电针预处理对脂多糖诱导的小鼠心功能障碍及炎性反应的影响

目的观察电针预处理对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症模型小鼠心功能障碍和炎性反应的影响,探讨电针预处理促心肌保护的可能机制。方法24只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和电针预处理组,每组8只。电针预处理组在异氟烷麻醉状态下电针双侧足三里穴,疏密波,频率2/15 Hz,强度2 mA,持续15 min;对照组、模型组同样的方式抓取、固定。电针结束后,模型组和电针预处理组腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建脓毒症模型;对照组注射等量生理盐水。采用超声心动图评价心功能;ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β水平;qPCR和Western blot法检测心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA和蛋白表达量;流式细胞术检测心肌组织中F4/80+CD11b+总巨噬细胞、F4/80+CD11b+CD206lowM1型和F4/80+CD11b+CD206highM2型巨噬细胞含量。结果与对照组相比,模型组小鼠的LVEF、LVFS均显著下降(P<0.01),血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),心肌组织中巨噬细胞含量增多(P<0.01),且M1型巨噬细胞比例增高(P<0.01);与模型组相比,电针预处理组的LVEF、LVFS均显著提高(P<0.01),血清中TNF-α、IL-1β含量下降(P<0.05,P<0.01),心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01),而IL-10表达上升(P<0.05,P<0.01),巨噬细胞含量下降(P<0.01),且M2型巨噬细胞比例增高(P<0.01)。结论电针预处理可能通过促进心肌组织中巨噬细胞由促炎M1型向抗炎M2型极化,减轻全身和局部炎性反应水平,改善心功能,产生心肌保护效应。

电针对慢性炎性痛小鼠炎性反应和免疫细胞的影响

目的:观察电针对完全弗氏佐剂(CFA)诱导的慢性炎性痛小鼠足掌局部炎性介质、巨噬细胞极化及脾脏中相关免疫细胞的影响,探究电针缓解慢性炎性痛小鼠疼痛及肿胀的免疫炎性调控机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组10只。连续7 d左后足掌皮下注射20μL CFA溶液建立慢性炎性痛小鼠模型。造模后电针组给予双侧“足三里”电针治疗20 min(2 Hz/100 Hz,1 mA),每天1次,连续18 d。于造模前后、干预后分别测量各组小鼠机械痛阈值、热痛阈值和足掌厚度,Western blot法检测足掌组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达,免疫组织化学法检测足掌局部巨噬细胞M1型标记物iNOS、M2型标记物CD206的阳性表达,流式细胞术检测脾脏F4/80^(+)CD11b^(+)巨噬细胞、Ly6G^(+)CD11b^(+)中性粒细胞、CD25^(+)Foxp3^(+)调节性T细胞(Treg)占比。结果:与对照组相比,模型组小鼠机械痛阈值、热痛阈值明显降低(P<0.0001),左后足掌厚度,足掌局部IL-1β、TNF-α、NLRP3表达量,足掌局部iNOS阳性表达,脾脏中巨噬细胞、中性粒细胞占比明显升高(P<0.0001,P<0.001)。与模型组相比,电针组小鼠干预后机械痛阈值、热痛阈值,足掌CD206阳性表达,脾脏Treg占比显著升高(P<0.01),足掌厚度,足掌局部IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白表达量,足掌局部iNOS阳性表达,脾脏中巨噬细胞、中性粒细胞占比显著降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。结论:电针可能通过调控脾脏巨噬细胞、中性粒细胞、Treg占比,并促进局部巨噬细胞向M2型极化,抑制促炎因子释放,从而缓解慢性炎性痛小鼠的疼痛及肿胀。

电针预处理对AMI小鼠心肌局部炎症及DNA-PK/Rictor/Myc信号通路的影响

目的观察内关穴电针预处理后急性心肌梗死小鼠(AMI)心功能、局部炎症水平及巨噬细胞M2型极化变化,并从调控DNA-PK/Rictor/Myc信号通路角度探讨其可能机制。方法将雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。采用结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型。电针组接受双侧内关穴电针干预,疏密波,2/15 Hz,1 mA,每次20 min,每日1次,连续3 d,电针干预结束后30 min造模。采用超声心动图检测心脏射血分数(EF)和短轴收缩率(FS);HE、TUNEL染色观察小鼠心肌病理形态和心肌细胞凋亡;免疫组化和ELISA法检测梗死区心肌组织和外周血中IL-1β、TNF-α、NLRP3的表达水平;流式细胞术检测心脏中巨噬细胞极化状态,Western blot法检测梗死心肌中DNA-PK、p-DNA-PK、Rictor、Myc的蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组的EF、FS明显降低(P<0.0001),炎性细胞浸润明显,心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.001),心肌组织和血清中IL-1β、NLRP3、TNF-α表达上调(P<0.01,P<0.001),巨噬细胞百分比明显增加(P<0.001),M2型巨噬细胞百分比下降(P<0.0001),心肌组织中p-DNA-PK、Rictor和Myc蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.0001);与模型组相比,电针组的EF、FS显著升高(P<0.0001),炎性细胞浸润减少,心肌细胞凋亡指数下降(P<0.01),心肌组织和血清中IL-1β、NLRP3、TNF-α表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),巨噬细胞百分比下降(P<0.05),M2型巨噬细胞百分比上升(P<0.01),心肌组织中p-DNA-PK、Rictor和Myc蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.0001)。结论电针预处理可能通过调控DNA-PK/Rictor/Myc信号通路,促进巨噬细胞M2极化,减轻局部炎症,减少心肌细胞凋亡,从而提高心功能,实现心肌保护效应。

不同强度电针预处理对急性心肌缺血小鼠心功能及巨噬细胞极化的影响

目的:观察不同强度电针预处理对急性心肌缺血(AMI)小鼠心功能影响的效应差异,并探讨其可能的作用机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组(0.5 mA组、1 mA组、3 mA组),每组10只。各电针预处理组采用0.5、1、3 mA电流强度分别电针小鼠双侧“内关”,每次20 min,每日1次,连续干预3 d后造模。采用结扎心脏冠状动脉左前降支法建立AMI小鼠模型。采用超声心动评价各组小鼠心脏功能,TTC染色法检测心肌梗死面积百分比,流式细胞技术检测心脏巨噬细胞数量和M1/M2巨噬细胞极化状态,Western blot法检测心肌组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组左心室射血分数(EF)和短轴收缩率(FS)降低(P<0.0001),心肌梗死面积百分比升高(P<0.0001),心脏巨噬细胞数量增加(P<0.0001),且以M1型为主,心肌组织IL-1β、TNF-α、TLR4蛋白表达水平升高(P<0.001,P<0.01)。与模型组比较,0.5 mA组、1 mA组和3 mA组EF和FS均明显升高(P<0.0001,P<0.05,P<0.001),心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.0001,P<0.01),心肌组织IL-1β、TNF-α、TLR4蛋白表达水平均降低(P<0.01,P<0.05,P<0.001),1 mA组心脏巨噬细胞数量降低(P<0.05),且以M1型为主。与1 mA组比较,0.5 mA组和3 mA组EF和FS降低(P<0.01,P<0.0001),心肌梗死面积百分比升高(P<0.01,P<0.0001),心肌组织TLR4蛋白表达水平升高(P<0.01),0.5 mA组心肌组织IL-1β、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:0.5、1、3 mA电针预处理均能有效改善AMI小鼠心功能,减少AMI小鼠心肌梗死面积和心脏巨噬细胞数量,下调心肌组织IL-1β、TNF-α、TLR4蛋白表达;其中1 mA组效应最佳,可能与其促进心肌巨噬细胞由M1型向M2型极化有关。