血府逐瘀汤下调Caveolin-1抑制自噬改善大鼠脑出血损伤的效应及机制研究

目的:探究血府逐瘀汤下调窖蛋白-1(Caveolin-1)抑制自噬改善大鼠脑出血(ICH)损伤的效应及机制。方法:将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。采用自体股动脉血注入脑尾状核建立ICH大鼠模型。各给药组大鼠分别灌胃给予相应药物,空白组、模型组、假手术组大鼠灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药3周。观察各组大鼠状态,并行神经功能缺损评分。采集各组大鼠脑组织,HE染色观察脑组织结构的改变情况,免疫组织化学法检测LC3Ⅱ阳性表达,qPCR法检测Caveolin-1 mRNA相对表达量;Western blotting检测Caveolin-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Caspase-3、Bcl-2/Bax、Beclin-1蛋白表达情况。结果:假手术组大鼠上述指标与空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),脑组织血肿区域明显,神经元胞浆减少,核固缩,脑组织中Caveolin-1、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及Caveolin-1 mRNA相对表达量均明显升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2/Bax均明显降低(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显升高(P<0.05),脑组织血肿区域缩小、坏死神经元数目减少,脑组织中Caveolin-1、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及Caveolin-1 mRNA相对表达量均明显降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2/Bax均明显升高(P<0.05);中、高剂量组上述指标均优于低剂量组(P<0.05)。结论:血府逐瘀汤可下调Caveolin-1激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬,保护神经元而改善大鼠ICH损伤。

miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

目的探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制。方法实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达。双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系。取对数生长期SK-N-SH细胞分为:Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,RT-qPCR检测miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin)mRNA表达,Western blot检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡率。结果IS组患者血清miR-486-5p表达较健康体检者明显降低(P<0.01)。miR-486-5p可以结合PINK1的3′端非编码区(P<0.01)。与Control组比较,OGD/R组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显降低(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。与OGD/R组比较,OGD/R+miR-486-5p mimic组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显升高(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。与OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC组比较,OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显降低(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、RO S、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。结论miR-486-5p可拮抗SK-N-SH细胞OGD/R损伤,可能与抑制PINK1/Parkin通路进而抑制线粒体自噬有关。

细胞外囊泡在缺血性脑卒中中的研究进展

细胞外囊泡是一种从细胞膜上脱落或由细胞分泌的携带RNA,DNA、蛋白质、脂质等多种分子的具有双层膜结构的囊泡状小体。多项研究表明,细胞外囊泡在缺血性脑损伤的发生发展过程中发挥重要作用,且可用于缺血性脑损伤的诊断、治疗及预后等方面。