沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞的影响及其作用机制研究

目的探讨IL-37对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测人正常成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞(U2OS、MG63、Saos-2)中IL-37 mRNA的表达情况;设计沉默IL-37的小干扰RNA(siRNA)序列转染骨肉瘤细胞系,将转染干扰序列siIL-37沉默IL-37表达的细胞作为siIL-37组,转染阴性对照序列作为阴性对照组(siNC组),检测沉默IL-37后骨肉瘤细胞IL-37 mRNA的表达。采用CCK-8法、Transwell法检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响;流式细胞术检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞中B淋巴细胞瘤(BCL)关联X蛋白(BAX)/BCL-2和Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白表达的影响。结果IL-37 mRNA在U2OS、MG63和Saos-2细胞中均高于其在hFOB1.19细胞中的表达(P均<0.05)。siIL-37组中的IL-37 mRNA相对表达量均低于siNC组(P均<0.05)。与siNC组比较,siIL-37组的细胞增殖比例下降,细胞凋亡率升高,迁移和侵袭细胞数量增多,BAX表达上调而BCL-2表达下调,Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白c-Myc、β-catenin、转录增强因子1、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶-7表达均下调(P均<0.05)。结论IL-37在骨肉瘤细胞中表达升高,沉默IL-37表达可促进骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其增殖、迁移和侵袭。IL-37可能通过BAX/BCL-2和Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤的发生发展。

自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对软骨损伤修复的研究

目的探讨自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对新西兰兔软骨缺损的修复作用。方法构建自组装纳米多肽水凝胶,利用扫描电镜技术检测丝素蛋白支架的结构,培养兔源性骨髓间充质干细胞(BMSC),流式细胞仪检测第2代BMSC表面蛋白CD34、CD45、CD90和CD105表达,活细胞/死细胞双重染色检测水凝胶与BMSC的生物相容性,CCK-8法检测BMSC增殖情况检测,实时定量PCR检测水凝胶对BMSC的蛋白聚糖(AGN)、Ⅱ型胶原a1(COL2a1)、成软骨分化调控基因Sox-9 mRNA的表达,分析水凝胶对BMSC成软骨分化的影响,并利用甲苯胺蓝染色评估水凝胶对兔软骨缺损的修复效果。结果原子力显微镜观察功能化自组装多肽可以形成纳米纤维网状结构;第2代BMSC表面蛋白结果显示CD105阳性和CD45阴性的比例为91.22%,而CD90阳性和CD34阴性的比例为95.10%。生物相容性检测示兔BMSC在自组装水凝胶中生长状态稳定,以绿染的活细胞为主。CCK-8法检测示BMSC复合水凝胶组在培养3 d时增殖能力高于BMSC组(P<0.001)。PCR检测示空白组、水凝胶、诱导液组和水凝胶与诱导液混合组的AGN、COL2a1、Sox-9 mRNA表达在第2~4周比较差异均有统计学意义(P均<0.001),有水凝胶的环境更有利于BMSC成软骨分化。甲苯胺蓝染色结果显示水凝胶负载干细胞对软骨缺损的修复作用优于BMSC组和缺损对照组(P均<0.05)。结论自组装纳米多肽水凝胶负载BMSC对软骨缺损的修复具有明显的促进作用。