近红外光谱技术无损检测克咳片中麻黄类生物碱和吗啡含量研究

麻黄类生物碱以及吗啡含量对评价克咳片质量具有重要意义,该文基于近红外光谱(NIRS)技术建立了快速、无损、高效的克咳片质量评价方法,采用NIRS和偏最小二乘回归(PLSR)法建立了麻黄类生物碱以及吗啡的定量分析模型,并采用不同预处理方法和不同变量选择方法优化了模型性能。将校正集决定系数(R_(c)^(2))、验证集决定系数(R_(p)^(2))和相对分析误差(RPD)作为模型的评价指标。结果表明,标准正态变量变换(SNV)预处理方法结合竞争自适应重加权采样(CARS)变量选择方法所建立的模型性能最优。克咳片中麻黄类生物碱及吗啡近红外光谱模型的R_(c)^(2)、R_(p)^(2)及RPD分别为0.91、0.93、4.00和0.92、0.94、4.24,说明模型性能较好。该研究基于NIRS和CARS实现了克咳片指标成分的快速、无损分析,为克咳片的质量快检提供了参考。

鱼腥草破壁饮片单次和重复给药毒性试验

目的研究大鼠单次和重复给予鱼腥草破壁饮片后的毒性反应,为临床研究及应用提供参考的依据。方法鱼腥草破壁饮片和鱼腥草饮片均以7.2 g·kg^(-1)的最大给药量单次灌胃给予大鼠观察毒性反应,并持续观察2周;鱼腥草破壁饮片以1.35、2.70、5.40 g·kg^(-1),鱼腥草饮片1.35、5.40 g·kg^(-1),连续3个月对SD大鼠灌胃给药,恢复期4周,进行临床观察、体重、摄食量、血清生化学、血液学、肾损伤生物标志物及病理学等各项检查。结果鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片以7.2 g·kg^(-1)对SD大鼠单次灌胃给药,未见明显毒性反应;鱼腥草破壁饮片及鱼腥草饮片重复给药3个月,各剂量组各项检查均未见异常。结论鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片单次经口给药对SD大鼠的最大耐受剂量(MTD)>7.2 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片对SD大鼠连续灌胃给药3个月的无毒作用剂量(NOAEL)为6.4 g·kg^(-1)。鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片在相同给药剂量下,SD大鼠毒性反应无明显区别。

三七破壁饮片指纹图谱研究

目的:建立三七药材、破壁粉体和破壁饮片的HPLC指纹图谱,为三七破壁饮片的质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱法,Hypersil ODS2色谱柱,流动相:乙腈-水(梯度洗脱),流速:1.0 mL/min,检测波长:203nm,柱温:25℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件对图谱进行分析处理。结果:三七药材、破壁粉体和破壁饮片皂苷类成分指纹图谱标定8个共有峰,三七药材、破壁粉体和破壁饮片之间相似度均大于0.9。结论:建立的HPLC指纹图谱方法具有良好的精密度、重复性和稳定性,适用于三七破壁饮片的质量控制。

两面针根、茎抗击打损伤和镇痛抗炎作用比较研究

目的:比较两面针根、茎的抗击打损伤和镇痛抗炎作用,为两面针以茎入药,扩大药用部位提供实验依据。方法:采用大鼠腿部击打损伤模型比较两面针根、茎的抗击打损伤作用,采用小鼠扭体模型和热板致痛模型比较两面针根、茎的镇痛作用,采用角叉菜胶致大鼠足肿胀模型、弗氏佐剂致大鼠足肿胀模型和大鼠棉球肉芽肿模型比较两面针根、茎的抗炎作用。结果:两面针根、茎均能不同程度改善大鼠腿部击打损伤部位的外观和组织学症状表现,减少醋酸致小鼠疼痛扭体次数和提高热板致小鼠疼痛痛阈值,抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀和棉球致大鼠肉芽增生的炎症反应。结论:两面针茎抗击打损伤和镇痛抗炎的药效作用与两面针根相近。

岗梅根、茎体外抗呼吸道病毒的作用比较研究

目的:观察比较岗梅根和岗梅茎水提物对多种呼吸道病毒的抑制作用,为岗梅药材扩大药用部位提供参考。方法:分别接种甲1型流感病毒FM1株、呼吸道合胞病毒、鼻病毒R14型、腺病毒3型和副流感病毒3型于MDCK、A549、HEL和LLC-MK2细胞,采用鸡红血球凝集法观察岗梅根、茎水提物对甲1型流感病毒FM1株的抑制作用,采用细胞病变抑制法(CPE)观察岗梅根、茎水提物对呼吸道合胞病毒、鼻病毒R14型、腺病毒3型和副流感病毒3型的抑制作用。结果:在无毒浓度下,岗梅根水提物能抑制甲1型流感病毒FM1株、腺病毒3型、合胞病毒RSV和副流感3型病毒,而岗梅茎水提物仅能抑制腺病毒3型及呼吸道合胞病毒RSV。结论:岗梅根、茎水提物均有一定的体外抗呼吸道病毒作用,岗梅根水提物体外对呼吸道病毒的抑制作用略优于岗梅茎。

紫米粉圆感官评价及质构特性的相关性分析

目的:开发一种新型的紫米粉圆并评价其品质。方法:探究m紫米粉∶m木薯淀粉对粉圆吸水率、蒸煮特性、质构特性及感官品质等指标的影响,采用pearson相关性分析法研究紫米粉圆质构特性与感官指标之间的相关性。结果:当m紫米粉∶m木薯淀粉为1∶8时,紫米粉圆吸水率为154.71%,蒸煮损失为16.45%,常温和冰饮条件下,感官评分分别为84.6,79.0分。对不同紫米粉添加量的粉圆进行主成分分析,得到2个主成分,累计方差贡献率为91.035%。以紫米粉圆的感官指标为因变量,质构指标为自变量,建立了紫米粉圆感官特性的5个预测模型,说明感官指标受质构指标中弹性、硬度、咀嚼性和黏结性的影响。结论:紫米粉圆的质构特性与感官指标之间存在一定的相关性。

白术和黄芪不同提取部位对小肠上皮细胞增殖的影响

目的观察白术和黄芪的不同提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的影响。方法以系统溶剂分离法分别提取白术和黄芪的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、醇沉上清液和多糖部位;另将白术和黄芪以乙醇提取,D101大孔树脂吸附法得到40%和70%乙醇洗脱部位。MTT法检测白术和黄芪正丁醇部位、醇沉上清液、多糖部位、40%和70%醇洗脱液对IEC-6细胞增殖的作用。结果初步发现黄芪正丁醇部位、醇沉上清部位、糖复合物、40%和70%醇洗脱部位加药24h能促进细胞增殖;白术40%乙醇洗脱液部位加药24h能促进细胞增殖,白术正丁醇部位、糖复合物、40%和70%乙醇洗脱液部位加药48h能促进细胞增殖。结论白术和黄芪正丁醇部位、多糖部位、40%和70%醇洗脱液在加药后不同时间对IEC-6细胞有不同程度的促进增殖作用;采用系统溶剂分离法和大孔树脂吸附法提取白术和黄芪不同部位,可以用于细胞增殖实验,为进一步开展白术和黄芪在细胞水平上的药理研究提供参考。

两面针根和茎抗胃炎、保护胃黏膜和改善胃肠运动功能的作用比较研究

目的:比较两面针根和茎抗胃炎、保护胃黏膜和改善胃肠运动功能的药效作用,为两面针以茎入药,扩大药用部位提供实验依据。方法:采用碘代乙酰胺致大鼠慢性浅表性胃炎观察比较两面针根、茎的抗胃炎作用,采用大鼠应激性胃溃疡模型、吲哚美辛致大鼠胃溃疡和大鼠幽门结扎模型观察比较两面针根、茎的胃黏膜保护作用,采用小鼠胃排空和小肠推进实验观察比较两面针根、茎改善胃肠运动功能的作用。结果:两面针根、茎均有不同程度改善大鼠慢性浅表性胃炎胃黏膜组织炎症、应激性胃溃疡及吲哚美致大鼠胃溃疡的溃疡指数和胃液分析指标,同时在促进胃肠蠕动方面也表现出有较好的药效。结论:两面针茎在抗胃炎、保护胃黏膜和改善胃肠运动功能方面的药效作用与两面针根相近。

肾气丸“阴中求阳”配伍对肾阳虚大鼠下丘脑多巴胺及五羟色胺含量的影响

目的用肾气丸各拆方组水煎液灌胃肾阳虚大鼠,测定灌胃后各组大鼠下丘脑中多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)的含量,分析肾气丸"阴中求阳"治疗肾阳虚证的机理。方法以氢化可的松25 mg/(kg.d)注射大鼠,连续12 d,同时以各肾气丸拆方组水煎液灌胃,于灌胃第21天,麻醉大鼠,取出下丘脑,称重,以5%高氯酸匀浆,高速低温离心后分取上清液,用高效液相色谱法检测DA,5-HT的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠下丘脑中DA、5-HT含量升高,经灌胃给药后,各拆方组大鼠下丘脑中DA,5-HT的含量均有不同程度的降低,以阴阳双补组含量最低,而补阳组降低不明显,其中阴阳双补1组含量低于补阳1组,阴阳双补2组含量低于补阳2组,具有统计学意义。结论降低下丘脑中多巴胺、五羟色胺的含量,可能是肾气丸"阴中求阳"配伍治疗肾阳虚证的机理之一。

小肠上皮细胞迁移过程中膜电位检测方法的建立及应用

目的用流式细胞仪建立检测小肠上皮细胞(IEC-6)膜电位(membrane potential,Em)的方法,为细胞迁移过程病理生理及药理研究检测膜电位提供参考。方法在划痕法细胞迁移模型上,采用细胞膜电位荧光探针DiBAC4(3)预先负载到IEC-6细胞,应用流式细胞仪测定细胞膜电位。结果①细胞迁移实验显示,外源性多胺(精脒,SPD)可促进细胞迁移,多胺合成抑制剂DFMO可抑制细胞迁移;②当负载到细胞的DiBAC4(3)浓度为1μmol·L-1,孵育时间为10min时,IEC-6细胞在流式细胞仪上呈现最大荧光强度;③空白组细胞平均荧光强度为712.05±19.73,SPD组和DFMO组平均荧光强度分别为406.07±46.54和1030.15±87.63,与空白组比较差异均有显著性,表明SPD组Em增加,DFMO组Em降低。结论建立的流式细胞仪检测细胞膜电位方法,适用于多胺介导的IEC-6细胞迁移过程细胞膜电位的检测,也可为其它单层贴壁细胞在生理和病理状态下检测细胞膜电位变化提供参考。

肾气丸“阴中求阳”配伍对方中乌头碱和次乌头碱含量的影响

目的测定肾气丸各拆方组水煎液中乌头碱、次乌头碱的含量,分析肾气丸"阴中求阳"配伍对方中乌头碱、次乌头碱含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2(即肾气丸全方),采用高效液相色谱法测定肾气丸各拆方组水煎液中乌头碱、次乌头碱的含量。结果各组水煎液中均未检测出乌头碱含量,阴阳双补组-2、阴阳双补组-1中次乌头碱含量均低于补阳组-1、补阳组-2,阴阳双补组-2中次乌头碱含量低于阴阳双补组-1,且都具有统计学意义。结论肾气丸"阴中求阳"配伍能减小水煎液中次乌头碱的含量从而有降低毒性的作用。

肾气丸“阴中求阳”配伍对桂皮醛含量的影响

目的测定桂皮醛在肾气丸各拆方组水煎液中的含量,分析肾气丸"阴中求阳"配伍对桂皮醛含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2(即肾气丸全方),采用高效液相色谱法测定各肾气丸拆方组水煎液中桂皮醛的含量。结果阴阳双补组-2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组-2和阴阳双补组-1,阴阳双补组-1和补阳组-2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组-1,且都具有统计学意义。结论肾气丸"阴中求阳"配伍能增大水煎液中桂皮醛的含量,且肾气丸中的"三泻"药物(茯苓、泽泻、丹皮)也有增强此作用的趋势。

肾气丸“阴中求阳”配伍对肾阳虚大鼠细胞因子含量的影响

目的用各拆方肾气丸灌胃肾阳虚大鼠,测定灌胃后各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,分析肾气丸"阴中求阳"的配伍治疗肾阳虚证的机理。方法以氢化可的松25 mg/(kg.d)注射大鼠,连续12 d,同时以各肾气丸拆方组水煎液灌胃,于灌胃第21天,麻醉大鼠,心脏取血,离心取上清液,用ELISA法检测大鼠血清中IL-1β,IL-2,IFN-γ,TNF-α的含量。结果与正常组比较,模型组IL-1β、IL-2的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者的含量均有不同程度增加,其中阴阳双补2组含量高于补阳2组,阴阳双补1组含量高于补阳1组,且阴阳双补1组中IL-1β含量高于补阴1组,具有统计学意义。与正常组比较,模型组大鼠血浆中IFN-γ、TNF-α的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者含量均有不同程度的增加,但增加并不显著。结论肾气丸"阴中求阳"的配伍可能是通过增加血浆中IL-1β、IL-2的含量治疗肾阳虚证,故增加血浆中IL-1β、IL-2的含量,可能是肾气丸"阴中求阳"配伍治疗肾阳虚证的机理之一。

肾气丸“阴中求阳”配伍对丹皮酚含量的影响

目的测定丹皮酚在肾气丸各拆方组水煎液中的含量,分析肾气丸"阴中求阳"配伍对丹皮酚含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2(即肾气丸全方),采用高效液相色谱法测定各肾气丸拆方组水煎液中丹皮酚的含量。结果阴阳双补组-2水煎液中丹皮酚含量高于补阳组-2和阴阳双补组-1;阴阳双补组-1和补阳组-2水煎液中丹皮酚含量高于补阳组-1,且都具有统计学意义。结论肾气丸"阴中求阳"配伍能增大水煎液中丹皮酚的含量,且肾气丸中的"三泻"药物(茯苓、泽泻、丹皮)也有增强此作用的趋势。

中药栓剂中有机氯农药残留量测定方法的探索(Ⅰ)

目的探索一种合适的样品提取及净化处理方法,以测定中药栓剂(以脂溶性基质为主)中的20种有机氯类农药残留量。方法选取不同的样品提取及GPC净化方法对中药"化痔栓"进行前处理,用GC-ECD法进行定量测定,并用20种有机氯农药混合对照品对其进行加标回收试验,以回收率作为评价指标从中选择较为可行的方法,再将其应用于其他类似基质的中药栓剂。结果该方法准确度、精密度试验基本达到农药残留分析的要求。结论本实验可为同类中药制剂中有机氯类农药残留量测定方法的研究提供参考。

中药栓剂中有机氯农药残留量测定方法的探索研究(Ⅱ)

目的选择合适的固相萃取方法,对前述的中药栓剂(以脂溶性基质为主)供试液进一步净化处理,使适用于中药栓剂(以脂溶性基质为主)中的20种有机氯类农药残留量测定。方法选用不同的固相萃取柱及固相萃取洗脱条件,对中药"化痔栓"供试液进一步净化处理,用GC—ECD法进行定量测定,并用20种有机氯农药混合标准品对其进行加标回收试验。结果待测定的各有机氯农药标准品回收率基本达到农药残留分析的要求。结论样品供试液经GPC柱洗脱后,再经弗罗里硅土小柱净化处理,可进一步去除杂质,达到准确定量的目的。

壮腰健肾片的物质基础及质量标准提升研究

应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF MSE)技术及UNIFI软件分析和识别壮腰健肾片的化学成分,运用ADMETlab、TCMSP数据库预测和筛选活性成分,共筛选出55个潜在活性成分。在活性成分分析的基础上,结合与壮腰健肾片功能主治相关的药理活性文献报道进行综合评估,确认以没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛为含量测定指标。建立了壮腰健肾片中上述3种成分含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法,并对15批次样品进行测定,测得没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛的含量分别为0.1353~0.3448、0.4308~0.9463、0.0424~0.1077 mg/g。进一步建立了壮腰健肾片的HPLC指纹图谱,确定15个共有峰并归属至处方药味,15批样品的相似度为0.988~1.000,批次间的成分一致性较高。该研究新建立的分析指标较原标准能更全面地表征及评价壮腰健肾片的质量,可为该制剂的药效物质基础分析和质量标准提高提供科学依据,对提高产品的质量可控性具有重要意义。

罗布麻叶破壁饮片的指纹图谱和多成分定量质量控制研究

目的:建立罗布麻叶破壁饮片的UPLC指纹图谱及有效成分含量测定方法。方法:采用ACQUITY UPLC^(■)HSS T3 C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;检测波长为360 nm;柱温为25℃。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行相似度评价,对结果进行系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),并测定指认的成分的含量。结果:15批破壁饮片样品指纹图谱标定了17个共有峰,指认了金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素3个成分;样品与对照图谱相似度为0.922~0.994,HCA及PCA分析将15批样品分为3类,OPLS-DA分析找到对评价罗布麻叶破壁饮片质量一致性和分类贡献较大的7个成分;罗布麻叶破壁饮片中的金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素含量分别为2.338~4.092 mg/g、3.339~5.670 mg/g、0.135~0.696 mg/g。结论:该研究建立的指纹图谱及含量测定方法专属性强,准确可靠,结合化学模式识别可用于罗布麻叶破壁饮片的质量评价和控制。

两面针不同药用部位镇痛和保护胃黏膜作用的研究

目的:考察两面针不同药用部位镇痛和保护胃黏膜的药效作用,为两面针扩大药用部位提供参考,并进行两面针根对小鼠的急性毒性预实验。方法:观察两面针根、茎、枝、叶、地上部分对冰醋酸致小鼠疼痛扭体的镇痛作用;观察两面针根、茎、全株对盐酸乙醇所致大鼠胃黏膜损伤的保护作用;观察小鼠一日最大给药量,初步考察两面针根的急性毒性作用。结果:两面针根、茎、枝、叶、地上部分均能显著减少冰醋酸所致小鼠疼痛扭体的次数;两面针根、茎、全株能减少盐酸乙醇所致大鼠胃黏膜损伤的溃疡指数;两面针根的小鼠一日最大给药量为960g生药·kg-1。结论:两面针根、茎、枝、叶、地上部分均有镇痛作用;两面针根、茎、全株对盐酸乙醇致大鼠胃黏膜损伤均有保护作用;两面针根的临床用量(5～10g·d-1)在安全范围内。

基于植物代谢组学和网络药理学分析预测鸡骨草药材的质量标志物

目的基于植物代谢组学分析鸡骨草药材的次生代谢产物,并结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的质量标志物(Q-Marker)。方法建立UPLC-Q-TOF-MS分析方法,分析11批次鸡骨草药材的化学成分,确定其共有成分。通过聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)确认造成11批次鸡骨草药材分类的主要差异成分,再运用网络药理学构建“核心成分-核心靶点-核心通路”网络,筛选预测鸡骨草药材的潜在Q-Marker,并进行分子对接验证其活性。结果11批次鸡骨草药材中含有39个共有成分,主要为三萜皂苷类、黄酮类、生物碱类等。经聚类分析和主成分分析显示11批次鸡骨草药材分为4类,后经偏最小二乘判别分析发现其中9个化学成分在分类中起重要作用。网络药理学分析结果表明,以上9个成分为活性成分,作用于166个靶点,通过蛋白质互作(PPI)筛选得到29个核心靶点,其中4个化学成分相思子碱、下箴刺桐碱、大豆皂苷Ⅰ、精氨酸与核心靶点的关联度高,结合QMarker理念及分子对接结果,初步预测相思子碱和下箴刺桐碱为鸡骨草药材的Q-Marker。结论利用植物代谢组学结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的Q-Marker,为鸡骨草药材的质量控制与评价提供数据参考,为进一步科学开发鸡骨草药材提供研究思路。