苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的:探讨苍术素(ATR)通过调节受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样(MLKL)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:使用0~160μmol/L的ATR处理A549细胞,MTT法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR和/或RIPK1抑制剂Nec-1(necrostatin-1)、caspase抑制剂Z-VADFMK处理A549细胞,验证ATR是否诱导A549细胞发生程序性坏死。将A549细胞分为对照组、ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组(分别用0、10、20、40μmol/L ATR处理)、ATR+Nec-1组(40μmol/L ATR+50μmol/L Nec-1处理),处理24 h后,采用PI单染及Hoechst33342/PI双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR(溶于玉米油中)对裸鼠灌胃给药5周,观察ATR对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果:10~160μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549细胞存活率显著低于对照组(P<0.01)和ATR+Nec-1组(P<0.01),而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组(P<0.01),说明ATR可诱导A549细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组A549细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低(均P<0.01),且呈药物浓度依赖性;与ATR-H组比较,ATR+Nec-1组细胞死亡率、ROS及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平降低,线粒体膜电位显著升高(均P<0.01)。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低(P<0.05,或P<0.01),而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。结论:ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。

非小细胞肺癌组织中FGF9、SMAD2表达与临床病理特征及预后的关系

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中成纤维细胞生长因子9(FGF9)、SMAD2表达与临床病理特征以及预后的相关性。方法 选取本院2018年1月-2020年12月收治的75例NSCLC患者作为研究对象,收集患者手术切除癌组织与癌旁组织,免疫组化法比较癌组织与癌旁组织FGF9、SMAD2蛋白表达情况,根据患者癌组织FGF9、SMAD2表达情况将患者分为FGF9阴性表达组、FGF9阳性表达组,SMAD2阴性表达组、SMAD2阳性表达组,比较组间临床病理特征差异;采用Spearman法分析FGF9与SMAD2表达相关性;构建KM曲线,分析患者FGF9、SMAD2表达与生存期的关联;通过COX法分析影响NSCLC患者预后不良的危险因素。结果 与癌旁组织相比,NSCLC组织中FGF9表达阳性率、SMAD2表达阳性率升高(P<0.05);是否发生淋巴结转移、TNM I+II期与TNM III期NSCLC患者FGF9阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);是否淋巴结转移、TNM I+II期与TNM III期、中高分化与低分化NSCLC患者SMAD2阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC组织中蛋白FGF9、SMAD2表达呈正相关(P<0.05);随访期间FGF9阳性表达组患者累积生存率(20.8%)低于阴性表达组(77.3%),SMAD2阳性表达组患者累积生存率(25.9%)低于阴性表达组(76.5%),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);FGF9阳性表达组患者无进展生存率(9.4%)低于阴性表达组(63.6%),SMAD2阳性表达组患者无进展生存率(15.5%)低于阴性表达组(58.8%),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC组织FGF9、SMAD2阳性表达升高,均与患者临床病理特征及预后相关,FGF9、SMAD2可能共同参与NSCLC的癌进展。

五味子乙素对克雷伯菌引起的重症肺炎大鼠肺组织Nrf2/Keap-1/PGC-1α信号通路的影响

目的探究五味子乙素(schisandrin B,Sch B)对重症肺炎大鼠肺组织核转录因子E2相关因子2(uclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1,Keap-1)/过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1,PGC-1α)信号通路的影响。方法先构建重症肺炎大鼠模型,随机分为模型组、Sch B不同剂量组(低、中、高剂量组)和阳性对照组,每组10只,另取10只大鼠作为空白对照组。Sch B低、中、高剂量组分别灌胃给予2.50、5.0、10.0 mg/kg Sch B进行干预,阳性对照组给予大鼠地塞米松1.04 mg/kg灌胃治疗,其余组给予生理盐水,连续14 d。主动脉取血,检测血气指标;分离肺组织,检测其病理学变化、炎症因子水平及通路相关蛋白表达。结果空白对照组大鼠正常饮食、精神状态无异常、肺组织结构清晰。与空白对照组相比,模型组大鼠状态较差,肺组织病理损伤严重,PaCO_(2)值、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)含量、Keap-1蛋白表达均显著增加(P<0.05),PaO_(2)和SaO_(2)水平、Nrf2和PGC-1ɑ蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,Sch B低、中、高剂量组大鼠不良症状逐渐缓解,肺组织炎性浸润、肺泡间质水肿逐渐减轻,PaCO_(2)值、TNF-ɑ、IL-6和IL-1β含量、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1,Keap-1)蛋白表达均依次降低(P<0.05),PaO_(2)和SaO_(2)值、Nrf2和PGC-1ɑ蛋白表达水平依次增加(P<0.05),Sch B高剂量组与阳性对照组相比,各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Sch B可缓解克雷伯菌引起的重症肺炎大鼠不良症状,可能与激活NRF2/PGC-1α信号通路,降低Keap1蛋白表达有关。