抗bcr/abl mRNA特异性核酶作用于靶基因的细胞内外切割实验

目的 将已构建的具有抗慢性粒细胞性白血病(CML)融合基因bcr/abl mRNA的含核酶载体,进行细胞内外实验,了解抗bcr/abl mRNA核酶的切割效应。方法 含有抗靶基因的真核表达载体pAVGS4经酶切后,其中抗CML核酶M1-GS RNA的DNA序列被构建到pUC19上得到pGS210,并经酶切和测序鉴定;合成bcr/abl融合位点前后的一段靶序列,克隆到pGEM-7zf(+)上得到p bcr-abl经测序鉴定,将pGS210和p bcr-abl进行体外转录,获得 M1-GS RNA及其作用底物,将两者混合、孵育,通过放射自显影术检测切割的效果;将pAVGS4转染到CML细胞株K652细胞内,通过RT-PCR方法了解核酶对于目标 RNA的作用效应。结果 p bcr-abl经酶切电泳及测序证实载体中含有目标序列,Ml-GS RNA作用于底物后,放射自显影术检测显示底物 RNA被有效切割。pAVGS4转染到K562细胞48和72h后,RT-PCR显示bcr/abl mRNA被有效切割。结论 pAVGS4可以有效地切割K562细胞内的bcr/abl mRNA,预期可作为CML分子靶向治疗的工具。

抗慢性粒细胞性白血病bcr/abl mRNA真核表达载体的构建

目的 构建一个含M1RNA、具有特异性抗慢性粒细胞性白血病 (CML)细胞融合基因bcr/ablmRNA的真核表达载体 ,以用于CML的分子靶向治疗。方法 以pTK117为模板 ,通过PCR方法合成一个带有导引序列 (GS)的M1RNA ,再将PCR产物克隆到真核表达载体pNAV 1上 ,得到重组质粒pAVGS4,转化大肠埃希菌JM 10 9,以碱裂解法小量抽提 ,酶切电泳鉴定 ,并测序鉴定。结果 以EcoRⅠ和SalⅠ酶切、1%的琼脂糖凝胶电泳显示在 5 0 0和 65 0 0bp附近各有一条明亮的条带。应用PCR方法测序的结果与模板序列一致。 结论 构建的 pNAV 1经酶切和测序鉴定 ,与目标序列一致 ,含有核酶、具有抗bcr/ablmRNA的真核表达载体构建成功 。

三种铁剂治疗缺铁性贫血的费用效果分析

目的:了解硫酸亚铁控释片、琥珀酸亚铁、多糖铁复合物的成本效果情况.方法;将105例缺铁性贫血病人(男11例,女94例,年龄14～83岁),随机分入三个治疗组,分别予以硫酸亚铁控释片、琥珀酸亚铁、多糖铁复合物治疗8周,观察疗效并计算三药的费用效果情况.结果和结论:硫酸亚铁控释片、琥珀酸亚铁、多糖铁复合物三药的完全缓解率分别为76%、40%、74%,总的有效率分别为89%、76%、81%,三药中以多糖铁复合物的不良反应最少,硫酸亚铁控释片的不良反应最常见.进行费用效果分析,以完全缓解作为判断疗效的指标.发现琥珀酸亚铁具有良好的成本效果,多糖铁复合物最差.

铁制剂治疗缺铁性贫血的随机对照临床研究

目的 了解硫酸亚铁控释片、琥珀酸亚铁、多糖铁复合物治疗缺铁性贫血的疗效及不良反应。方法 将 10 5例就诊于血液科门诊的缺铁性贫血患者 ,按照入选标准 ,以随机区组的方法随机分入 3个治疗组 ,分别予以硫酸亚铁控释片 (福乃得 ,5 0 0mg ,每日 1次 )、琥珀酸亚铁 (速力菲 ,0 .1g ,每日 3次 )、多糖铁复合物 (力蜚能 ,0 .15g ,每日 2次 )治疗 8周 .每 1～ 2周随访 1次 ,随访血常规、网织红细胞计数及药物的不良反应。治疗前及治疗结束检查血清铁、总铁结合力、血清铁蛋白等有关铁参数。结果与结论 以血红蛋白和血清铁蛋白恢复正常作为完全缓解的标准 ,硫酸亚铁控释片、琥珀酸亚铁、多糖铁复合物 3种药治疗 8周 ,缺铁性贫血的完全缓解率分别为 74%、76 %、40 % (P =0 .0 0 4) ,总的有效率分别为 81%、89%、76 % (P >0 .0 5 )。主要的不良反应为胃肠道反应 ,3种药中以多糖铁复合物的不良反应最少 ,其次为琥珀酸亚铁 ,硫酸亚铁控释片的不良反应最常见 。

抗BCR-ABL mRNA核酶诱导K562细胞凋亡效应的研究

目的探索利用抗慢性髓细胞性白血病BCR-ABL mRNA的核酶表达载体转染K562细胞诱导细胞凋亡的效应。方法应用X-tremeGENEQ2介导pAVGS4转染K562细胞,设置空载体作为对照,在转染后的24、48、72和96h分别用AnnexinⅤ+PI双染色、TUNEL等法通过流式细胞仪检测K562细胞凋亡率的变化,在转染后72h利用电子显微镜观察细胞形态学变化。结果pAVGS4转染K562细胞72h,电镜显示实验组可见大量典型的凋亡细胞,而对照组凋亡细胞少见;AnnexinⅤ+PI和TUNEL法通过流式细胞仪检测均发现在转染后24h,实验组和对照组K562细胞的凋亡率无明显差别(P>0.05),随着转染后时间的推移实验组细胞凋亡率进行性增加,而空载体对照组的凋亡率变化不大。结论pAVGS4可有效诱导K562细胞发生凋亡,核酶M1RNA有望成为分子靶向治疗有用的工具之一。

铁代谢参数在相关疾病诊断中的意义

铁是人体重要的微量元素，参与细胞内酶的催化反应。缺铁将导致含铁复合物的生理活性降低，但铁过多沉积于体内又可对细胞膜、细胞内的蛋白质和核酸造成损害。在正常生理状态下，人体对于铁代谢具有精细的调节，既避免缺铁，又防止铁过载，称为铁稳态。

骨髓增生异常综合征流行病学研究进展

<正>骨髓增生异常综合征（MDS）是一组造血干细胞克隆性疾病,现在人们对MDS的发病因素有了一定的认识。但各家报道不一,为了便于对MDS的发病情况、危险因素及预后的了解,现作一综述。1 年龄发病率 过去认为MDS是一种少见病,多发于老年人,儿童和青少年少见。但研究结果显示并非完全如此。Williamson等以医院为基础,调查了英国MDS的发病率,得出粗的年发病率12.6/10~5,虽然比估计的发病率高得多,但这个数字仍然可能低估,因为部分病人可能无症状、病情稳定或死于与MDS无关的其它原因而被漏掉;各年龄组的年发病率不同,MDS发病率随着年龄的增加在上升。德国研究得出MDS年发病率4/10~5,>70岁者MDS是急性髓性白血病（AML）的3倍。国内调查了1986～1988年天津地区MDS的年发病率0.25/10~5。发病率是否逐年上升,各家报道不一。Radund等15年的研究中没有得出MDS发病率上升的结论,他认为>

慢性粒细胞白血病的发病机制和分子靶向治疗的研究进展

95％的CML细胞内均存在特征性的BCR-ABL痛基因,它表达p210,后者具有很强的酪氨酸激酶活性,通过改变细胞的黏附性,激活细胞传导途径,抑制凋亡等导致细胞恶性转化,因此,CML是分子靶向治疗理想的疾病。针对CML进行分子靶向治疗的研究主要在DNA/RNA、蛋白质和免疫水平上进行,本文对此进行综述。

慢病毒载体用于人类疾病基因治疗研究的进展

慢病毒载体系统是一种较为新型的基因治疗载体系统,它不仅可以高效转导处于分裂期的靶细胞,而且可以转导非分裂期的细胞。目前的研究表明它是一个有应用前景的基因治疗转移系统。本文从慢病毒载体的结构、感染性、慢病毒载体系统的应用及安全性方面进行了综述。

以累及颅脑为首发症状的骨髓瘤

以累及颅脑为首发症状的骨髓瘤上海医科大学华山医院陈波斌林果为，上海２０００４０骨髓瘤是一种浆细胞的恶性肿瘤，常有神经系统表现：脊髓或神经根压迫，多发性神经病变，高粘滞血症和代谢异常（高钙血症、高尿酸血症）引起的神经症状［１］。然而，以累及颅脑为首发症...

甲氨喋呤单用及与其他化疗药物联合治疗原发中枢神经系统的弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效比较

目的比较伊达比星(idarubicin,IDA)、替尼泊苷(teniposide,Vm26)、利妥昔单抗(rituximab,R)分别联合甲氨喋呤(methotrexate,MTX)及单用MTX作为一线化疗方案治疗原发中枢神经系统的弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效。方法对2007年1月至2012年12月的原发中枢神经系统淋巴瘤患者进行回顾性研究,共纳入68例的弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma of central nervous system,CNS DLBCL)患者,收集人口学资料和临床资料。使用χ2检验、Kaplan-Meier法等统计学方法,比较MTX单用及分别联合IDA、Vm26或R 4个治疗组的缓解率、总体反应率、无失败生存期等预后指标。结果单用MTX组共20例患者,4次化疗后,7例达到了完全缓解(complete response,CR),4例部分缓解(partial response,PR),无失败生存期(failurefree survival,FFS)为15个月。MTX+IDA组共22例患者,15例达到CR,2例PR,FFS为30个月。MTX+Vm26组共20例患者,10例CR,7例PR,FFS为20个月。MTX+R组共6例患者,4例CR。FFS为12个月。结论 MTX+IDA治疗CNS DLBCL患者疗效明显优于单用MTX。

Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bak在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的 观察凋亡调节蛋白的表达与急性白血病化疗效果的关系。方法 用免疫细胞化学法对 36例急性白血病患者 (初治敏感组 11例 ,复发难治组 2 5例 )白血病细胞中凋亡调节蛋白Bcl 2、Bcl XL、Bax、Bak的表达进行分析。结果 抗凋亡蛋白Bcl 2、Bcl XL 的平均阳性细胞率复发难治组为 (4 1.6 8± 14.39) %和 (35 .96±9.95 ) % ,初治敏感组为 (15 .6 4± 8.5 1) %和 (12 .91± 8.6 3) % ,两组间差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。促凋亡蛋白Bax、Bak的平均阳性细胞率复发难治组为 (2 5 .2 8± 15 .49) %和 (15 .5 3± 10 .6 4) % ,初治敏感组为 (2 1.5 5±12 .5 8) %和 (13 .2 3± 8.36 ) % ,两组间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。Bcl 2、Bcl XL、Bax、Bak对 36例急性白血病缓解率影响的Logistic回归分析表明 ,Bcl XL 是其中降低急性白血病缓解率的最重要因素。结论 Bcl 2、Bcl XL在急性白血病MDR发生中起调节作用 ,并且Bcl XL 可能比Bcl

成人原发骨髓增生异常综合征患者巢式病例对照研究队列的建立及转化为白血病危险因素的研究

目的:建立成人原发骨髓增生异常综合征(MDS)患者巢式病例对照研究队列,对该队列中MDS患者的临床特点、WHO分型和转化为白血病危险因素进行研究,旨在进一步分析我国MDS患者的临床特征和转化为白血病的危险因素。方法:采用前瞻性方法收集连续性样本,对上海市中美联合白血病协作组24家医院提供的病例进行细胞形态学、流式细胞术免疫分型、细胞遗传学(包括染色体G显带和荧光原位杂交技术)及骨髓病理检查,采用WHO标准进行诊断和分型,并进行严密随访。白血病转化累积风险率用Kaplan-Meier方法计算。Log-rank时序检验用于MDS转化为白血病的单因素分析。用COX回归模型进行MDS转化为白血病的多因素分析。结果:经上述综合诊断方法,共有435例患者诊断为MDS。截至到随访终点,该队列全部患者中383例(88%)获得随访,52例失访(12%)。中位随访时间20.3(4.2-57.1)个月。该队列中共有41例转化为急性白血病(病例组),342例未转化为急性白血病(对照组)。该队列患者的中位发病年龄为58(18-90)岁,男女比例为1.33∶1。难治性血细胞减少伴多系病态(RCMD)病例所占比例最高(65.5%),而难治性贫血(RA)(2.3%)、环状铁幼粒细胞难治性贫血(RARS)(1.1%)和5q-综合征(0.5%)所占比例较低。染色体异常率为38.7%,以+8最多见,占所有病例的16.7%(71例)。41例MDS转化为白血病患者中位转化为白血病时间为4(1-25)个月。单因素分析结果表明,年龄(P=0.028)、性别(P=0.018)、白细胞计数(P=0.006)、中性粒细胞绝对值(P=0.029)、WHO分型(P=0.000)、骨髓原始细胞比例(P=0.000)、IPSS染色体危险分组(P=0.000)以及IPSS预后分组(P=0.000)共8个变量与MDS转化为白血病相关。COX回归模型多因素分析结果确定,年龄(P=0.002)、性别(P=0.000)、WHO分型(P=0.000)、IPSS染色体分组(P=0.045)和骨髓原始细胞比例(P=0.048)为MDS转化为白血病的危险因素。结论:建立了我国435例成人原发MDS患者的研究队列,MDS患者的临床特点和WHO亚型分布均与西方国家存在不同。年龄、性别、WHO分型、IPSS染色体分组和骨髓原始细胞比例为本研究中MDS转化为白血病的危险因素。

多种雷公藤单体抑制HL-60细胞腺苷脱氨酶活性

目的研究多种雷公藤单体对HL-60细胞腺苷脱氨酶(ADA)的影响和诱导细胞凋亡作用。方法分别用雷公藤春碱、雷公藤内酯甲、雷公藤乙素、雷公藤黄素、雷公藤呋喃南蛇碱、雷公藤定碱(10mg/L、1mg/L、0.1mg/L)与HL-60细胞共孵育24h后测定ADA活性,选出抑制作用最强的雷公藤内酯甲。将HL-60细胞与雷公藤内酯甲10mg/L、1mg/L、0.1mg/L以及0.1mg/L雷公藤内酯甲+腺苷0.5mmol/L、腺苷0.5mmol/L共孵育24h后测定细胞凋亡率。结果①雷公藤内酯甲和雷公藤呋喃南蛇碱均能明显抑制HL-60细胞ADA活性(P<0.01),抑制作用与浓度成正比;雷公藤春碱仅在10mg/L浓度时有明显的ADA抑制作用(P<0.01);雷公藤黄素、雷公藤定碱与雷公藤乙素无明显ADA抑制作用(P>0.05)。②HL-60细胞与雷公藤内酯甲10mg/L、1mg/L作用均可见明显的凋亡,单加内酯甲0.1mg/L时或单加腺苷时与对照组比较凋亡率无显著差异,但同时再加入腺苷有很高的凋亡率,两者有协同作用。结论雷公藤内酯甲、雷公藤呋喃南蛇碱和雷公藤春碱等雷公藤单体在一定浓度下对HL-60细胞ADA有抑制作用,可能是ADA一种抑制剂。雷公藤内酯甲在抑制细胞ADA活性的同时也造成明显的细胞凋亡。

关注淋巴瘤,不仅仅因为那些名人

发病率上升 青壮年好发 最近，年仅30岁的抗癌女漫画家熊顿因患淋巴瘤去世；之前，电视播音员罗京、主持人英子、青年演员李钰、二人转演员李政春、歌手阿桑等也都因为淋巴瘤而令人扼腕地早早离世。淋巴瘤，这个皿液系统恶性肿瘤的名称一次次进人大众的视线。

铁缺乏症的临床流行病学研究

目的调查上海地区高危人群铁缺乏症的患病率和危险因素；评价铁参数诊断缺铁的价值；铁剂治疗缺铁性贫血的费用效果。方法采用临床流行病学的研究方法，包括横断面调查、病例对照研究、诊断试验评价及费用效果分析。结果月经期妇女、妊娠妇女和青少年缺铁性贫血的患病率分别为１１．３９％，１９．２８％及９．８４％，缺铁的患病率分别为４３．４３％，６６．２７％及１３．１７％；主要的危险因素月经期妇女为月经过多，青少年为营养因素。ＲＯＣ曲线分析表明血清铁蛋白在诊断缺铁，血清可溶性转铁蛋白受体诊断慢性病贫血合并缺铁具有较高诊断价值。琥珀酸亚铁比硫酸亚铁控释片及力蜚能具有较好的费用效果。结论预防月经过多及营养不良可降低缺铁的患病率，在缺铁诊断中推荐血清铁蛋白和血清可溶性转铁蛋白受体，在缺铁治疗中推荐琥珀酸亚铁。

γ射线辐照抑制淋巴细胞增殖的剂量——效应关系研究

目的 :研究γ射线辐照灭活淋巴细胞增殖活性的剂量—效应关系 ,探讨γ射线辐照血液预防输血相关性移植物抗宿主病 (TA -GVHD)的合适辐照剂量。方法 :取人外周血淋巴细胞 ,用 7.5、15、30Gyγ射线辐照 ,检测不同剂量γ射线对淋巴细胞增殖的抑制作用。结果 :30Gyγ射线辐照可以有效抑制淋巴细胞增殖 ,15和 7.5Gy辐照抑制作用不充分。结论 :为了有效抑制淋巴细胞的增殖活性和预防输血相关性移植物抗宿主病 ,30Gy是γ射线辐照的合适剂量。

再生障碍性贫血85例临床分析

目的 :总结 85例再生障碍性贫血 (再障 )患者临床发病特点及治疗效果。方法 :采用统一的调查表登记我院 10年间确诊的再障患者 ,用回顾性方法进行资料分析。结果 :85例再障患者中 15～ <45岁的患者占6 7.1%。再障患者中 AB血型比例较少。 43.5 %再障患者有 CD4/ CD8倒置。慢性再障的治疗有效率为 6 8.2 % ,重型再障为 5 3.1% ,纯红再障为 77.8%。慢性再障中 CSA和雄激素联合应用的有效率为 72 .7% ,单用雄激素有效率为 6 5 .5 % ;重型再障中 CSA和雄激素联合应用的有效率为 5 8.8% ,单用雄激素有效率为 33.3%。慢性和急性再障2年生存率分别为 88.0 %和 38.2 %。院内死亡 2 0例中 ,6 0 %死于颅内出血。结论 :雄激素是治疗慢性再障的主要药物 ,雄激素和 CSA联合应用可提高疗效。雄激素治疗重型再障效果不佳 ,目前主张用 CSA、ATG治疗 ,或CSA、ATG、大剂量甲泼尼龙。

血浆的循证输注

随着输血技术的不断进步，成分输血已成为临床用血的常规，但在临床实践中成分输血的应用是否完全遵循循证医学的原则，实际情况不容乐观。在参考发达国家关于临床用血指南的基础上，现就血浆输注指征作一概述。