葛根素通过AMPK/ASMase激活自噬减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性

目的探讨葛根素减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性的机制。方法将对数生长期的细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照卡托普利组(1 mmol·L^(-1))及葛根素低(20 mmol·L^(-1))、中(40 mmol·L^(-1))、高(80 mmol·L^(-1))剂量组。除正常对照组外每组加入阿霉素5 mmol·L^(-1)共同孵育。通过CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞活力,ROS探针检测ROS产生水平;HBAD-mcherry-EGFP-LC3腺病毒转染检测自噬流;Western Blot法检测Beclin-1、LC3、p62、p-AMPKα、AMPKα蛋白表达水平;溶酶体探针检测溶酶体功能;免疫荧光检测酸性鞘磷脂酶(ASMase)和溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)相对荧光强度和共定位程度;分子对接分析预测葛根素与ASMase的结合能力。基因富集分析揭示差异表达基因。结果与正常对照组比较,模型组细胞活力降低(P<0.01),LDH和ROS的释放水平升高(P<0.05,P<0.01),自噬小体数量增加(P<0.01)而自噬溶酶体数量减少(P<0.05),Beclin-1蛋白表达及LC3-II/LC3-I比值下降(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01),溶酶体荧光强度降低(P<0.01),ASMase的荧光强度升高(P<0.01),ASMase与LAMP1的免疫荧光共定位现象增加(P<0.01),p-AMPKα/AMPKα蛋白表达比值下降(P<0.05)。与模型组比较,葛根素高剂量组细胞活力回升(P<0.05),葛根素中、高剂量组LDH水平呈现下降趋势(P<0.05),葛根素低、中、高剂量组ROS水平呈现下降趋势(P<0.01),葛根素高剂量组自噬小体数量减少(P<0.01),葛根素低、中、高剂量组自噬溶酶体数量增多(P<0.05,P<0.01),葛根素高剂量组Beclin-1蛋白表达比值上升(P<0.05),LC3-II/LC3-I蛋白表达比值上升,p62蛋白表达下降(P<0.01),葛根素低、中、高剂量组溶酶体荧光强度升高(P<0.05,P<0.01),葛根素中、高剂量组ASMase荧光强度降低(P<0.05),ASMase与LAMP1的免疫荧光共定位现象减少(P<0.01),p-AMPKα/AMPKα蛋白表达比值上升(P<0.01)。葛根素与ASMase分子对接分析结合能是-8.6 kcal·mol^(-1)。基因富集分析显示阿霉素诱导的心脏毒性模型差异基因与细胞凋亡、自噬和溶酶体功能有关。结论葛根素可以通过AMPK/ASMase调控自噬,恢复自噬通量,减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性,保护心肌细胞。

支气管哮喘缓解期中医药治疗的适宜性技术筛选研究

目的:筛选支气管哮喘缓解期中医药治疗的适宜性技术,以供临床参考。方法:检索相关平台及数据库,例如知网、维普、万方等,将所有研究支气管哮喘缓解期中医药治疗的文献纳入,筛选适宜性技术,提供评估指标,做好评价工作。结果:筛选后,共计获得160个治疗技术,主要包括穴位贴敷、中药复方,评分分布:24. 856至34. 305,评分最高为补肺颗粒,可治疗哮喘缓解期肺肾两虚。结论:初步筛选10项哮喘缓解期中医药治疗适宜技术,包括补肺颗粒、邵氏阳虚哮喘贴、玉屏风散等,值得临床推荐。