表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。

猫上呼吸道疾病的病原、诊断与防治

猫上呼吸道疾病(feline upper respiratory tract disease, FURTD)是一种在猫中广泛传播的以上呼吸道、口腔和眼部症状为主的疾病。引起FURTD的病原多样,除常见的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫疱疹病毒Ⅰ型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)、猫衣原体(Chlamydia felis,C.felis)、猫支原体(Mycoplasma felis,M.felis)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)外,临床中还有许多其他的病原偶见感染。临床中常出现由多种病原体混合感染的情况,并且病原的不断进化容易造成致病性的增强和组织嗜性的改变,这种病因的复杂性往往使得FURTD的防治较为困难。同时,由于许多病原感染引起猫的症状相似,仅凭临床症状无法准确判断出病因,准确认识不同病原的特性、掌握不同的病原检测方法对FURTD的病因快速诊断和提出高效的治疗方案至关重要。目前,不同病原引起的FURTD病例常被报道,而针对FURTD的诊断方法、治疗以及疫苗研制都尚未成熟,本文将对该疾病的常见和新发病原、诊断方法、治疗手段和防控措施进行系统地阐述,旨在为FURTD的防治工作提供更多的思路。

广西地区腹泻仔猪呼肠孤病毒的感染及序列分析

为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特征。结果显示,2020-2022年173份样品MR总阳性率为18%(32/173),各年阳性率分别为29.6%、9.9%和33%。获得1株S 1基因全长序列,序列比对结果发现该序列与其他MRV S 1基因序列的核苷酸同源性为43.4%~97.9%,氨基酸同源性为26.1%~97.8%;遗传进化分析显示,获得的毒株序列为MRV3型,与其他猪源MRV3型毒株ZJ2013、IND/MZ/3013789/reo在同一分支上,同属于谱系Ⅳ。结果表明广西地区猪群存在一定程度的MRV感染,为进一步防控广西腹泻猪群中MRV的流行提供科学依据。

H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR检测方法的建立及应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列,分别设计了4对特异性扩增引物,在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下,分别对其特异性和敏感性进行验证,建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法,并对155份临床样品进行了检测。结果显示,该检测方法特异性好、灵敏度高,对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10^(0) copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现,检测结果与多重PCR检测结果一致,证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

广西地区犬和猫肠道病毒的病原学调查研究

为了解引起广西地区犬和猫腹泻等肠道病原的分布情况,并探究犬和猫新型肠道病毒感染的临床特征,为临床中及早诊治和防控肠道疾病提供参考依据,本试验采集宠物犬和猫粪便拭子样品394份(犬样品172份,猫样品222份),并通过聚合酶链式反应(PCR)或反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)筛查犬细小病毒(CPV)、猫瘟病毒(FPV)和查帕马细小病毒(ChPV)等13种主要犬和猫肠道病毒,并分析肠道病毒阳性率与年龄、性别、免疫状况和临床症状之间的相关性。结果显示,犬粪便样品中总阳性样品数为49份,占比28.49%;其中CPV的阳性率最高,达到15.12%,临床症状为典型的肠道症状;其次,犬粪便样品中还检测到犬冠状病毒(CCoV,4.65%)、猫杯状病毒(FCV,4.07%)、嵴病毒(KoV,4.07%)、博卡病毒(BoV,3.49%)、犬瘟热病毒(CDV,2.91%)和布法病毒(BuV,0.58%);其中11份粪便样品混合感染了2种及以上种类的肠道病毒,CPV感染占10份。幼龄犬对CCoV和FCV比较易感;各肠道病毒阳性率与性别无相关性,部分肠道病毒阳性率与免疫状况和临床症状有相关性。猫粪便样品中总阳性样品数为32份,占比14.41%;FPV的阳性率最高,达到8.11%;其次,猫粪便样品中还检测到新型肠道病毒,包括FCV(4.05%)、ChPV(1.35%)、BoV(1.35%)、BuV(0.45%)和猫冠状病毒(FCoV,0.45%);其中混合感染样品仅4份,而FCV感染占3份。FPV和BoV阳性率与猫的年龄和免疫状况存在相关性,各肠道病毒阳性率与猫的性别和临床症状无明显相关性。值得关注的是,犬和猫粪便中均可检测到A型流感病毒(IAV),阳性率分别为2.91%和0.45%。综上表明,CPV和FPV仍是引起犬和猫肠道疾病的主要病原,同时也是混合感染的重要组成;多种新型肠道病毒的阳性率虽然不高,但仍是引起肠道或肠外疾病中不可忽视的病原;IAV的检出再次强调了犬和猫作为“中间宿主”的重要作用。本试验结果不仅为犬和猫肠道传染病的防控提供预警,也为切断宠物-人IAV传播提供重要参考。

表达猪流行性腹泻病毒N蛋白Vero细胞系的构建及初步鉴定

【目的】构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的Vero细胞系,将有助于PEDV的进一步深入研究。【方法】本研究将N基因克隆到慢病毒载体中,构建重组质粒pLenti-CMV-N,利用慢病毒载体包装系统转染293T细胞,包装表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Vero细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法,筛选表达PEDV N蛋白的Vero细胞系,最后进行鉴定。【结果】RT-PCR结果表明构建的细胞系基因组中存在N基因序列,Western blot和IFA试验验证了N蛋白在细胞系中的表达。【结论】本研究成功构建了表达PEDV N蛋白的Vero细胞系。

纤维二糖水解酶在乳酸乳球菌中的表达

为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后,将正确的重组质粒通过电击转化进入乳酸菌NZ3900感受态细胞,通过选择性抗生素氯霉素筛选阳性克隆,放大培养后使用终浓度为20 ng/mL的Nisin进行诱导表达,诱导后的菌液经SDS-PAGE鉴定,有符合预期大小的条带,说明CBH II基因在乳酸乳球菌NZ3900中表达。研究为乳酸乳球菌的改造及开发临床应用奠定基础。

一例猫华支睾吸虫病的诊治

猫华支睾吸虫病是一种寄生虫病,多发生于有食生鱼史的猫,临床上常表现为精神不振、厌食、呕吐、体重减轻、消瘦、贫血、便秘或腹泻、黄疸等症状。现就一例猫华支睾吸虫病的诊断及综合治疗进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。

一例犬立克次氏体混合包柔氏疏螺旋体感染的诊疗

立克次氏体病及包柔氏疏螺旋体病为血液源寄生虫病,是由蜱虫叮咬而引起的人兽共患传染病,蜱虫是其主要传播媒介。报告一例犬立克次氏体及包柔氏疏螺旋体混合感染病例的诊疗全过程,为临床兽医师提供参考。

一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的诊治

犬冠状病毒病是能引起犬发生不同程度的胃肠道炎症的常见传染病,2~4月的幼犬感染后发病率和死亡率最高。犬的贾第虫病是一类容易被幼龄犬感染的人畜共患肠道寄生虫病。本文介绍了一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的病例,对临床检查、诊断以及治疗进行详细阐述,为临床兽医师提供参考。

一例犬皮肤细菌真菌混合感染的病例报告

犬皮肤病是一类易混合感染且发病率高的疾病。犬的皮肤真菌感染以大小孢子菌和马拉色菌多发,皮肤细菌感染常由葡萄球菌、链球菌等细菌所引起,两者易混合发生,临床上常见的感染有球菌与孢子菌混合感染、球菌与马拉色菌混合感染等。本文就一例犬皮肤细菌真菌混合感染的临床诊断及治疗方法进行总结,为临床兽医师的诊断与治疗提供参考。

一例猫杯状病毒、猫衣原体和猫冠状病毒混合感染的病例报告

1只3岁4月龄雌性英短猫因出现嗜睡、食欲不振、流脓性鼻涕及呼吸道症状而就诊,采取血常规、血液生化检查、血清淀粉样蛋白A检测(SAA)、猫冠状病毒(FCoV)、猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)、支原体(Myc)、衣原体(Chl)和嗜血波士杆菌(Bb)抗原荧光定量PCR等一系列检查进行诊断。结果表明患猫为FCV、Chl及FCoV混合感染。通过抗感染,营养支持,增强免疫力,加强护理和饲养管理,定期监测相关指标变化连续追踪治疗9 d后,该病例身体各项指标基本回归至正常水平,出院后第15天回访确认患猫已痊愈,说明针对本病例采取的诊治方案有效可行。

一例猫肠梗阻病例的诊断与治疗

肠梗阻是一种临床上较为常见的消化系统疾病,多为犬猫喜爱衔咬玩耍误食异物或异食癖导致。就一例猫吞食软性异物所致消化道梗阻的病例,阐述其诊断与治疗方案,为提高猫肠梗阻的临床诊断及治疗水平提供参考。

一例犬蜂窝织炎的诊断与治疗

蜂窝织炎是皮肤和筋膜下疏松结缔组织的化脓性炎症,是临床上犬的常见疾病。介绍一例犬蜂窝织炎的诊断与治疗。根据临床检查、细胞检查等方法进行确诊,遵循消炎止痛、引流清创、促进吸收及伤口愈合的原则,对症治疗,并对诊断、治疗及预防该病等进行了分析与讨论,为该病的诊疗提供参考。

以“认识病毒,防控感染”为教学理念的《病毒学》课程实践探索

《病毒学》课程是动物医学专业的基础课程之一,该课程概念抽象,内容繁杂,深奥难懂等特点,给教学带来了一定困难。因此,在新冠病毒全球流行的大形势下,将新发再发的病毒性传染病最新进展引入到《病毒学》选修课程教学中,帮助学生理解和掌握该课程的脉络和知识结构,由点到面扩展病毒学课程的知识点,以“认识病毒,防控感染”为主要中心思想,宣传新冠疫情防控知识点,一方面激发学生的学习兴趣,一方面活学活用;同时理论结合临床实践,再次加深对病毒的认知,以此为病毒学课程教学积累丰富的经验。

SF-36量表和EORTC QLQ-LC43量表在肺癌患者生活质量测定中的应用效果

目的 比较健康调查简表(the MOS item short from health survey,SF-36)和欧洲癌症研究和治疗组织肿瘤肺癌患者生存质量量表(the European Organization for Research and Treatment of Cancer Quality of Life Core 30 Questionnaire,EORTC QLQ-LC43)在肺癌患者生活质量测定中的应用效果。方法 选取2020年9月—2022年6月158例肺癌患者作为研究对象,分别采用SF-36量表和EORTC QLQ-LC43量表调查受试对象的生活质量,采用Pearson线性相关性分析比较两种量表不同维度评分之间的相关性,以Karnofsky评分(KPS评分)功能状态评分作为效标,比较两种生存质量量表的相关性及效度。结果 SF-36量表总克朗巴赫系数为0.766,分量表克朗巴赫系数为0.493~0.849。SF-36量表的躯体功能、躯体角色、躯体疼痛、情感职能、社会活动、一般健康等6个分量表分别与EORTC QLQ-LC43量表的躯体功能、角色功能、疼痛、情绪功能、社会功能、整体生活质量的6个分量表对应,其相关系数为0.784~0.842,相关性差异有统计学意义(P<0.001)。上述对应的分量表具有中等程度的一致性(Kappa值> 0.4)。不同临床分期分组中,肺癌患者SF-36各个维度得分与肿瘤分期显著相关,肿瘤分期越晚,生存质量得分越低(P<0.001)。肺癌患者SF-36各个维度得分与患者的体力状态得分显著相关,体力状态越差,生存质量得分越低(P <0.001)。结论 与EORTC QLQ-LC43量表相比,SF-36量表在评价肺癌患者生活质量方面具有较高的一致性和区分能力,可以作为EORTC QLQ-LC43量表的替代。

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因,经双酶切及测序鉴定,成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示,该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明,重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性,插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。

区域创新政策何以有效推动城市创新?——基于创新型城市试点政策

利用LDA主题模型分析区域创新政策文本内容并提炼政策主题,基于2005—2019年我国275个城市面板数据,运用多期双重差分模型探究区域创新政策推动城市创新的影响机制。研究发现,区域创新政策通过要素集聚效应、创新激励效应以及政策空间效应影响城市创新;创新政策对于沿海城市、胡焕庸线东南侧城市的创新能力促进作用最强,对于较大规模城市的影响效应更大;产业结构越高级的城市,创新政策的实施越能有效提高该城市的创新能力。应加强创新激励力度,制定差异化创新政策,健全政策评估机制,重视城市间知识溢出。

龙岩市表演艺术类非遗旅游开发模式研究

表演艺术类非遗在旅游开发上具有天然的优势,其在地性、娱乐性、观赏性特征贴合了旅游者寻求差异性的消费心理,能够创造潜在的消费市场。龙岩市表演艺术类非遗的资源禀赋突出,具有较大旅游开发价值,通过遵循追随时代原则、保护与开发并重原则、市场导向原则等,采取景区依托模式、主题公园(乐园)模式、非遗博物馆模式、旅游演艺模式、旅游衍生文创模式、研学旅行模式等开发模式,开启龙岩市文化和旅游深度融合与协同发展的新格局。