,提高抗氧化活性,且丰富泡菜的感官风味水平,提升泡菜的品质,延伸陈皮产业链。

HPLC法同时测定新会柑种子中7种成分

目的建立HPLC法同时测定新会柑Citrus reticulata‘Chachi’种子中辛弗林、没食子酸、橙皮苷、柠檬苦素、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、橘皮素的含有量。方法新会柑种子甲醇提取物的分析采用DIKMA Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相磷酸水-(甲醇∶乙腈=1∶1),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长辛弗林(224 nm),没食子酸(218 nm),橙皮苷(283 nm),柠檬苦素(209 nm),川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、橘皮素(330 nm)。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(R2≥0.999 1),平均加样回收率98.546%~101.769%, RSD 1.3%~2.6%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于新会柑种子的质量控制。

基于GC-MS及HPLC-PDA对四花青皮活性成分的分析

目的:对四花青皮挥发性化学成分进行GC-MS分析,并结合HPLC-PDA对其6种主要活性成分进行定量分析。方法:采用水蒸气蒸馏法提取四花青皮中的挥发油,结合GC-MS分析其化学成分及相对含量,进一步建立HPLC方法同时测定四花青皮中6种活性成分辛弗林、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、橘皮素、5-羟基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮的含量。结果:采用GC-MS分析从四花青皮中分离鉴定出的38种挥发性化合物,包括25种萜烯类、2种酯类、4种醇类、2种醛类、2种酚类、3种其他化合物。其中主要成分为柠檬烯(55.45%)、γ-松油烯(16.18%)、2-(甲氨基)苯甲酸甲酯(5%)、α-蒎烯(2.84%)以及β-蒎烯(2.75%)等。HPLC-PDA定量结果显示,四花青皮中活性成分以黄酮类为主,其中以橙皮苷的含量最高,多甲氧基黄酮类中,橘皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、川陈皮素的含量较高,而5-羟基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮含量较低。结论:建立了四花青皮的GC-MS和HPLC-PDA的分离鉴定方法,该法简便易行,可为四花青皮药材的深入质量评价及体内药效物质的阐明提供有效数据。

新会柑酵素成分综合测定

目的:分析测定新会柑酵素中总黄酮、多糖、蛋白质、氨基酸4类成分的含量,为新会柑酵素综合利用开发提供依据。方法:黄酮采用超声法提取,紫外分光光度法定量;多糖采用水提醇沉法提取,苯酚-硫酸法定量;蛋白质采用细胞裂解法提取,二喹啉甲酸(BCA)试剂盒定量;氨基酸采用超声法提取,茚三酮比色法定量。结果:新会柑酵素A、新会柑酵素B、新会柑肉酵素缩液C中的总黄酮含量分别为0.327 8%、0.122 9%、0.441 4%,多糖含量分别为0.656 3%、0.268 2%、0.242 3%,蛋白质含量分别为6.636 0%、1.388 4%、4.847 2%,氨基酸含量分别为0.527 4%、0.155 8%、0.925 7%。结论:建立了新会柑酵素的总黄酮、多糖、蛋白质、氨基酸的含量测定方法,结果表明,4类成分含量丰富,新会柑酵素具有良好的保健与营养价值。

陈皮酵素调节肠菌稳态及Nrf2/NLRP3通路修复肠黏膜改善小鼠急性溃疡性结肠炎

本研究考察了陈皮酵素对小鼠急性结肠炎的保护作用及机制。动物实验遵循南方医科大学动物伦理委员会规定。C57BL/6小鼠自由饮用3%右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS) 6天诱导急性溃疡性结肠炎,期间灌胃陈皮酵素、陈皮水煎液(均以粗多糖300 mg·kg^(-1)·d^(-1)计)或阳性药5-氨基水杨酸(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续9天。收集盲肠内容物进行16S rRNA测序分析;RT-PCR、免疫荧光及Western blot法检测结肠炎症因子、紧密连接蛋白及核因子E2相关因子2/Nod样受体蛋白3 (nuclear factor erythroid 2 related factor 2/Nod-like receptor protein 3,Nrf2/NLRP3)通路相关蛋白水平。结果显示:陈皮酵素及陈皮水煎液均能明显改善急性结肠炎小鼠的体重下降、腹泻、血便和结肠缩短;且陈皮酵素显著降低结肠促炎因子,如白介素6 (interleukin 6, Il-6)、CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10, Cxcl10)及NLRP3炎症小体相关基因或蛋白表达;同时显著增加结肠抗炎因子(Il-10)、紧密连接蛋白[Zo-1 (zonula occludens-1)、occludin、claudin-1]、黏蛋白(mucin 2, Muc2)及Nrf2的基因表达,以及醌氧化还原酶1 [NAD(P)H quinine oxidoreductase 1, NQO1]和血红素氧合酶1 (heme oxygenase 1, HO-1)的基因和蛋白表达。此外,陈皮酵素显著富集Akkermansia并降低Enterococcus、Streptococcus等有害菌丰度;关联分析结果显示,Akkermansia丰度与结肠抗炎因子、紧密连接蛋白水平和Nrf2信号通路呈显著正相关。综上,陈皮酵素可通过调节肠菌稳态及Nrf2/NLRP3通路修复肠黏膜改善小鼠急性溃疡性结肠炎。

《中国药典》2020版陈皮质量标准修订的研究

目的:针对《中国药典》2020版陈皮质量标准的修订提出两点建议,以突出"陈皮"与"广陈皮"的共性特征与个性差异,完善陈皮质量标准。方法:采用TLC三步展开法,以橙皮苷、川陈皮素和2-甲氨基-苯甲酸甲酯为对照,鉴别并区分"陈皮"与"广陈皮";同时采用HPLC法对橙皮苷、川陈皮素、橘皮素等5种黄酮成分进行含量测定,并对川陈皮素与橘皮素进行相关性分析。结果:TLC鉴别结果表明橙皮苷与川陈皮素是"陈皮"与"广陈皮"的共有成分,而2-甲氨基-苯甲酸甲酯仅在"广陈皮"中发现,可作为区分二者的特征成分;HPLC测定结果显示橙皮苷,川陈皮素和橘皮素是二者的主要活性成分,同时川陈皮素与橘皮素含量具有良好的正相关性,且以川陈皮素为高,故可考虑以橙皮苷与川陈皮素作为测定指标。结论:结合本研究结果,对《中国药典》2020版陈皮质量标准的修订提出两点建议:一是在TLC鉴别项下以橙皮苷、川陈皮素和2-甲氨基-苯甲酸甲酯为"陈皮"与"广陈皮"的鉴别对照,二是在含量测定项下以橙皮苷与川陈皮素为二者的测定指标。该实验方法具有很好的耐用性和专属性,可有效体现二者的共性特征与个性差异,为陈皮质量的有效控制提供合理参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析四花青皮的成分

目的:采用超高效液相色谱串联四极杆轨道阱高分辨率质谱技术(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)对四花青皮的成分进行定性分析。方法:分析采用ZORBAX Rclipse Plus C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),柱温40℃。结果:在正离子模式下,从四花青皮中共鉴定了32个成分,包括18个黄酮类化合物,7个有机酸类化合物,2个生物碱类成分和5个其他成分,其中14个成分为四花青皮中首次报道。结论:本方法适用于四花青皮中成分的快速鉴定,可为四花青皮的质量控制和进一步应用开发提供参考依据。

新会陈皮化学成分的综合分析测定研究

目的:建立HPLC法同时测定新会陈皮中橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、橘皮素、5-羟基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮、辛弗林、柠檬苦素和没食子酸的含量,并结合UV法测定其总黄酮、多甲氧基黄酮和总酚酸的含量。方法:超声法提取,利用HPLC法,采用DIKMA Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),使用A相(磷酸水,pH3.7)-B相(甲醇∶乙腈=1∶1)为流动相进行梯度洗脱,分别测定新会陈皮中8种成分的含量;利用UV法测定总黄酮(283 nm)、多甲氧基黄酮(330 nm)和总酚酸(765 nm)的含量。结果:HPLC法测定结果显示黄酮类成分中以橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量较高,此外,辛弗林、没食子酸和柠檬苦素的含量分别为0.278 6%、0.000 6%和0.099 8%;UV法测定结果显示总黄酮、多甲氧基黄酮及总酚酸的含量分别为5.213 7%、1.242 4%和2.112 1%。结论:该法简便易行,可为新会陈皮质量的有效控制和开发应用提供科学依据。

利用新会柑果浆培养海洋假丝酵母的发酵工艺

为研发基于新会柑果浆的海洋假丝酵母规模化培养技术,探讨在开放式环境下,果浆稀释与牛肉浸粉/葡萄糖/CaCO_(3)添加等工艺条件对海洋假丝酵母生长的影响。结果表明,在开放式环境中,无杂菌发生,且经24 h培养后的活菌数可达6.5×10^(7)CFU/mL。果浆稀释4倍、牛肉浸粉投加量0.125 g/L、葡萄糖投加量1.000 g/L和CaCO_(3)投加量0.125 g/L时,更有利于海洋假丝酵母生长。在此优化条件下,其活菌数可达9.5×10^(9)CFU/mL,且随之发生絮凝现象,有利于后续回收利用。可见,采用新会柑果浆开放式培养海洋假丝酵母是可行的,不仅培养基廉价易得,而且发酵和分离便利,能够满足工业化大规模生产需求。