实时荧光定量PCR检测CYP2C9* 3及VKORC1_C1173T基因多态性方法的建立

建立实时荧光定量PCR法检测人药物代谢基因CYP2C9*3及VKORC1_C1173T多态性,并确定最适反应条件。该方法采用Taq Man-MGB(Minor groove binder,小沟结合物)探针技术,针对每个待检测位点设计特定的引物和探针,并优化引物、探针浓度;建立和优化反应体系,设计合理的PCR Enhancer组分;并对Taq ManMGB探针特异性、敏感性和重复性进行评价,同时对部分实时荧光定量PCR产物样品进行测序验证。结果表明,Taq Man-MGB探针法对2个等位基因检测结果准确,检测方法特异性高;所构建方法线性关系良好(R2≥0.991),扩增效率为95.2%~109.9%,标准曲线斜率为-3^-3.5;检测灵敏度可达10拷贝/反应;随机样品Taq ManMGB探针检测结果与测序结果一致。所建立用于基因多态性检测的Taq Man-MGB探针法具有简便、快速、准确、高效等特点,检测原理可用于各种SNP分型检测,具有广泛的应用前景。