南蛇藤提取物靶向mTOR抑制人胃癌细胞SGC-7901的迁移能力的研究

目的研究不同浓度的南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.提取物对敲低雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin,mTOR)表达的人胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响。方法用siRNA技术,构建敲低mTOR表达的人胃癌SGC-7901细胞。MTT法检测南蛇藤提取物(10、20、40、80、160、320μg·mL^-1)对人胃癌SGC-7901/mTOR-细胞增殖的影响。加入不同浓度的南蛇藤提取物(20、40、80μg·mL^-1)作用24 h后,分别用划痕实验和Transwell小室迁移实验,考察不同浓度的南蛇藤提取物对SGC-7901/mTOR-细胞迁移能力的影响。Western blot法分析对mTOR信号转导通路相关蛋白的影响。结果南蛇藤提取物明显抑制人胃癌SGC-7901/mTOR-细胞的增殖,呈浓度依赖性。南蛇藤提取物明显降低人胃癌SGC-7901/mTOR-细胞的迁移能力,减少mTOR信号转导通路相关蛋白的表达量。结论南蛇藤提取物明显抑制人胃癌SGC-7901/mTOR-细胞的迁移,其分子机制可能与mTOR信号转导通路相关。

艾迪注射液对人胃癌HGC-27细胞的抗肿瘤作用机制研究

目的探讨艾迪注射液对人胃癌HGC-27细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制研究。方法采用0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0 mg/ml艾迪注射液处理人胃癌HGC-27细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。不同浓度艾迪注射液培养人胃癌HGC-27细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为20.17 mg/ml,后续实验将6.0、12.0、24.0 mg/ml艾迪注射液处理的人胃癌HGC-27细胞设置为低浓度组、中浓度组、高浓度组,以野生型HGC-27细胞作为空白对照组,2.0 mg/L顺铂处理的胃癌细胞HGC-27作为阳性对照组,细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,蛋白质印迹法(Westernblot)检测各组细胞蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(MTOR)、真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)蛋白的相对表达量。结果随艾迪注射液浓度的升高,培养24、48、72 h,人胃癌HGC-27细胞A值均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。培养24 h,低浓度组、中浓度组、高浓度组人胃癌HGC-27细胞未迁移率均高于空白对照组(P﹤0.05),高浓度组人胃癌HGC-27细胞未迁移率高于低浓度和中浓度组(P﹤0.05)。低浓度组和中浓度组人胃癌HGC-27细胞AKT、4EBP1、p-4EBP1蛋白的相对表达量均低于空白对照组(P﹤0.05),且中浓度组人胃癌HGC-27细胞MTOR蛋白相对表达量低于空白对照组(P﹤0.05),高浓度组人胃癌HGC-27细胞AKT、MTOR、4EBP1、p-4EBP1蛋白相对表达量均低于低浓度组和中浓度组,中浓度组人胃癌HGC-27细胞AKT蛋白相对表达量高于低浓度组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论艾迪注射液能够抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖和迁移能力,且MTOR信号通路可能是其抗胃癌治疗的关键。

齐墩果烷型五环三萜协同miR-451抑制胃癌AGS细胞的增殖和迁移及其可能的机制

目的:探索南蛇藤提取物齐墩果烷型五环三萜(28-hydroxy-3-oxoolean-12-en-2-oic acid)协同miR-451对人胃癌AGS细胞增殖、迁移的影响及其可能的分子机制。方法:用miR-451过表达慢病毒感染AGS细胞,并用盐酸多西环素(DOX)10或100 ng/ml诱导24 h,构建过表达miR-451的细胞AGS/miR-451^(+)。采用10、20、40、80、160μmol/L的齐墩果烷型五环三萜处理AGS/miR-451^(+)细胞,MTT法、划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力的变化,WB法检测细胞中mTOR通路及凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果:成功构建过表达miR-451的AGS/miR-451^(+)细胞。与未加药对照组相比,齐墩果烷型五环三萜处理后AGS/miR-451^(+)细胞的增殖抑制率均呈时间和浓度依赖性升高(P<0.05或P<0.01),细胞迁移率均显著降低(P<0.05或P<0.01)。齐墩果烷型五环三萜处理组细胞中,mTOR信号通路相关蛋白的表达量均有所降低(P<0.05或P<0.01);凋亡相关蛋白中,Bcl2的表达量下降,BAX、caspase-3、caspase-1及细胞色素c的表达量升高(P<0.05或P<0.01)。结论:齐墩果烷型五环三萜能够协同miR-451抑制人胃癌AGS细胞的增殖与迁移,其机制可能与影响凋亡和mTOR信号通路相关蛋白的表达有关。

南蛇藤提取物对MGC803/miR-144^(+)细胞增殖和迁移能力的影响

目的:观察南蛇藤提取物(celastrus orbiculatus ethylacetate extract,COE)对MGC803/miR-144^(+)细胞增殖和迁移能力的影响。方法:将不同浓度的COE(0 mg·L^(-1)、20 mg·L^(-1)、40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1)、320 mg·L^(-1))加入对数生长期的人胃癌MGC803/miR-144^(+)细胞中,作用24 h后,MTT法检测MGC803/miR-144^(+)细胞的增殖率,根据半数抑制浓度,确定后续实验所用的药物浓度。同时设立空白质粒对照组、不加药阴性组、COE组和5-氟尿嘧啶注射液(50 mg·L^(-1))组,作用24 h后,细胞划痕实验分析迁移能力,Western Blot法检测上皮间质转化相关蛋白(N-cadherin、Vimentin及E-cadherin)的表达。结果:COE作用24 h后,MGC803/miR-144^(+)细胞的增殖能力受抑制,并呈一定的浓度依赖性(P<0.05),半数抑制浓度约为126.86 mg·L^(-1)。与对照组相比,COE可使MGC803/miR-144^(+)细胞的迁移能力受到抑制(P<0.05);可显著增加E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin和Vimentin蛋白表达(P<0.05)。结论:COE可抑制MGC803/miR-144^(+)细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与上皮间质转化相关。