云南花椒黄花病相关病原分析

【目的】花椒黄花病(flower yellowing disease,FYD)是近年来花椒重要病害之一,可导致感病花椒减产,本研究应用高通量测序技术分析花椒黄花病潜在病原,为该病害病原种类鉴定、病害防治提供理论依据。【方法】取竹叶花椒永青1号的黄花病植株4份和无症植株2份的花、叶样品进行病毒组测序分析。【结果】测序数据分析发现,6个样品共有484个contigs与病毒序列相似,分别匹配到12个病毒科的15种病毒。6个样品均检测出在九叶青花椒上已报道的4种病毒:四川青花椒线虫多面体病毒(GSP⁃NeV)、四川青花椒悬钩子病毒(GSPIV)、四川青花椒耳突花叶病毒(GSPEV)、四川花椒弹状病毒(GSPNuV)。发现花椒中未报道的2种新病毒,分别命名为永青花椒相关幽影病毒(Yongqing green pepper⁃associated umbravirus)与永青花椒相关负链RNA病毒(Yongqing green pepper⁃associated ssRNA negative⁃strand virus);此外,在感病D⁃2和无症H⁃1样品中发现马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)。从感病样品D⁃2、D⁃3、D⁃4发现乙型线形病毒科(Betaflexiviridae)香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)、马铃薯H病毒(Potato virus H,PVH)和马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS),在D⁃1花椒发现葡萄茎痘相关病毒(Gra⁃pevine rupestris stem pitting⁃associated virus,GRSPAV)。【结论】从永青1号花椒测序样品中均发现已报道的4种病毒以及未报道的2种新病毒,并检测出仅存在于感病组的香石竹潜隐病毒属,推测高表达的香石竹潜隐病毒属病毒或可视为诱发花椒黄花病的因素之一。

长梗喉毛花中3种化合物抗烟草花叶病毒活性分析及其对4种防御酶活性的影响

【目的】评价从长梗喉毛花[Comastoma pedunlulatum(Royle ex D.Don)Holub]中分离得到的3种化合物的抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性及其对烟草4种防御酶活性的影响,为研发有效防治TMV的植物源农药提供先导化合物和理论依据。【方法】以心叶烟为试验材料,设化合物处理(当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素)、空白对照(CK)和药剂对照(8%宁南霉素)处理,采用半叶枯斑法测定化合物对TMV侵染的预防保护和钝化作用;以普通烟草栽培品种K326为试验材料,设对照[空白对照(CK)和接种对照(CK+TMV)]、宁南霉素[药剂对照(PC)]、当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素处理,利用防御酶检测试剂盒测定各处理烟草叶片中多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性。【结果】先施用被试物后接种TMV,当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素在100μg/mL时均减少TMV在心叶烟上的枯斑数目,对TMV的抑制率分别为50.05%、57.55%和61.73%,对TMV侵染均具有一定的预防保护作用,对照药剂宁南霉素对TMV的抑制率为47.75%;TMV与被试物溶液混合接种心叶烟时,当药黄素和高杯喉毛花内酯A对TMV的抑制率分别为51.65%和45.66%,对TMV侵染有较好的钝化作用。分别施用当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素后,烟草叶片防御酶PPO活性分别在处理后24、12和24 h达最大值;PAL活性均在处理后72 h达最大值;POD活性分别在处理后24、48和72 h达最大值。PPO、PAL和POD活性在最大值时与CK均呈显著差异(P<0.05),而SOD活性在最大值时与CK无显著差异(P>0.05)。【结论】分离自长梗喉毛花的3种化合物当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素使用浓度为100μg/mL时对TMV均有较好的预防保护活性,具有作为抗TMV植物源农药或先导化合物的潜力。

植物源天然产物AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的田间防效

【目的】评价植物源天然产物3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO)对田间番茄斑萎病毒属病毒病的防控效果,为AHO开发成为新的抗病毒剂提供科学依据。【方法】选取5%AHO水剂和生产中常用的7种抗病毒剂(超敏蛋白、氨基寡糖素、盐酸吗啉胍、吗呱乙酸铜、宁南霉素、啸克、苯并噻二唑)在烟株移栽还苗后进行叶面喷施3次,药后调查烟株病毒病发生情况。【结果】供试药剂中除啸克外对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病均有很好的防控效果,连续施用3次后可较好地控制烟田番茄斑萎病毒属病毒病的发生和发展,其中,AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的相对防效为79.86%,略低于宁南霉素的相对防效(80.60%);苯并噻二唑的相对防效最高,达83.75%;氨基寡糖素和吗呱乙酸铜的相对防效相当,分别为71.72%和72.67%;超敏蛋白和盐酸吗啉胍的相对防效稍低,分别为68.55%和67.82%;啸克的相对防效最低,仅为44.78%。【结论】AHO对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病有很好的防控效果,其对番茄斑萎病毒属病毒病的效果优于部分市售药剂,具有开发成为防控番茄斑萎病毒属病毒病抗病毒剂的潜力。

红河州烟草苗期烟草花叶病毒的检测与分析

及时剔除带毒烟苗是防控烟草花叶病的重要一环,该研究采用TAS-ELISA检测与电镜负染色法复检相结合,对2011年红河烟区1308份苗期样品进行TMV检测。结果表明,红河烟区不同育苗点烟苗TMV检出率差异较大,平均检出率为2.52%;不同烤烟品种烟苗带毒率也有差异,烟苗TMV阳性率与品种的抗性无直接相关性,而与育苗地点和育苗环境有关。该研究对筛选无毒壮苗,切断TMV传播途径、减少TMV对大田烟苗的感染具有重要意义。

2种不同类型病毒抑制剂防控TMV的田间药效比较

为评价不同类型病毒抑制剂在不同发病条件下对烟草花叶病的防控效果,选用2种生物制剂(AHO、宁南霉素)和2种化学农药(吗胍.乙酸铜、烯.羟.硫酸铜)进行田间药效试验。大田接种烟草花叶病毒(TMV)的试验表明,AHO和吗胍.乙酸铜对TMV的平均防效较高,分别为41.8%和39.8%,宁南霉素和烯.羟.硫酸铜对TMV的平均防效较低,分别为25.4%和14.5%;在自然发病状态下,AHO对TMV的平均防效为45.5%,宁南霉素的平均防效次之,为36.6%,而烯.羟.硫酸铜和吗胍.乙酸铜的平均防效则分别为28.7%和16.2%。AHO在不同带毒环境下防控烟草花叶病的效果都优于其他3种市售药物,表明其具有开发成为绿色抗烟草花叶病新型农药的潜力。

芋螺毒素MⅦA与GST的融合表达及其镇痛活性的测定

目的构建芋螺毒素MⅦA基因的融合表达质粒pGEX-2T/CTXMⅦA在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白的镇痛活性进行测定。方法根据芋螺毒素MⅦA的氨基酸序列,按大肠杆菌偏爱密码子化学合成CTX MⅦA基因。把合成的CTX MⅦA基因克隆到谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-2T中,构建质粒pGEX-2T/CTX MⅦA。将此质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后获得融合蛋白GST-CTX MⅦA,用谷胱甘肽偶联的Sepharose 4B柱对融合蛋白进行纯化。热板法测定其对小鼠的镇痛活性。结果获得的融合蛋白GST-CTX MⅦA使小鼠疼痛阈值有显著提高。结论基因工程产生的GST-CTX MⅦA融合蛋白具有明显的镇痛活性,且镇痛活性具有浓度依赖性,可以为进一步的科研及临床应用开辟新的途径。

生物信息学在基因组和蛋白质研究中的应用

目的:人类基因组计划在世界范围内的开展促进了生命科学的进步,在此过程中产生了大量的基因组与蛋白质结构和序列数据库资源,促进了生物信息学的发展;同时生物信息学在基因组和蛋白质研究中也起着重要的作用。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2006-01文章,检索词“bioinformatics”,并限定语言种类为English;同时手工检索2000-01/2006-01的相关文章,限定语言为中文,检索词为“生物信息学;基因组;蛋白质结构”以及基因组相关方面的书籍。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:生物信息学的发展及其在基因组和蛋白质研究中的应用。排除标准:重复性研究。资料提炼:从检索资料选取34篇(含2篇中文文献或书籍)关于生物信息学及其应用的文章,进行综述。其中与基因组研究相关的文献4篇,与蛋白质研究相关的文献20篇,其他文献10篇。资料综合:随着人们对基因组和蛋白质研究的深入,对基因表达模式、蛋白质结构、蛋白质-蛋白质相互作用等分析得到的数据越来越多,为生物信息学提供了丰富的资源,促进了生物信息学的发展;同时生物信息学在基因序列比对、大规模基因功能表达谱的分析、新基因的发现与鉴定等方面以及蛋白质序列比较分析、蛋白质空间结构和功能预测等研究中也起着重要的作用,促进了DNA和蛋白质的研究。结论:基因组和蛋白质组研究与生物信息学技术互相推动,并行发展;生物信息学在基因组和蛋白质研究中发挥着重要的作用。

在植物生物化学实验教学中培养学生的创新能力

结合植物生物化学实验教学实际,通过改革实验内容、教学方式、改进教学手段,实施合适的实验成绩评价办法,提出了实施创新教育的措施,以求提高植物生物化学实验教学质量,获得最佳的实验教学效果,提高学生创新思维和创新能力。

2014年云南番茄、辣椒上番茄斑萎病毒属病毒与传毒蓟马的发生特点

【目的】了解云南地区番茄、辣椒上番茄斑萎病毒属病毒(Tospoviruses)与传毒蓟马的发生特点,为有效监测与防控Tospoviruses引起的斑萎病及传毒蓟马的发生流行提供理论指导和技术支撑。【方法】采用定点调查法,对云南Tospoviruses常发重灾区泸西和晋宁地区番茄、辣椒上的Tospoviruses及传毒蓟马的发生特点进行调查。【结果】2014年,泸西番茄、辣椒上斑萎病发病率和传毒蓟马种群数量均于7月7日达最高值,分别为16%、66%和1418、822头/100株。晋宁地区番茄、辣椒斑萎病发病较重,7月12日发病率达最高,分别为76%和80%,番茄上传毒蓟马种群数量在6月21日达最高峰,百株虫量为896头,辣椒在7月12日达最高峰,百株虫量为696头。经室内ELISA及分子检测,Tospoviruses种类鉴定为TSWV、TZSV;传毒蓟马种类鉴定为西花蓟马、花蓟马及棕榈蓟马,西花蓟马为绝对优势种。【结论】2014年云南泸西、晋宁等地番茄、辣椒上Tospoviruses引起的斑萎病及传毒蓟马危害严重,选择抗性品种是有效控制Tospoviruses发生流行的方法之一。针对Tospoviruses及传毒蓟马的发生特点,合理采用农业、生物、物理、化学防治等综合技术措施,才能保证蔬菜产业的健康发展。

蓖麻毒素A链的结构模建

蓖麻毒素A链（RTA）有抑制蛋白质合成的功能，可与单克隆抗体交联制备免疫毒素，用以治疗肿瘤顽症，但其免疫原性较强．天然RTA分子量大，不易渗透到肿瘤组织内部．因此，利用同源模建的方法对RTA分子进行改造，构建RTA突变体（MRTA），以改善天然RTA缺陷成为必要．近年来，生物信息学飞速发展，各种蛋白质库日益完善，计算机技术日趋成熟以及各种软件的开发，为分子结构模建提供了可能．

6种杀虫剂对烟田番茄斑萎病毒属病毒传毒蓟马的药效试验

对云南省红河州泸西县烟田番茄斑萎病毒属病毒的4种主要传毒蓟马进行药效试验。结果表明,6种杀虫剂对烟田番茄斑萎病毒属病毒传毒蓟马均有一定防效,药后1 d除0.3%苦参碱外的其余5种杀虫剂表现出了较强的速效性,对烟田蓟马的防效均在90%以上;60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂与20%螺虫乙酯悬浮剂的持效性较强,药后7 d的防效均在82%以上。

番茄斑萎病毒与传毒蓟马发生流行的相关性

对云南红河州烟田番茄斑萎病毒与传毒蓟马的发生流行动态进行了调查研究,共鉴定出西花蓟马、花蓟马和烟蓟马等3种蓟马为烟田传毒蓟马,其中以西花蓟马种群数量最多。对不同时期传毒蓟马百株虫量和TSWV发病率进行回归分析,结果表明传毒蓟马虫口数量与烟田TSWV发病率呈正相关关系,即传毒蓟马种群数量高会导致烟田TSWV的发生流行。

陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特点

【目的】探明陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特征,为绿色防控提供指导。【方法】调查和采集不同发病时期的莴苣类蔬菜斑萎病样品、田间可能的中间寄主杂草与作物、苗棚种苗,应用ELISA检测、电子显微镜负染色与超薄切片观察,确定陆良莴苣类蔬菜斑萎病伴随的病毒种类、侵染循环及其发生流行特征。【结果】陆良莴苣类蔬菜斑萎病的发病率在15%~36%,伴随的病毒仅有番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt Orthotospovirus,TSWV),细胞病理观察表明生菜斑萎病样品的细胞中仅分布TSWV粒体。TSWV的中间寄主有鬼针草,以及辣椒、马铃薯、烟草等作物。苗棚生菜种苗中TSWV的检出率100%。【结论】陆良莴苣类蔬菜主要病害是由TSWV侵染引起的斑萎病,TSWV在周年分布的鬼针草中形成初侵染源,通过传毒介体蓟马传播到莴苣类蔬菜种苗以及中间寄主作物辣椒、马铃薯、烟草等作物,并在夏秋蔬菜生产季节在这些作物及杂草之间相互传播,形成侵染循环。种苗带毒是陆良莴苣类蔬菜发病率高的主要原因,中间寄主植物的分布、蓟马传播与农事操作进一步加剧斑萎病的发生流行。

番茄环纹斑点病毒侵染辣椒挥发物成分分析及对西花蓟马行为反应影响

本试验以辣椒为寄主植物,研究西花蓟马对番茄环纹斑点病毒侵染辣椒后的行为反应,比较分析病毒侵染前后辣椒挥发物的异同。研究发现,与模拟接毒辣椒相比,西花蓟马偏好选择机械接毒辣椒,但在产卵量上二者没有显著性差异。从模拟接毒和带毒辣椒植株挥发物中共收集26种化合物,含量差异显著的物质有14种。结果表明,西花蓟马对机械接毒辣椒植株有一定的偏好,番茄环纹斑点病毒侵染能诱导辣椒植株挥发物种类和含量的变化。

几种新型烟草花叶病毒抑制剂的田间药效试验

为对室内研究筛选出的具有抗烟草花叶病毒活性的几种抑制剂进行田间药效验证,采用高压喷枪接种烟草花叶病毒后每隔一周喷施制剂的方法对几种制剂进行了田间试验.试验结果显示,含1%3-丙酮基-3-羟基羟吲哚二甲基亚砜溶液1 000倍液、含0.4%苦木素的2%3-丙酮基-3-羟基羟吲哚微乳液500倍液两种制剂在接种烟草花叶病毒4周后仍然保持44.04%和47.71%的相对防效,防治效果明显优于对照药剂.

绍兴市区9929名健康体检人群血脂水平分类及分型的统计

目的:分析绍兴市区人群血脂水平分类及分型特征。方法:收集2004-01/2005-12在绍兴文理学院附属第一医院接受健康体检的绍兴市区人群9929名的血脂资料(男/女=5314/4615,年龄20～96岁),按年龄分为青年组(20～39岁)、中年组(40～49岁)、老年前期(50～59岁)及老年(60岁以上)4组。按中国“血脂异常防治建议”并参考美国“ATPⅢ指南”将所有数据进行血脂分类及分型并分析,具体标准:总胆固醇以5.2～5.69mmol/L为边缘性增高,>5.7mmol/L为高总胆固醇血症;三酰甘油以1.7～2.26mmol/L为边缘性增高,>2.26mmol/L为高三酰甘油血症;高密度脂蛋白胆固醇以<1.03mmol/L为低水平、1.03～1.54mmol/L为合适水平,1.55mmol/L以上为高水平。结果:①总胆固醇水平:4个年龄组中超过合适水平者基本都在30%以下,只有老年女性达到了34%。他们中约15%可以诊断为高胆固醇血症,老年女性高胆固醇血症者比例达到19.2%。②三酰甘油的分布:在0.56mmol/L以下者约为5%;在1.13mmol/L以下者约为35%,在1.69mmol/L以上者各组约为35%,>2.26mmol/L者约为17%。③总胆固醇、三酰甘油都在合适范围者青年组为49%,中年组和老年前期组约为47%,老年组约为44%;从高血脂分型来说,不论是边缘性增高或明确的高血脂都是高三酰甘油略多与高总胆固醇。④高密度脂蛋白胆固醇:低水平的分布频率在各组中大致为4%,在60岁以下人群中女性(4.3%)略高于男性(3.9%),而在老年人中则相反(男性4.1%,女性3.1%);高水平者在各组男性和女性人群中约为60%,但在老年女性中高达71.5%;高高密度脂蛋白胆固醇多见于高三酰甘油者(男性16.1%,女性15.2%),而低高密度脂蛋白胆固醇则多见于三酰甘油边缘性增高型(男性15.0%,女性13.1%)。结论:绍兴市城区人群血脂异常处于一个较高的水平(异常者已达1/2),并且有年轻化的趋势(青年人中也达到了约50%)。

植物诱抗剂AHO联合茎尖培养脱除马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒

研究了植物诱抗剂3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO)联合茎尖培养从试管苗中脱除马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯Y病毒(PVY)的方法和效率。取PVS侵染的‘定薯3号’和‘定薯4号’以及PVY侵染的‘靖薯3号’和‘靖薯4号’的壮芽,茎尖剥离后培养至4~5个叶片,用100 mg/L植物诱抗剂AHO水剂喷施试管苗,每隔2 d喷施一次,共3次,末次喷施2 d后取茎尖剥离培养,获得再生试管苗。用电子显微镜负染色、ELISA、荧光定量RT-PCR检测再生试管苗的带病毒情况。结果显示,AHO对4个品种的马铃薯试管苗生长无影响,用AHO处理后再茎尖剥离培养,脱毒率均高于未处理的对照;检测结果还显示AHO处理的马铃薯再生苗的带毒量也低于未处理的对照,且随处理次数增加带毒量下降。研究结果表明,利用植物诱抗剂AHO联合茎尖剥离培养方法可以提高脱除PVS、PVY的效率,获得无病毒核心苗。

云南红河州番茄褐色皱纹果病毒检测

【目的】建立云南红河州番茄褐色果病的检测技术,为控制其传播和治疗提供支撑。【方法】采用电子显微镜负染色观察、ELISA检测以及外壳蛋白基因序列RT-PCR检测及序列分析,明确云南红河州番茄褐色皱果病的病原。【结果】电子显微镜观察到病毒粒子为长300 nm、直径18 nm的杆状病毒,ELISA检测发现与烟草花叶病毒属的烟草花叶病毒(TMV)和番茄花叶病毒(ToMV)有血清学反应;RT-PCR扩增获得的目的片段与番茄褐色皱纹果病毒的病毒基因相似性达99.81%。【结论】引起云南红河番茄褐色皱纹果病的病原是烟草花叶病毒属的番茄褐色皱果病毒。