B细胞型幼淋巴细胞白血病一例报道及回顾复习

目的:提高对B细胞型幼淋巴细胞白血病(B-PLL)认识及诊断。方法:回顾分析本院一例B-PLL患者的临床表现、骨髓细胞形态学、流式细胞免疫分型、骨髓病理活检等临床资料,结合相关文献进行学习讨论,并与慢性淋巴细胞白血病(CLL)、T细胞幼淋细胞白血病(T-PLL)、毛细胞白血病等疾病进行鉴别诊断。结果:骨髓形态学:淋巴系异常增生,多为幼淋巴细胞,占87.0%,其胞体较大,呈圆形或椭圆形;胞浆量较多,呈蓝色或淡蓝色;核多呈圆形,可见凹陷,染色质较疏松,核仁大而明显,1~2个。流式细胞免疫分型:考虑为成熟B淋巴细胞增殖性疾病,慢性淋巴细胞白血病遗传学FISH检测5项均为阴性,排除其它淋巴增殖性疾病。综合患者骨髓形态学、临床表现及其它相关检查,考虑患者为B细胞幼淋细胞白血病。结论:外周血和骨髓中出现大量的幼淋巴细胞是确诊的B-PLL的必要条件,B-PLL的诊断主要依赖形态学结果、临床表现、免疫表型、遗传学等检查结果综合判定。

卵巢癌肿瘤标记物HE4基因的分子克隆与蛋白表达

目的构建HE4基因及蛋白表达系统,用于卵巢癌的早期诊断。方法提取卵巢癌细胞H08910的总RNA,利用RT-PCR技术扩增HE4基因,然后将该片段进行T-A克隆并测序鉴定,纯化回收后亚克隆于原核表达载体PGEX-4T-1中,然后提取质粒,酶切鉴定,最后经IPTG诱导,原核表达重组子在TOP10宿主菌进行表达,并进行SDS-PAGE、WesternBlot分析与鉴定。结果应用RT-PCR技术,从卵巢癌HO8910的总RNA中扩增到一条大小约为400bp的片段,经T-A克隆与测序鉴定,证实此片段为HE4基因,将PGEX-4T-1重组子转化入宿主菌,用IPTG诱导菌体表达HE4重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和WesternBlot鉴定证实,在相对分子量约39000处可见明显的特异性的高表达条带。结论已成功克隆HE4基因,并经IPTG诱导在TOP10宿主菌中表达了相应的蛋白,为进一步制备卵巢癌的早期诊断试剂奠定基础。

系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞的表达

目的探讨系统性红斑狼疮患者(SLE)外周血CD4+CD127-调节性T细胞(Treg)的表达水平及意义。方法应用流式细胞术检测SLE患者(10例SLE活动期、10例SLE非活动期)和20例健康志愿者外周血CD4+、CD4+CD127-Treg及CD4+CD25+CD127-Treg的表达水平。结果活动期组CD4+T细胞占淋巴细胞的比例显著高于非活动期组,而CD4+CD127-和CD4+CD25+CD127-Treg显著低于非活动组。非活动期组CD4+T淋巴细胞、CD4+CD127-Treg和CD4+CD25+CD127-Treg较健康对照组差异无显著性。结论由于缺乏CD4+CD127-Treg,SLE免疫抑制功能降低,提示Treg可能在SLE的发病机制中发挥重要作用。

血清与尿液标本巨细胞病毒DNA联合检测在肾移植受者中的应用价值

目的探讨血清和尿液标本中巨细胞病毒(CMV)DNA的检测对肾移植受者的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测174例临床肾移植受者血清与尿液中巨细胞病毒DNA载量并对其进行统计分析。结果 174例受者中尿液标本CMV-DNA阳性率(16.1%)明显高于血清(5.2%),差异具有统计学意义(P<0.05)。通过对实验结果进行比较分析发现,尿液标本灵敏度明显高于血清标本。结论临床选择CMV的送检样本类型对提高其检出率具有重要意义,同时检测能较大地提高肾移植受者CMV的检出率。

液相芯片法检测终末期肾病患者胞外Th1/Th2细胞因子与促炎细胞因子

目的探讨终末期肾脏病(ESRD)患者胞外Th1/Th2细胞因子的状况和临床意义。方法选取12例ESRD患者为实验组,12例健康人为对照组,运用液相芯片技术(SA)测定各实验组血清中Th1/Th2和促炎因子的水平,同时用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测细胞因子白细胞介素-8(IL-8)的水平。通过用ELISA和液相芯片法同时检测IL-8的相关性来评估液相芯片法的稳定性和准确性。结果ESRD患者血液透析前IL-10水平与对照组相比有所上升;血液透析后IL-1β水平与对照组相比降低;而血液透析前后肿瘤坏死因子-β(TNF-β)和IL-8水平均降低。ESRD患者血液透析后IL-1β、IL-4、IL-8和IL-10水平与血液透析前相比均有下降。在检测IL-8时,液相芯片法和ELISA表现出显著的相关性(P<0.001,r=0.946)。结论血液透析后ESRD患者体内存在着细胞因子的变化,即Th2细胞因子IL-10上升而Th1细胞因子TNF-β和促炎因子IL-8降低。血液透析影响ESRD患者的细胞因子谱。

牛大力多糖对小鼠抗疲劳作用的研究

本文以牛大力(Millettia speciosa Champ.)为对象,利用小鼠爬杆和负重游泳为实验模型,研究了其多糖的抗疲劳作用。实验随机将小鼠分为五组,分别为空白对照组、阳性药(人参蜂王浆,7 mL/kg)对照组、牛大力多糖低剂量组[212.5 mg/(kg·d)]、中剂量组[425 mg/(kg·d)]、高剂量组[850 mg/(kg·d)],灌胃给药14 d后,考察其对小鼠爬杆时间、负重游泳时间以及血乳酸(LD)、血乳酸脱氢酶(LD-H)、血中尿素氮(BUN)含量的影响。结果表明,牛大力多糖能延长小鼠爬杆时间,增加小鼠游泳耐力,降低LD、BUN的含量、提高血中LD-H含量。且中剂量的药效与阳性药对照组的基本相当。

多模式镇痛对肾移植患者术后疼痛及细胞因子的影响

目的观察多模式镇痛用于肾移植患者的术后镇痛效果及对炎性细胞因子的影响。方法将40例行同种肾移植手术患者分为两组,每组20例。D组(多模式镇痛组):超前镇痛联合硬膜外自控镇痛,C组(对照组):间断肌内注射镇痛药物。记录术后2、6、12、24、48h的视觉模拟法(VAS)评分、Ramsay评分及心率(HR)、平均动脉压(MAP)、脉搏血氧饮和度(SPO2);并于麻醉前、术毕、术后6、24、48h抽取静脉血检测血清中IL-2、IL-6和IL-10浓度。结果两组术后MAP、SPO2无明显变化,组间各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05);C组术后6、12h时HR有所升高,与D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。D组术后6、12、24hVAS评分较C组低(P<0.05);两组各时间点Ramsay评分差异无统计学意义(P>0.05)。两组术后6、24、48h的IL-2和IL-10浓度明显高于麻醉前、术毕(P<0.05)。D组在术后6、24、48h时IL-2、IL-6浓度明显低于C组,IL-10浓度明显高于C组(P<0.05)。结论多模式镇痛应用于肾移植患者可达到有效的镇痛效果,并可下调促炎性细胞因子和上调抗炎性细胞因子,维持术后血清细胞因子的平衡。

多模式镇痛对肾移植后免疫功能的影响

背景:多模式镇痛模式应用于肾移植受者可有效减轻疼痛,并有利于移植肾功能恢复。目的:观察地佐辛多模式镇痛对肾移植后患者免疫功能的影响,并探讨合适的移植后镇痛药物及方式。方法:40例肾移植患者随机分为两组,均行硬膜外阻滞复合全身麻醉。对照组间断肌注镇痛药物,地佐辛多模式镇痛组给予地佐辛超前镇痛+术后硬膜外患者自控镇痛。记录麻醉前,移植后12,24,48 h的心率、动脉平均血压、血氧饱和度;抽取静脉血检测T淋巴细胞亚群含量和白细胞介素2、白细胞介素6和白细胞介素10水平。结果与结论:与麻醉前比较,对照组移植后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、白细胞介素2和白细胞介素6水平均明显下降(P<0.05),白细胞介素10水平明显升高(P<0.05)。地佐辛多模式镇痛组CD4+、白细胞介素2、白细胞介素6水平在移植后12 h低于麻醉前(P<0.05),移植后24 h则恢复至麻醉前水平。CD8+、CD4+/CD8+与移植前比较变化不明显。白细胞介素10水平在移植后48 h明显高于移植前,但低于对照组(P<0.05)。结果可见地佐辛多模式镇痛对肾移植后免疫功能有一定的保护作用,对患者移植肾肾功能短期转归和移植物的长期存活起积极作用。

强直性脊柱炎患者外周血中Th17细胞水平研究

目的建立流式细胞术检测外周血Th17的方法,并探讨强直性脊柱炎患者外周血Th17变化的意义。方法采用四色流式细胞术检测16例AS患者(AS组)和16例健康志愿者(对照组)外周血Th17细胞比例。结果用流式细胞仪结合不同荧光素标记的CD3、CD8、CD45和IL-17A单克隆抗体可准确检测外周血中Th17细胞的数量。对照组中Th17的检测结果分别为(1.58±1.09)%;AS患者组中分别为(3.06±2.24)%,AS患者外周血中Th17细胞显著高于对照组(P=0.004)。结论患者外周血中Th17细胞数量与对照组比较显著升高,该种细胞可能参与了AS的发生和发展。

应用全外显子组测序技术筛查罕见石骨症致病基因

目的筛查石骨症患者的致病基因,为疾病的基因诊断及预后提供参考。方法收集石骨症患者临床资料及外周血标本,提取DNA,构建全外显子测序文库,进行高通量测序并结合生物信息学技术筛查石骨症致病基因。结果对2例石骨症患者的全外显子进行了分析,平均测序深度分别为169.38X、231.06X,其中患者1携带罕见突变TCIRG1(c.1305+2T>C)、TCIRG1(c.2008C>T)和CLCN7(c.1116C>T);患者2携带罕见突变CLCN7(c.857G>A),生物信息学分析表明患者携带的罕见突变均对基因产物的结构和功能具有不同程度的影响。结论全外显子测序可一次性筛查已知石骨症致病突变,是石骨症致病突变筛查的有效工具,2例石骨症患者的临床病征可能与患者携带的TCIRG1和CLCN7突变密切相关。

人类遗传疾病中常见变异和罕见变异的研究策略

广义遗传病可以理解为一切由遗传物质改变所致的疾病,有单基因疾病（monogenic disease/mendelian disease）其中包括常染色体显性和隐性遗传、X连锁显性和隐性遗传、Y连锁和线粒体病,以及多基因疾病（complex disease）和体细胞遗传病等[1]。研究疾病的遗传因素是一个相对复杂、困难的问题,

microRNA在肾脏疾病和生理中的研究进展

慢性肾脏疾病(CKD)与主要的非传染性疾病(如糖尿病和高血压)密切相关。微RNA(miRNA)是一类内源性有调控作用的非编码RNA,它们在肾脏发育、平衡和疾病中扮演重要角色。特别是在各种CKD的发展中,miRNA的表达与肾小管间质硬化和终末期肾小球病变发生相关。miRNA在基因中具有调控作用,其可能成为肾病的一种新的诊断标志物和治疗靶点。根据现有证据,miRNA可能与糖尿病肾病、IgA肾病、狼疮性肾炎、多囊肾病和移植排斥有关。

慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞的表达

目的:探讨慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞表达水平及意义。方法:采用流式细胞术测定40例慢性肾功能不全患者外周血CD4+T细胞占淋巴细胞(CD45+细胞)的比例及CD4+CD127-Treg、CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例。结果:慢性肾功能不全各组患者外周血CD4+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例显著低于健康对照组,而CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例较健康对照组无显著性差异,代偿期患者CD4+T占淋巴细胞的比例跟健康对照组相比,没有统计学差异,其余各期均显著高于健康对照组。患者CD4+T细胞占淋巴细胞的比例,CD4+CD127-Treg、CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例与血清BUN和Cr值之间没有相关性。结论:慢性肾功能不全患者外周血CD4+T细胞数量增高,CD4+CD127-Treg数量降低,免疫功能异常。

维持性血液透析患者外周血调节性T细胞的表达

目的探讨维持性血液透析患者体内调节性T细胞表达水平及意义。方法采用流式细胞术测定解放军第181医院全军肾移植与血液净化中心13例维持性血液透析患者血液透析前、血液透析后外周血CD4+T细胞占淋巴细胞的比例及CD4+CD-127Treg、CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例。结果维持性血液透析患者血液透析前CD4+T细胞占淋巴细胞的比例高于健康对照组,CD4+CD127-Treg、CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例低于健康对照组,血液透析后CD4+T的比例下降,CD4+CD25+CD127-Treg的比例有所上升。结论尿毒症患者外周血CD4+T数量增高,CD4+CD127-Treg、CD4+CD25+CD127-Treg数量降低,免疫功能紊乱,而血液透析有利于改善机体的免疫功能。

系统性红斑狼疮的流行率和病理机制及其相关的生物标志物

系统性红斑狼疮是涉及所有器官的高度异质性疾病。对于系统性红斑狼疮的流行率,病理机制和其生物标志物的研究是系统性红斑狼疮研究的3个重要方面。系统性红斑狼疮的流行性在不同的地区存在差异,这些差异的存在是由很多方面因素引起,目前普遍公认的影响因素主要有遗传,人种和生活环境等。系统性红斑狼疮的病理机制研究对该病的治疗具有最为关键的作用,但也是最难攻克的课题,至今的研究还未取得突破性的进展,许多问题还未解决。而生物标志物对于研究系统性红斑狼疮的流行率和病理机制的研究具有重要的意义,同时生物标志物对于系统性红斑狼疮的预防和治疗等方面有极大的帮助。

流式细胞术和SSP-PCR法检测HLA-B27抗原的比较

目的分析流式细胞术(FCM)用于强宜性脊柱炎(AS)患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27)表达情况的测定效果,同时以药物特异性聚合酶链反应(SSP-PCR)进行对照。方法采用FCM法检测74例临床疑似AS患者的HLA-B27,将二者结果进行分析比对。结果两种检测方法检测,结果符合率为95.9%,经Kappa值评价有很强的一致性(K=0.95),无统计学意义(P>0.05)。结论FCM法是一种快捷、简便、高效的HLA-B27检测方法,适合于临床应用。

线粒体蛋白质组学与细胞凋亡信号转导的研究进展

线粒体在真核细胞中广泛分布,为细胞代谢以及能量产生的主要细胞器,同时也参与多项细胞的重要生理过程,其蛋白质结构与功能的改变同人类疾病息息相关,如退行性疾病、心脏病、衰老和癌症等.蛋白质组学是对一个基因组或一种细胞、组织、器官所表达的全部蛋白质成分进行分析的新兴学科,其中热点之一就是对线粒体的研究.

先天性疾病研究及产前诊断中Array CGH的应用

染色体微缺失、重复、扩增和非整倍体等基因组DNA失衡是导致胎儿发育迟缓、畸形、死胎、流产和其他先天性疾病的内在原因。微阵列-比较基因组杂交技术(Array CGH)利用基因芯片取代了传统比较基因组杂交技术的正常中期染色体作为杂交靶标,与分别采用不同荧光标记的待测DNA和参照DNA杂交,通过比较两种荧光强度的比率,检测出染色体基因拷贝数变化。Array CGH已成为一个重要的细胞遗传学研究工具,用于产前诊断和先天性疾病诊断染色体亚显微结构异常。

蛋白质组学技术在癌症相关研究中的应用

寻找理想的表型生物标志物,阐明疾病发生、发展过程中起关键作用的蛋白质分子以用于癌症的早期检测诊断及预后评估一直是癌症研究领域的热点和难点。随着人类基因组测序的完成,癌症研究的重点从基因组学转移到蛋白质组学研究中,癌症研究中的差异蛋白质组学技术也飞快发展,极大推动了与癌症相关的差异蛋白质组学研究,本文综述了近年来蛋白质组学技术在与癌症相关研究中的一些应用。