目的建立以真核表达载体介导的过表达TIMP-3基因的肝癌细胞株(SMMC-7721和HepG2),探讨TIMP-3基因对两细胞增殖、凋亡、周期、侵袭等功能的影响。方法将TIMP-3质粒pCMV6-AC-GFP/TIMP-3(TIMP-3组)和空载对照质粒pCMV6-AC-GFP(对照组)稳定...目的建立以真核表达载体介导的过表达TIMP-3基因的肝癌细胞株(SMMC-7721和HepG2),探讨TIMP-3基因对两细胞增殖、凋亡、周期、侵袭等功能的影响。方法将TIMP-3质粒pCMV6-AC-GFP/TIMP-3(TIMP-3组)和空载对照质粒pCMV6-AC-GFP(对照组)稳定转染入SMMC-7721和HepG2细胞株,用Western blot技术检测细胞内TIMP-3蛋白的表达,通过MTS实验、流式细胞术、侵袭实验测定细胞的各种生物学行为。结果 Western blot检测结果显示,TIMP-3组的SMMC-7721和HepG2细胞高表达TIMP-3蛋白,而对照组细胞没有TIMP-3蛋白表达。MTS实验和流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,TIMP-3组两种细胞的增殖能力显著减弱(第5天时P=0.003,P=0.009),凋亡率显著升高(P=0.001,P=0.038),细胞周期停滞于G2/M期(P=0.030,P=0.034);体外侵袭实验结果显示,TIMP-3组两种细胞的侵袭能力较对照组显著下降(P=0.033,P=0.015)。结论 TIMP-3能显著抑制SMMC-7721及HepG2细胞的增殖和侵袭能力,并诱导细胞发生凋亡和产生G2/M期阻滞。展开更多
文摘目的建立以真核表达载体介导的过表达TIMP-3基因的肝癌细胞株(SMMC-7721和HepG2),探讨TIMP-3基因对两细胞增殖、凋亡、周期、侵袭等功能的影响。方法将TIMP-3质粒pCMV6-AC-GFP/TIMP-3(TIMP-3组)和空载对照质粒pCMV6-AC-GFP(对照组)稳定转染入SMMC-7721和HepG2细胞株,用Western blot技术检测细胞内TIMP-3蛋白的表达,通过MTS实验、流式细胞术、侵袭实验测定细胞的各种生物学行为。结果 Western blot检测结果显示,TIMP-3组的SMMC-7721和HepG2细胞高表达TIMP-3蛋白,而对照组细胞没有TIMP-3蛋白表达。MTS实验和流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,TIMP-3组两种细胞的增殖能力显著减弱(第5天时P=0.003,P=0.009),凋亡率显著升高(P=0.001,P=0.038),细胞周期停滞于G2/M期(P=0.030,P=0.034);体外侵袭实验结果显示,TIMP-3组两种细胞的侵袭能力较对照组显著下降(P=0.033,P=0.015)。结论 TIMP-3能显著抑制SMMC-7721及HepG2细胞的增殖和侵袭能力,并诱导细胞发生凋亡和产生G2/M期阻滞。