感染二分浓核病毒家蚕相关MicroRNA的筛选与鉴定

二分浓核病毒(bidensovirus,BDV)是家蚕病毒病的主要病原之一。为了筛选和鉴定家蚕体内与BDV感染相关的差异表达microRNA(miRNA),对家蚕品种JS的3龄起蚕添食BDV,36 h后收集家蚕并提取总RNA,采用高通量测序技术分析家蚕感染BDV后应答的miRNA,从中筛选出24个显著差异表达的miRNA,其中14个为已知miRNA,10个为新发现的miRNA。进一步利用反转录PCR(RT-PCR)技术对上述24个miRNA进行验证,发现这些miRNA均在家蚕幼虫体内表达;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测家蚕感染BDV后这些miRNA的表达情况,发现其中9个miRNA表达上调,15个miRNA表达下调,其中表达上调倍数最高的为bmo-miR-1923,相对表达上调了8.87倍,表达下调倍数最高的为bmo-miR-13b-3p,相对表达下调了6.97倍。此外,根据测序结果进行生物信息学预测和分析差异表达miRNA的靶基因,并利用GO分析对靶基因进行功能分类,发现这些靶基因主要参与了细胞过程、催化、结合和代谢过程。研究结果将为阐明家蚕抗BDV的分子机制提供数据参考和技术支持。

家蚕A型咽侧体抑制激素对白僵菌感染的抑制作用

家蚕是鳞翅目昆虫的代表,具有重要的经济价值和昆虫免疫机制研究价值。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)作为致病力最强、危害最严重的病原真菌之一,其感染引起的家蚕真菌病常给养蚕业带来严重损失。如何有效防治该病的发生一直是重要的研究课题。我们前期研究中发现在球孢白僵菌感染的家蚕中A型咽侧体抑制激素(A type Allatostatin,AST-A)基因的表达水平明显上调,推测其可能参与家蚕对球孢白僵菌感染的免疫反应。为探究AST-A在家蚕抵御球孢白僵菌感染过程中的作用,从家蚕克隆了AST-A基因的cDNA,采用原核表达系统表达获得了重组家蚕A型咽侧体抑制激素(BmAST-A)蛋白,经镍柱层析纯化后,进行了BmAST-A蛋白的体内试验以及BmAST-A基因的RNA干涉试验,检测其对球孢白僵菌感染的抑制作用。结果显示,对球孢白僵菌感染的家蚕5龄幼虫体腔注射纯化的重组BmAST-A蛋白,幼虫半数致死时间比对照组延迟了32.9 h,而采用RNAi沉默BmAST-A基因的表达,幼虫的半数致死时间比对照组提早了16.8 h。上述结果表明,BmAST-A在家蚕抵御球孢白僵菌感染的过程中发挥了重要作用。