日本血吸虫感染小鼠肺脏中T细胞的功能特点及TLR3表达

目的探讨日本血吸虫感染后小鼠肺脏T细胞含量及功能的变化情况。方法日本血吸虫感染C57BL/6小鼠5~6周后,分离肺脏,制备石蜡切片,HE染色观察病理改变,同时获取单细胞悬液,流式细胞术检测T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察T细胞在感染后CD25、CD69、CD62L、CD127表达情况;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内染色的方法检测IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10的分泌情况,同时观察T细胞表达TLR2和TLR3的变化情况。结果日本血吸虫感染小鼠后,观察到肺部中肉芽肿的存在,肺脏中T细胞百分比含量显著增加(P<0.01);感染组CD69在T细胞上的表达比例达显著高于正常组(P<0.01),而感染组T细胞CD62L和CD127分子表达较正常对照组显著下降(P<0.05,P<0.01);感染后,T细胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10的水平较正常组显著增加(P<0.05或P<0.01);感染后TLR3在T细胞表面上表达较正常对照组显著增加(P<0.01)。结论血吸虫感染5~6周后小鼠肺脏中T细胞为一群表型和功能独立的细胞群,且可能通过上调TLR3来发挥免疫调节作用。

日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答

目的观察C57BL／6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法20只C57BU6小鼠随机分为感染组和对照组．每组10只，感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴，每鼠（40＋5）条。感染后5-6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞，分别用抗小鼠CD3单克隆抗体（anti-CD3，1μg／m1）和抗小鼠CD28单克隆抗体（anti-CD28，1μg/ml）刺激，培养4h后收集细胞，RT-PCR检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞中自细胞介素17（IL-17）和维甲酸相关孤独受体（ROR-γt）mRNA的转录水平；培养72h后，ELISA检测细胞培养上清液IL-17和1干扰素（IFN-1）的含量。同时用佛波酯（PMA，10ng／m1）和离子霉素（1μg／ml）刺激淋巴细胞5h后，胞内细胞因子染色，流式细胞术检测Th17细胞的含量和其他细胞因子的产生。结果ELISA检测结果显示，感染小鼠肠系膜淋巴结培养物上清液中IFN-γ[（214．3±62．6）pg／ml]和IL-17[（176．8±62．1）pg／ml]的含量明显高于健康小鼠[（46．7±13．9）和0pg／ml]（P〈0．05）。RT-PCR检测结果显示，IL-17和ROR-γt mRNA转录水平也明显高于健康小鼠。感染小鼠肠系膜淋巴细胞CD4＋T细胞中，Th17细胞的比例为（0．55±0．03）％，明显高于健康小鼠[（0．16±0．01）％]（只以05）。在CD4＋T细胞中，IL-17＋ IL4＋细胞占0．06％，IL-17＋IFNγt和IL-17＋IL5＋细胞各占0．02％，IL-17＋ IL-9＋细胞占0.01％，未检测到Tl-17＋IL-10＋和IL-17＋Foxp3＋细胞。结论日本血吸虫感染C57BIJ6小鼠的肠系膜淋巴结能诱导Th17细胞产生。Th17细胞能分泌IL-4，及少量的IFN-γ、IL5和IL-9，不分泌IL-10，也不表达Foxp3。

C57BL/6小鼠不同组织器官中NKT细胞的比较

目的比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中NKT细胞的含量、亚型和功能的特点。方法分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,利用细胞表面分子染色的方法,观察不同组织器官中CD3+NK1.1+NKT细胞及其亚型的含量;淋巴细胞经过PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察NKT细胞IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17的产生情况。结果肝脏中NKT细胞的含量为(25.2±12)%,显著高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结。肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结中NKT细胞以CD4+细胞亚群为主,而肺脏中NKT细胞以CD4-CD8-亚群为主,同时肠系膜淋巴结的NKT细胞中存在CD4+CD8+亚群。不同组织器官中NKT细胞IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17产生的能力有差别。结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的NKT细胞在含量、表型和功能方面可能存在明显的差异。

C57BL/6小鼠γδT细胞的组织器官分布和功能特点

目的比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点。方法分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流式细胞仪观察γδT细胞占从不同组织分离的淋巴细胞及CD3+T细胞的百分比及其表型的特点。细胞经PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察γδT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况。结果γδT细胞占分离淋巴细胞中的百分含量在肝脏明显高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结(P<0.05),而γδT细胞在肠系膜淋巴结CD3+T细胞的百分含量要显著的低于其他脏器(P<0.05)。不同组织器官中γδT细胞以CD4-CD8-表型为主,还存在少量CD8+γδT细胞。在肠系膜淋巴结γδT细胞中CD4+细胞的量明显高于其他器官,且明显可见一群CD4+CD8+细胞。不同组织中γδT细胞中IL-17+的细胞量要明显高于IFN-γ+和IL-4+细胞。γδT细胞基本不分泌IL-9。肺脏的γδT细胞分泌细胞因子的能力最强,其IL-17+细胞的量达到(26.6±12.1)%。IFN-γ+细胞的量在肝脏和肺脏中较高,分别为(1.36±0.37)%和(1.6±0.7)%。结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结γδT细胞的含量、表型和功能方面存在显著性差异。

C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞的特点

目的:观察C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞的含量、亚型和细胞因子产生能力方法:分离正常C57BL/6小鼠肝脏的淋巴细胞,通过细胞表面分子染色以及流式细胞术(FCM)检测NK1.1^+NK细胞、CD3^+T细胞和CD3`+NK1.1^+NKT细胞的含量及其表面CD4、CD8分子的表达情况;细胞经过PMA+Ionomycin刺激后,应用细胞内细胞因子染色并结合FCM检测NK1.1^+NK细胞、CD3^+T细胞和CD3^+NK1.1^+NKT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况。结果:肝脏中NKT细胞的含量为(21.51±13.02)%,高于NK细胞和T细胞(P<0.05)。NK细胞以CD4^-CD8^-亚群为主,T细胞和NKT细胞均以CD4^+细胞亚群为主。NKT细胞分泌的IL-4的比例高于NK细胞和T细胞(P<0.05)。T细胞分泌IL-17的能力明显强于NK细胞和NKT细胞(P<0.05),IL-9^+细胞在三种细胞中含量不高(<0.03%)。结论:C57BL/6小鼠肝脏中NK细胞、T细胞和NKT细胞含量。

玉屏风药液对环磷酰胺抑制的C57BL/6小鼠免疫功能的影响

目的观察玉屏风(YPF)药液对环磷酰胺(CY)抑制C57BL/6小鼠免疫功能的影响。方法腹部皮下注射环磷酰胺制作免疫抑制小鼠模型,分别使用玉屏风药液50 mg/d和100 mg/d给C57BL/6小鼠灌胃,连续7 d。7 d以后,眼眶取血,血常规检测血细胞含量;制备脾淋巴细胞悬液,计数;流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的含量;使用R848刺激细胞72 h,MTT法检测细胞的增殖情况。结果玉屏风药液可以抑制环磷酰胺诱导的小鼠血液中白细胞减少,部分缓解环磷酰胺所致的脾淋巴细胞减少,增加脾细胞中B细胞、NK细胞的含量,部分提高环磷酰胺免疫抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖能力。结论玉屏风药液能够部分缓解环磷酰胺对C57BL/6小鼠免疫功能的抑制作用。

R848协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞功能改变

目的观察并初步分析1-[4-amino-2-(ethoxymethyl)imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-2-methylpropan-2-ol(R848)协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏中淋巴细胞发生的功能改变。方法分离正常C57BL/6小鼠脾脏的淋巴细胞,分别在anti-CD3、R848及anti-CD3+R848的作用下培养72 h。通过MTT法观察淋巴细胞的增殖情况;采用ELISA的方法检测脾脏淋巴细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;使用细胞内细胞因子染色的方法检测CD4+T和CD8+T细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;再用细胞表面分子染色的方法检测R848诱导不同淋巴细胞群活化的情况。结果单独使用R848对淋巴细胞的增殖作用不明显,但anti-CD3+R848可促进淋巴细胞的增殖;R848能辅助anti-CD3明显诱导脾CD4+T和CD8+T细胞分泌IFN-γ和IL-4;R848能够使淋巴细胞活化,且以B细胞亚群为主。结论 R848能够协助CD3抗体促进脾脏淋巴细胞的增殖,分泌IFN-γ和IL-4,其机制与R848能明显促进B淋巴细胞活化有关。

玉屏风散对不同证型反复呼吸道感染患儿的流感易感性干预作用研究

目的探讨不同证型反复呼吸道感染(RRTI)患儿的流感易感性机制及玉屏风散对其流感易感性的干预作用。方法选取2015年3月至2017年3月RRTI患儿150例进行中医辨证分型,肺脾气虚型、气阴两虚型、肺虚型、脾虚型、脾肾两虚型各30例。同期选取30例健康儿童作为健康对照组。RRTI患儿予玉屏风散口服,服药前后检测血IgG1、IgG3、唾液SAα2-6Gal和SAα2-3Gal的水平,与健康对照组儿童进行比较。结果与健康对照组比较,治疗前RRTI患儿中肺脾气虚型、气阴两虚型、肺虚型的IgG1、IgG3水平均下降;使用玉屏风散治疗后,肺脾气虚型、气阴两虚型、肺虚型患儿的IgG1、IgG3水平较治疗前显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与健康对照组比较,治疗前RRTI患儿中肺脾气虚型、脾虚型、脾肾两虚型的SAα2-6Gal和SAα2-3Gal水平下降明显;使用玉屏风散治疗后,肺脾气虚型、脾虚型、脾肾两虚型患儿的SAα2-6Gal和SAα2-3Gal水平均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RRTI患儿免疫指标的数值变化与中医辨证分型有一定关系,IgG1、IgG3、SAα2-6Gal和SAα2-3Gal的检测可作为辨证分型的参考依据和流感易感性的评价指标。玉屏风散可调节不同证型RRTI患儿的IgG1、IgG3、SAα2-6Gal和SAα2-3Gal含量,降低对流感病毒的易感性。

黄芪多糖佐剂对脾脏NK细胞及NKT细胞的作用

目的观察脾脏NK细胞及NKT细胞在黄芪多糖(APS)发挥免疫佐剂功能的作用。方法使用鸡卵白蛋白(OVA)与APS经皮下免疫C57BL/6小鼠3次。末次免疫7～14d,取血清,使用ELISA观察OVA特异性抗体的含量;分离脾脏淋巴细胞,使用流式细胞仪检测NK和NKT细胞的百分比含量;使用PMA和Ionimycin刺激淋巴细胞,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ和IL-4的分泌情况。结果 APS组小鼠OVA特异性抗体含量明显高于OVA组小鼠(P<0.05),但小鼠脾脏内NK和NKT细胞的百分比含量与OVA组和正常小鼠差别不大(P>0.05)。经PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NK细胞中IL-4+细胞明显高于OVA组和正常组(P<0.05),且IFN-γ+细胞的比例明显下降(P<0.05);虽然经过PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NKT细胞中IL-4+细胞升高不明显,但是IFN-γ+细胞的比例明显下降(P<0.05)。结论 APS可以通过调节NK和NKT细胞的功能来促进体液免疫应答。

SARS S_(603-620)表位核酸疫苗诱导BLAB/c小鼠产生特异性体液免疫应答

目的构建SARSS抗原的B细胞表位核酸疫苗并观察其免疫效果。方法将已经鉴定的SARSS抗原的B细胞表位S603-620的编码DNA序列插入真核表达载体PCI中,构建核酸疫苗(PCI-S603-620)。使用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切,电泳及DNA测序鉴定。使用脂质体将PCI-S603-620转入293A细胞,使用ELISA检测其在真核细胞中的表达。使用PCI-S603-620免疫小鼠,ELISA检测其诱导的抗体情况。结果对PCI-S603-620进行酶切鉴定,电泳结果表明目的基因片段分子量为100bp左右。PCI-S603-620的DNA测序结果表明其序列与设计序列吻合。PCI-S603-620能在转染的293A细胞中表达。PCI-S603-620免疫小鼠可以诱导特异性抗体产生,效价为1:400。该抗体可以特异性识别SARSS抗原。结论成功构建SARSS抗原的B细胞表位核酸疫苗(PCI-S603-620)。