猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白间接ELISA方法的建立

为研制特异性敏感性较好的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测方法,更好地实现PRRSV的流行病学监测和诊断,将PRRSV GDr180毒株N蛋白基因序列克隆到p ET32a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内实现了高效表达,表达形式为可溶性表达,通过Western blot证明表达产物与PRRSV GDr180株阳性血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的N蛋白经过超声、离心、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原检测血清中的PRRSV抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了能检测PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法;对方法的特异性和重复性以及与同类成品试剂盒间的应用效果对比进行了试验。结果表明,研究建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中PRRSV抗体、监测猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。

1株乳房链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在分离并研究乳房链球菌的特性。试验从南京某奶牛养殖场中分离到1株乳房链球菌,对其进行鉴定并进一步研究其生化特征、生长曲线、抗生素敏感性、培养条件优化等。结果显示,该株乳房链球菌与七叶苷等反应阳性,与棉籽糖等反应阴性;该菌在37℃、200 r/min条件下培养16~20 h达到最高菌数水平;适当增加培养基中蛋白胨的含量可提高该菌的菌数水平。药敏试验结果显示,该菌对青霉素、羧苄西林、头孢唑林等抗生素高度敏感。研究表明,试验分离的乳房链球菌可作为乳房炎疫苗的筛选株。

一株猪链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究

利用从广东某养殖场牛奶样品中分离的猪链球菌,研究该菌株的生长特性、生化特征,以及对抗菌药物的敏感程度。结果表明,该菌株在溶菌肉汤(Luria-Bertani,LB)培养基中培养16~18h后活菌数达到峰值,增加培养基中蛋白胨含量对该菌生长有促进作用;青霉素、羧苄西林、哌拉西林、头孢氨苄、头孢唑林、头孢拉定、头孢曲松等β-内酰胺类抗生素可抑制该菌生长,为临床科学合理使用抗菌药物、筛选制备疫苗,以及进一步完善猪链球菌病的防控防治措施提供参考。

牛蛙歪头白内障病的病原鉴定和药敏试验

为探明江门某牛蛙养殖场患外头白内障病牛蛙的致病病原,从具有典型歪头白内障病症状的濒死牛蛙脑和内脏组织中,分离到2株优势菌,分别为JM2023A和JM2023B;通过细菌形态、生理生化分析、16S rDNA序列比对确定、系统发育树分析等,鉴定JM2023A菌为米尔伊丽莎白菌,JM2023B菌为肺炎克雷伯菌;对30种药物进行药敏试验,结果表明,2种菌均对多数抗生素耐药。动物回归试验结果显示,米尔伊丽莎白菌和肺炎克雷伯菌均可导致牛蛙患歪头白内障病死亡,其中米尔伊丽莎白菌为主要致病菌,2种菌共同致病时,具有协同作用。

多重PCR检测副猪嗜血杆菌毒力相关三聚自转运蛋白

为建立快速检测副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)毒力相关三聚自转运蛋白(Trimeric autotransporters,Vta A)的多重PCR方法,根据HPS Vta A Vta A1和Vta A3基因为模板,设计合成了2对特异性引物,进行多重PCR扩增及反应条件的优化,并对多重PCR扩增的敏感性和特异性进行了分析.结果表明:所建立的多重PCR检测方法对HPS Vta A1和Vta A3基因分别能扩增出406和291 bp的目的条带,最小检测限为3.4×107cfu/m L;此多重PCR方法只能检出HPS Vta A1和Vta A3基因400和300 bp大小的目的条带,而不能检出胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella suipestifer)、大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica)和猪链球菌(Streptococcus suis).由此证明,所建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强和敏感性高,能够实现对HPS的快速诊断与检测.