Hu联合GM-CSF对K562细胞生长-凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨羟基脲（hydroxyurea，Hu）及Hu联合粒系-巨噬系集落刺激因子（granulocyticmacrophagecolony－stimulatingfactor，GM－CSF）对慢性粒细胞白血病（chronicmyelogenousleukemia，CML）细胞株K562细胞生长及凋亡相关基因表达的调节效应。方法：以Hu及Hu联合GM-CSF培养K562细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）来分析培养48小时后bcr-abl、bax、c－myc基因表达水平。结果：Hu显著抑制bcr－abl基因表达，促进bax基因表达，但对c－myc基因表达无影响。GM－CSF可部分桔抗Hu对bcr－abl、bax基因表达的调节效应，显著上调c－myc基因表达水平。结论：除直接细胞毒作用外，Hu可通过下调bcr－abl和上调bax基因表达水平而诱导细胞死亡或凋亡。由于GM-CSF有部分持抗化疗药物的效应，故临床上在采用Hu治疗CML患者的同时，宜慎重使用GM－CSF。

环境因素对肺癌发生的影响

肺癌每年夺走人类几百万条生命,是当今一个重大的公共健康问题.吸烟是肺癌发生的重要诱因,但仅有10%～15%的吸烟者患肺癌.随着人类生活环境及生活方式的不断变化,肺癌患者正日益增多.研究发现,除遗传因素外,肺癌的发生主要与环境因素相关,包括吸烟、空气污染、饮水及食品污染、饮食习惯的改变等;环境致癌物透过皮肤等机体自然屏障和代谢屏障而进入细胞并损伤D NA,导致细胞生长、分化及凋亡失衡而形成肿瘤.因此,改善环境对于降低肺癌发生率具有积极的影响.

用5-Fu治疗MT/p210^(bcr-abl)转基因小鼠的研究

以５－氟脲嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，５－Ｆｕ）腹腔注射治疗了１２只携有金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉ－ａ，ＣＭＬ）ＭＴ／ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ小鼠，于治疗的第５ｄ及第１０ｄ从不同脏器提取总ＲＮＡ、ＤＮＡ及蛋白质，分别进行ＰＣＲ分析、ＲＴ－ＰＣＲ检测被转移基因的表达水平及免疫沉淀法分析ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ转基因产物的激酶活性．结果表明，被转移基因在脾脏和骨髓中表达水平较高，胸腺和肾脏中呈低水平表达．５－Ｆｕ活体治疗１０ｄ后。

化疗药物联合细胞因子对bcr-abl转基因小鼠骨髓细胞生长及转基因表达的影响

应用Ｈｕ或５Ｆｕ和鼠干细胞因子（ｍＳＣＦ）及鼠白细胞介素３（ｍＩＬ３）培养含金属硫蛋白（ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病小鼠骨髓细胞，观察化疗药物及细胞因子单独或联合应用对ＭＴ／ｐ２１０（ｂｃｒａｂｌ）转基因小鼠骨髓细胞生长的影响，并采用ＲＴＰＣＲ分析培养前后骨髓细胞中转基因的表达。结果表明，ｍＳＣＦ和ｍＩＬ３联合应用时，明显促进骨髓细胞增殖及集落形成；不加细胞因子培养，则细胞增殖和转基因表达均受抑制；Ｈｕ或５Ｆｕ与ｍＳＣＦ及ｍＩＬ３联合应用时，同样抑制细胞增殖及转基因表达。提示联合应用化疗药物及细胞因子治疗ＣＭＬ是具有极好应用前景的策略。

Rad51同系物与DNA重组修复

真核细胞 Rad5 1蛋白质与原核细胞 Rec A蛋白质具有结构及功能同源性 ,是促使细胞有丝分裂及减数分裂过程中DNA同源重组的关键性蛋白质。已在酵母细胞中鉴定出 Rad5 5和 Rad5 7两种 Rad5 1同系物 ,从脊椎动物细胞中鉴定出 5种Rad5 1同系物 ,即 Rad5 1 B、Rad5 1 C、Rad5 1 D、Xrcc2和 Xrcc3。这些 Rad5 1同系物与 Rad5 1之间及各同系物之间共享 2 0 %～30 %的序列同一性 ,这些 Rad5 1同系物与 Rad5 1蛋白质共同作用而在受损

水库水体富营养化及其控制对策

随着工农业生产的发展和人口的增长,人类对水资源的需求量与日俱增,同时环境污染所导致的水体富营养化也日趋严重,水体富营养化的控制已经成为世界性的问题。我国近10年来,水体富营养化趋势也十分严重,湖泊、水库的富营养化给人类的生存环境造成了许多不利因素。改善水质、消除藻类水华已成为人们十分关心的问题。

生化研究的策略与技术发展

生物化学是研究活细胞及有机体内各种分子及其相互间化学反应的科学,即研究生命的分子基础.细胞是生物体的基本结构和功能单位,机体的众多化学反应都在细胞内进行,所以生物化学又被定义为研究活细胞的化学组成及相互反应和进程的科学,即"生命的化学".其实它涉及了细胞生物学、分子生物学和分子遗传学等几个大的学科领域.所以,生化研究的策略和技术发展对生命科学研究特别重要.由于有关生物医学科学的相互渗透以及生化与分子生物学技术的飞速进展,近两个世纪内(1780～1970年)生物化学的发展历经了从叙述生化进入功能或分子生化的阶段.在不久的将来,许多生命科学的关键问题将在分子机制和基因水平的基础上获得解决.

慢粒白血病患者血清铜、锌、铁、镁含量及bcl-2和c-myc基因表达分析

目的 :分析慢性期慢粒白血病患者血清铜、锌、铁、镁含量与 bcl- 2、c- m yc基因表达水平的变化及其相互关系 ,为慢粒白血病发生机制研究及临床诊治提供实验依据。方法 :采用原子吸收分光光度法测定血清铜、锌、铁、镁含量 ;采用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)及其扩增片段光密度扫描定量分析外周血白细胞中 bcl- 2、c-myc及内对照β- actin m RNA水平。结果 :与正常对照组比较 ,慢性期慢粒白血病患者血清锌及铁含量显著降低 ,血清镁含量及铜 /锌比值显著升高 ,血清铜含量升高但其差异无显著性 ;患者外周血白细胞中 bcl- 2及 c- myc m RNA水平均显著高于正常对照。结论 :慢粒白血病细胞中 bcr/ abl嵌合基因或其表达产物可致促进细胞增殖和 /或抑制细胞凋亡的相关基因表达增强 ,同时抑制锌、铁吸收和促进铜、镁的积累 ;血清铁、镁含量和铜 /锌比值反映出细胞增殖 -凋亡相关基因的表达水平 ,可能成为临床诊治慢粒白血病的重要参数。

水温对石磺胚胎发育的影响

通过实验室研究,对石磺(Onchidium sp.)胚胎发育过程进行了详细观察,比较了不同水温下石磺胚胎发育的速度,探讨了膜内面盘幼虫孵化出膜的主要条件.结果表明:石磺的胚胎发育过程类似于肺螺亚纲其他贝类,行体内受精,刚产出的卵为受精卵,细胞未进行分裂,卵裂从卵产出体外开始,分别经过卵裂期,囊胚期,原肠期,膜内担轮幼虫期,膜内面盘幼虫期,经过孵化期孵化出膜为自由生活的面盘幼虫期.对各阶段幼体的大小、形状、内部器官等特征以及发育变态过程进行了详细的显微观察和描述.26 ℃,28 ℃,30 ℃ 3个水温组中,从受精卵到膜内面盘幼虫孵化出膜分别需要300 h,290 h,288 h;发现影响幼虫孵化出膜的主要因素是水温和海水的刺激作用;繁殖盛期卵群工厂化水泥池自然水温孵化时间为10～14 d.并报道了水温低于23 ℃时石磺胚胎停止发育现象.

石磺繁殖生物学的实验研究

用实验室小型试验、贝类育苗场生产性试验和自然群体实地观察的方法，结合养殖池塘内石磺（Onchidium sp．）繁殖习性跟踪观察，2年内研究了沪浙地区石磺的繁殖季节，繁殖方式，繁殖力，受精卵的发育孵化，水温和盐度对胚胎发育的影响，胚胎停止发育现象，幼虫发育及变态前形态变化，对石磺繁殖生物学作了比较系统的实验研究。结果显示石磺雌雄同体，雄性先熟，异体交配，体长5cm体重10g以上的个体为繁殖的主要群体，其生物学最小型为体长3．1cm和体重3．5g；交配期多在气温22℃以上的5月中下旬至9月下旬，6-8月为繁殖盛期。产卵前经过5-10h的求爱和1-5h的交配过程，交配后15d左右产出受精卵，多在大潮日至小潮日期间3～5d内的晚间产卵；繁殖期具有6个明显的产卵高峰。卵群表面积15-30cm^2，每平方厘米卵群含卵子2650±300个，每个卵群含卵子4．4-8．0万粒。水里与潮湿环境中卵群孵化率没有明显差异；26-35℃的水温下，卵群孵化时间10-14d，水温23℃以下石磺胚胎出现停止发育的现象。适合卵群孵化的海水盐度为6～20，孵化出膜2-3d后的面盘幼虫开始摄食单胞藻。自由生活面盘幼虫经23d培育后出现明显的革质膜；变态后的幼体可能存在不断蜕去革质膜的过程，面盘幼虫的变态过程和变态条件仍有待研究。

三种养殖模式下日本鳗鲡(Anguilla japonica)养成品体色和肌肉品质的差异

随机选取池塘专养(M1)、日本沼虾套养(M2)以及水库放养(M3)三种养殖模式养成的肛长(25.91±3.26)cm的日本鳗鲡作为研究材料,比较研究了三者间在表皮色差、背肌组织物理特性和肌肉营养成分组成及含量上的差异。结果表明:(1)M1表皮色差与M2、M3均具显著差异(P<0.05),三者背、腹间的体色差异程度呈M1>M2>M3(P<0.05);(2)背肌物性指标中均具显著差异的为粘着性、弹性和回复性,前者测定值呈M1>M3>M2(P<0.05),后两者均呈M3>M1>M2(P<0.05),M3背肌最发达,M1纵肌肌束纤维排列较M2紊乱;(3)肌肉营养成分中仅水分和灰分含量均具显著差异,依次呈M3>M1>M2(P<0.05)和M3>M2>M1(P<0.05),蛋白质含量高于脂肪含量的仅为M3;(4)三者间肌肉脂肪酸、氨基酸组成均完全相同,含量排序也均基本一致,但多种不饱和脂肪酸含量却均具显著差异(P<0.05)。

病毒介导造血干细胞基因转移

造血干细胞（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌ，ＨＳＣ）是体细胞基因治疗尝试的主要靶细胞之一。造血干细胞基因转移具极大的疾病治疗潜能，可应用于治疗造血细胞及非造血系统的遗传性和获得性疾病。由于造血系统的组织形式十分严密，在造血干细胞群体内以长期重建细胞（Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇｃｅｌ，ＬＴＲＣ）为靶细胞而进行的基因转移，能保证其被基因修饰的成熟终末细胞的连续补充。

16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌

目的:运用16S rRNA基因序列分析法鉴定14种细菌,为该方法的临床应用奠定基础。方法:提取细菌DNA,采用通用引物PCR扩增16S rRNA基因片段并测序。将测序结果用Blastn在线软件在Nucleotide数据库中进行序列同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果:12种细菌可以鉴定到"种",2种细菌可以鉴定到"属"。结论:16SrRNA基因序列分析是一种有效的病原细菌鉴定方法。

盐度对石磺胚胎发育的影响

28℃水温下，实验室内比较观察了盐度为0、3、6、9、15、20、30、40八组水体中石磺（Onchidium sp．）受精卵的胚胎发育状况，并对囊胚期的胚胎进行了低盐度（0、3、6、9）培育试验。结果表明：石磺受精卵在不同盐度水体中的胚胎发育状况有很大的差异，盐度0组中的胚胎畸形率高达97％±2％，盐度3组中的胚胎畸形率达75％±2％，盐度30组中停止发育的胚胎（即单卵黄球胚胎）比例为60％±4％，盐度40组中停止发育胚胎的比例达98％±2％，盐度6、9、15、20组的胚胎能正常发育，孵化率均在90％以上；石磺卵群孵化的适宜盐度范围为6～20。囊胚期的胚胎适应低盐度的能力稍强，盐度0组中的囊胚期胚胎分裂球解体，不能正常发育；盐度3、6、9组中的囊胚期胚胎能正常发育。盐度为23．4和27．4的自然海水环境中，石磺胚胎也能正常发育和孵化。

几种饲料对石磺的暂养效果及其消化率的初步研究

用6种饲料喂养石磺,比较其生长、存活状况,从而找到人工饲养石磺的适宜饲料;利用Cr2O3湿式灰化定量法,测定了石磺对3种植物性饲料的消化率。试验结果表明,动物性饲料易败坏水质,饲养效果不佳;石磺喜食植物性饲料;饲料效果以玉米粉最好,依次为玉米粉>菜粕>豆粕>次粉>酵母>鱼粉。测定石磺对玉米粉、菜粕和次粉3种植物性饲料的平均消化率分别为21.680%,14.262%,4.871%。玉米粉喂养石磺的效果较好,实验室内能完成石磺的交配、产卵和二次交配、二次产卵等全过程;日饲料投喂比例为体重的1%～5%。

中国湖南人群GSTM1和GSTT1基因多态性与肺癌易感性关系的研究

应用病例-对照分析研究(对照组205例,肺癌病例组104例),抽提静脉血基因组DNA,采用PCR及多重PCR方法,检测谷胱甘肽转移酶GSTM1和GSTT1单独及联合缺失基因型的遗传多态性在中国湖南人群中肺癌患者和正常人群体中的分布,探讨这些多态性基因型与肺癌易感性的关系.结果显示GSTM1-/-基因型在湖南地区居民肺癌群体和正常对照人群中的频率分别为62.5%和46.3%(P<0.05);肺癌患者组GSTT1-/-基因型的频率(66.3%)显著高于正常对照组(42.4%)(P<0.05).GSTM1-/-和GSTT1-/-联合基因型在肺癌组和正常对照组中的频率分别为41.3%和22.4%(P<0.05).SPSS11.5软件统计学分析表明,这些基因型在肺癌患者组和正常对照组人群中的发生频率具有显著性差异.由此可知GSTM1基因缺失和GSTT1基因缺失分别与肺癌的易感性相关;GSTM1和GSTT1基因联合缺失与肺癌的发生和发展呈现显著正相关.

瘤背石磺人工繁育关键技术的研究

研究了瘤背石磺亲体在不同温度、盐度下受精卵的孵化及不同开口饵料、不同附着基对浮游幼虫的培育和附着效果。结果表明,不同饵料对亲体的成活率无显著影响,各组成活率均超过95%;在(27±1)℃、不换水条件下,5、10、15、20、25、30的各盐度组中,以15、20盐度组的孵化率最高,分别为96.4%、95.8%;在盐度15、不换水条件下,(24±1)(、27±1)、(30±1)、(33±1)℃温度组,受精卵产出后至孵化出膜的时间分别需319、297、2862、78 h;采用自制孵化框漂浮式孵化,孵化率高达98%;不同开口饵料试验结果表明,金藻投喂组幼体成活率最高,为87.5%;不同附着基附着培养试验10 d后,悬浮球填料组的成活率最高,达90%,且个体整齐、生长速度快,而铺泥组为43%,不加附着基组仅38%。

细胞因子受体及其活化

细胞因子受体是多样化蛋白质家族中的成员,在众多的因子中识别它们的同源配体并启动一系列的细胞信号而呈现多样化的细胞功能。虽然细胞因子受体仅被其特异的细胞因子所激活,鉴于细胞因子受体由二个或多个亚单位组成,各受体亚单位与其特异性细胞因子的反应又并非绝对专一,因而出现一些交叉反应。由于细胞因子受体介导的信号转导是一个级联反应过程,受体是否依正常途径活化对其特异的器官、组织乃至整个生物体的生命过程影响甚大。

人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究

人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。