应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱行骨关节结核血清鉴别标志物的初探

目的使用骨关节结核患者血清、类风湿关节炎患者血清及健康成人查体血清,寻找其中具有统计学差异的蛋白多肽峰作为鉴别标志峰并建立相关诊断模型,以辅助诊断骨关节结核。方法临床型研究。收集2018年8月至12月临床已确诊骨关节结核、类风湿关节炎患者入院首日治疗前的相应血清标本并同时收集健康成人查体相应血清标本作为对照。利用MALDI-TOFMS进行质谱检测后使用相关软件进行血清多肽指纹图谱数据分析,筛选差异较为明显的蛋白多肽峰以建立诊断模型。结果通过软件分析成功建立了以m/z2943.9、5929.6、7615.4、9033.8为差异蛋白多肽的骨关节结核与健康成人查体诊断模型、以m/z4195.6、5847.6、5929.6、7748.6为差异蛋白多肽的骨关节结核与类风湿关节炎诊断模型。经过验证组验证两种模型的灵敏度分别为95.00%、97.50%;特异度分别为85.71%、88.46%;准确率分别为89.58%、92.39%;ROC曲线AUC值分别为0.8859、0.8709。结论通过质谱检测及软件分析成功寻找出具有统计学差异的血清蛋白多肽标志物并建立了相关诊断模型,对于辅助诊断骨关节结核具有一定的参考价值。

基于超高效液相色谱-质谱联用技术探索结核性脑膜炎患者脑脊液的代谢特征

目的对结核性脑膜炎患者的脑脊液进行非靶向代谢组学的研究,分析其脑脊液代谢特征的改变。方法病例对照研究。收集2018年7月至2019年7月解放军总医院第一医学中心神经内科和第八医学中心结核病区临床确诊的结核性脑膜炎住院患者的脑脊液标本,同时收集已确诊的其他病原感染的非结核性脑膜炎的脑脊液标本作为对照组。其中,结核性脑膜炎组有20例,男性12例,女性8例,年龄(37.9±16.1)岁;对照组有20例,男性13例,女性7例,年龄(34.7±14.8)岁。采用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)对两组患者的脑脊液进行反相色谱正离子、反相色谱负离子和亲水色谱正离子检测,生成代谢指纹图谱,并使用SIMCA软件对其分析,选择正交偏最小二乘辨别分析(OPLS-DA)的多元统计分析方法,采用OPLS-DA模型的变量重要性投影值(阈值>1)并结合t-test的P值(P<0.05)来寻找两组患者脑脊液中的差异性代谢物质。结果在两组患者脑脊液中共发现10种差异性代谢物质,它们分别是L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-犬尿氨酸、L-蛋氨酸、L-酪氨酸、二甲基甘氨酸、L-丙氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸和L-赖氨酸,且与对照组比较,在结核性脑膜炎组均表达上调。结论结核性脑膜炎患者脑脊液中氨基酸代谢发生改变,可为结核性脑膜炎的辅助鉴别诊断和分子基础研究提供一定的实验依据。

念珠菌血症小鼠模型的建立及血清标志物初探

目的建立念珠菌血症小鼠模型,寻找辅助诊断念珠菌血症的差异多肽峰。方法SPF级ICR雄性小鼠170只,体质量27~30 g,根据随机数字表法将小鼠完全随机分为白色念珠菌感染组(n=80)、近平滑念珠菌感染组(n=80)和对照组(n=10),通过尾静脉注射的方法建立念珠菌血症小鼠模型。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测模型小鼠血清多肽谱,选择差异较为明显的多肽峰建立诊断模型。结果比较白色念珠菌感染组和对照组共得到65个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为1100.4、1581.0、3808.0这3个差异多肽峰建立诊断模型,敏感度为95.24%(40/42),特异度为90.63%(29/32),准确率为93.24%(69/74),ROC曲线下面积为0.972(95%CI:0.941~1.000);比较近平滑念珠菌感染组和对照组共得到73个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为1433.2、1148.5、4093.5、4522.2、8140.9、8234.6这6个差异多肽峰建立诊断模型,敏感度为95%(38/40),特异度为81.25%(26/32),准确率为88.89%(64/72),ROC曲线下面积为0.953(95%CI:0.903~1.000)。比较白色念珠菌感染组和近平滑念珠菌感染组,共得到78个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为2736.9、8091.5、8153.7这3个差异多肽峰建立诊断模型,区分白色念珠菌感染和近平滑念珠菌感染的准确率为98.78%(81/82)。结论通过念珠菌血症小鼠模型筛选的差异多肽峰有利于寻找辅助念珠菌血症诊断的血清标志物,为临床早期诊断及合理用药提供了依据。