蛋白质组末端肽富集策略研究进展

蛋白质的末端不仅是蛋白质合成的起点和终点,更参与并调节蛋白质的各项生理功能。研究蛋白质的末端不仅对于蛋白质的结构和功能注释十分必要,还为揭示蛋白酶的作用机理提供重要信息。该文着重针对近年来蛋白质组末端肽富集策略方面取得的进展进行综述,并对蛋白质末端组学技术在蛋白酶作用底物和位点分析中的应用进行了概述。此外,还对蛋白质末端组学研究的发展前景进行了展望。

开心散提取物抗焦虑作用及其化学成分研究

目的:探索开心散提取物对大鼠的抗焦虑作用以及药效物质基础。方法:将大鼠随机分为模型组(Con)、阳性组(地西泮)、开心散提取物高剂量组(12 g/kg)、中剂量组(6 g/kg)、低剂量组(3 g/kg),并通过足刺激(0.5 mA)建立大鼠焦虑模型,分别灌胃给药7 d。采用高架十字迷宫试验(EPM)和旷场实验(OFT)进行行为学实验,为进一步确证开心散的抗焦虑作用,以ELISA法检测大鼠5-羟色胺(5-HT)的含量。同时,通过UPLC-DAD-ESI-MS n初步推断其功效成分组的化合物。结果:行为学数据表明,在高架十字迷宫实验,与对照组相比,开心散给药组(12 g/kg,6 g/kg)的大鼠均表现得更加活跃好动(P<0.05);5-HT检测结果显示,与对照组相比,给药组显著提高大鼠脑内神经递质5-HT的含量,并具有统计学意义(P<0.05)。建立开心散提取物的UPLC色谱图以及UPLC-MS-MS n总离子流图,根据质谱裂解信息以及文献对比,共解析图谱得到39个化合物。结论:开心散提取物具有显著的抗焦虑作用,主要含远志寡糖酯、远志酮、远志皂苷、人参皂苷和茯苓三萜类等成分。

小鼠Ogg1基因pET28a-mOgg1原核表达系统建立及其生物信息学探讨

将小鼠Ogg1(mOgg1)基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,分析其相关的生物信息学特性.运用分子克隆的方法,获得重组质粒pET28a-mOgg1;经同源性分析证实与NCBI基因库中mOgg1基因相似度为100%;mOgg1基因可翻译成345个氨基酸序列,翻译后的蛋白不存在N-糖基化位点、跨膜螺旋区域,不含信号肽且无信号肽剪切位点,但含有31个磷酸化位点;运用在线软件对mOgg1蛋白进行结构分析并建立蛋白的3D结构,发现在该蛋白链上含有48%α螺旋、10%β折叠.成功获得了pET28a-mOgg1重组质粒,并对重组蛋白进行Western-blot鉴定,从基因及氨基酸组成上分析该蛋白的特性,由此探讨mOgg1基因及蛋白表达相关的生物信息学特性.

基于UPLC-ESI-MS^(n)技术解析清营汤提取物的化学成分

目的研究中药复方清营汤的化学成分,为推广其临床应用奠定基础。方法采用Agilent Zorbax SB-C 18(150 mm×3 mm,1.8μm)色谱柱,以1 mL·L^(-1)甲酸-甲醇为流动相,梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源,正负离子扫描采集数据,通过超高效液相色谱-电喷雾电离-串联质谱法(UPLC-ESI-MS^(n))解析清营汤提取物的化合物信息。结果建立了清营汤提取物的UPLC色谱图以及UPLC-ESI-MS^(n)总离子流图,根据其质谱裂解信息以及文献对比结果,共得到61个化合物。结论清营汤提取物主要包括黄酮类、环烯醚萜类、苯丙素类、生物碱类、有机酸类和三萜皂苷类等化合物。

基于二辛基化标记的蛋白质组N末端肽富集方法

蛋白质末端的研究不仅对于蛋白质的结构和功能注释十分必要,还能够为蛋白酶作用机理的揭示提供重要信息.针对传统蛋白质组N末端肽富集需要采用大量去除材料导致N末端肽回收率低,以及步骤繁琐、样品损失等问题,本文发展了一种基于二辛基化标记的蛋白质组N末端肽反向富集方法,可以在单次反相色谱分离中实现非N末端肽的去除.以酵母蛋白质酶解产物为样品对方法进行考察,结果表明,该方法具备较高的二辛基化标记效率(93%),且非N末端肽经二辛基化标记后能够显著偏移至强保留区.将其应用于酵母蛋白质N末端组的分析,共鉴定到237条蛋白原始N末端肽和133 neo-N末端肽,较富集前分别提高了2.1和3.3倍.此外,将该方法结合多种酶切方式,使N末端肽和neo-N末端肽的鉴定数目进一步提高37%和60%,促进了蛋白质N末端组鉴定覆盖度的提高.