阿胶多肽的组成及功能研究进展

文章综述了近年来阿胶多肽组成、性质和保健作用等方面取得的研究进展。通过生物信息学研究发现,阿胶主要成分是Ⅰ型胶原蛋白(COLIα1、COLIα2)、Ⅱ型胶原蛋白(COLIIα1)和血清白蛋白(ALB)等大分子量蛋白质。不同研究团队使用生物酶分解阿胶蛋白获得不同长度和种类的小分子量阿胶多肽序列。动物实验表明:阿胶多肽在不同层级的免疫调节中发挥重要作用;阿胶多肽能够促进贫血小鼠外周血白细胞、红细胞和血红蛋白数量的升高;同时,不同阿胶多肽表现的抗氧化能力有显著差异;另外,阿胶多肽在降低血压、改善阿尔兹海默症、抑制肿瘤等方面发挥重要作用。上述结果为今后研究阿胶多肽的产品研发和临床应用提供了重要理论依据。

塞内加谷病毒3C蛋白生物信息学分析及真核质粒构建表达

3C蛋白是塞内加谷病毒重要的非结构蛋白之一,在病毒入侵机制及影响宿主抗病毒天然免疫方面发挥重要作用。试验应用Oligo 7.0和Primer 6.0软件,用BLAST对比SVV世界参考株,设计一对特异性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA为模板,将序列连接pMD19-T载体后测序,对正确片段作生物信息学分析可知SVV 3C可编码一个较稳定非分泌型蛋白,具有一个保守“催化三联体”。预测发现该蛋白具有16个磷酸化位点,证明其较高活性,预测其二级结构后得到再次证实。将pMD19-SVV-3C和真核表达载体pcDNA3.1(+)双酶切后连接,重组质粒经鉴定后命名为pcDNA3.1(+)-SVV-3C。将pcDNA3.1(+)-SVV-3C转染到BHK-21细胞24 h后制样作Western blotting,成功验证该重组质粒可在BHK-21中真核表达。相比其他同科病毒,当前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在为进一步研究SVV 3C蛋白结构提供理论依据,为后续探索SVV 3C蛋白对于宿主作用机制奠定基础。

双孔法全胸腔镜技术置换二尖瓣的可行性

目的探讨双孔法全胸腔镜技术置换二尖瓣的安全可行性。方法回顾性分析首都医科大学附属北京朝阳医院心外科2015年1月至2016年12月收治的90例二尖瓣狭窄患者的临床资料。36(40%)例行双孔法全胸腔镜二尖瓣置换,为双孔法全胸腔镜组;54例行常规开胸二尖瓣置换,为常规开胸组。两组围手术期变量与术后1年的随访资料进行分析。结果23例(25.5%)患者同期三尖瓣成形术。两组总手术时间、体外循环时间、心肌血运阻断时间比较,差异无统计学意义(P>0.05);双孔法全胸腔镜组平均机械通气时间短于常规开胸组(P<0.05);双孔法全胸腔镜组胸管引流量少于常规开胸组(P<0.05)。常规开胸组有1例二次开胸(1.8%)。两组患者术后1年随访,无死亡病例、瓣周漏、感染性心内膜炎、肺部并发症。结论双孔法全胸腔镜二尖瓣置换手术早中期结果安全有效。

四川地区一株猪塞内加谷病毒的分离鉴定及VP1基因的序列分析

猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)是一种新出现的小RNA病毒科病毒,感染该病毒的猪群,尤其是仔猪可能出现严重的病理症状甚至死亡。2015年之前,该病毒主要流行于美国、加拿大及巴西等地区,并于2015年3月传入中国[1],给养猪业带来了严重的经济损失。2018年2月,本实验室检测并收集了阳性病料,采用PK-15细胞对病料进行病毒分离,并通过观察细胞CPE(细胞病变效应)、RT-PCR扩增和VP1基因序列测定进行鉴定。结果显示,成功分离到四川地区第一株SVV并将其命名为CH-MS-2018。对VP1基因的扩增测序及序列分析结果表明,本次分离得到的CH-MS-2018株VP1基因与GenBank上分别于2015年分离的2株和2016年分离的3株美国株的亲缘关系较近,同源性为98.6%。而与最早分离的SVV原始株关系较远,仅为88.0%~89.8%。本研究结果为进一步探索四川地区SVV的生物学性质奠定了基础。

妇科内镜手术的麻醉

内镜的出现和发展推动了临床医学的进步。妇科内镜技术在发达国家开发应用已有近百年的历史，在我国虽然只有短短二十几年的时间，但是发展迅速，目前在临床应用日趋增多，应用范围也越来越广泛。

赖氨比林用于术后病人自控镇痛散可行性研究

目的：观察赖氨比林用于术后病人自控镇痛（PCA）的可行性。方法：选择择期行腹部或盆腔手术的病人120例，ASAⅠ～Ⅱ级，年龄20-60岁，体重50-90kg。按随机单盲法将病人分为四组，每组30例，A组：赖氨比林5.4g＋芬太尼0.7mg配于盐水100ml；B组：赖氨比林7.2g＋芬太尼0.6mg配于盐水100ml；C组：赖氨比林9.0g＋芬太尼0.5mg配于盐水100ml；D组：芬太尼1.0mg配于盐水100ml。病人诱导插管后，采用异丙酚＋异氟烷静吸复合麻醉维持，术毕在麻醉后恢复室恢复，给予镇痛给量芬太尼0.05mg，接上镇痛泵返回病房。观察术后4、8、16、24、36、48h各时间点的疼痛评分（VAS评分）、嗜睡情况、恶心呕吐反应、胃肠反应、体温、发汗程度、出血倾向和镇痛指标（总自控次数、用药总量、自控次数有效/实际）的变化。术前记录病人血常规PLT计数、凝血四项指标，术后48h后复查。结果：VAS评分四组在各时间点均≤3，各时间点组间无显著差异（P〉0.05）；恶心呕吐反应、胃肠反应、体温、自控次数有效/实际等观察指标各组病人无显著差异；总自控次数D组与A、B、C三组比较明显增多（P〈0.05），用药总量D组与A、B、C三组比较明显增多（P〈0.05）；嗜睡程序D组与A、B、C三组比较明显增高（P〈0.05），A、B、C三组之间无显著差异；发汗情况A、B、C三组与D组比较明显增加（P〈0.01），C组与A、B两组比较明显增高（P〈0.05），A、B两组之间比较无显著差异。A、B、C、D四组PLT记数术后均较术前减少（P〈0.05）；A、B、C三组PT时间术后均较术前延长（P〈0.05）；A、B、C、D四组术前、术后比较无显著差异，但所有病人术后PLT记数、凝血四项指标的变化均在正常值范围内，病人术后无一例异常出血倾向。结论：赖氨比林可以安全、有效的用于术后PCA，与芬太尼配伍使用可以明显减少芬太尼的使用量。

猪传染性胃肠炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用

为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据Gen Bank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法。该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较。结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本。说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测。

猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型复合PCR方法的建立

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)在腹泻仔猪中的感染状况,建立一种能同时检测PEDV与PCV2混合感染的复合PCR方法。根据Gen Bank已发表的PEDV、PCV2的基因序列,选择保守区域分别设计、合成1对特异性引物,扩增目的片段分别为530和278 bp。经反应条件优化,建立了特异性检测PEDV、PCV2的复合PCR方法。应用本试验所建复合PCR方法,对2016年4—8月采自四川省乐山、宜宾、广元和遂宁等地区的67份腹泻仔猪样品(肠系膜淋巴结、肠道黏膜及其内容物混合)进行检测。结果显示:PEDV、PCV2单一感染阳性率分别为34.33%、73.13%;PEDV+PCV2复合感染率为16.42%。经与特异性检测PCV2的PCR法和PEDV的RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。

四川省腹泻病猪的猪萨佩罗病毒检测及1B基因序列比较分析

为了解猪萨佩罗病毒（porcine sapelovirus,PSV）的流行及变异情况,采集2015-2016年四川地区12个县市34个猪场共计428份腹泻病料,采用QRT-PCR方法对PSV进行检测。结果显示：在428份病料中,共有114份为PSV阳性,阳性率为26.6%;所检测的34个猪场中,共有20个猪场显示PSV阳性,猪场阳性率为58.8%,表明PSV在四川地区普遍存在。此外,对来自不同县市共14份PSV阳性病料1B全基因进行PCR扩增,通过分子克隆,测序,再利用序列分析软件对四川部分地区猪萨佩罗病毒1B基因进行序列分析。结果表明,14条猪萨佩罗病毒1B基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列相似性分别为90.6%~100%和97.1%~100%。遗传进化分析显示,该研究获得的四川株与已知中国株分属于一个大的分支,说明我国猪萨佩罗病毒1B基因序列较为保守,没有发生大的基因变异。所有中国分离株与韩国株、德国株、英国株处在不同分支,又说明我国PSV的流行毒株可能存在独立进化。

丹红注射液与环磷腺苷葡胺在冠心病不稳定型心绞痛中的治疗价值

目的观察丹红注射液和环磷腺苷葡胺治疗冠心病不稳定型心绞痛的治疗价值。方法 200例冠心病不稳定型心绞痛患者,随机分为治疗组和对照组,各100例。治疗组给予丹红注射液和环磷腺苷葡胺治疗,对照组给予环磷腺苷葡胺治疗。观察两组临床疗效。结果治疗组心绞痛改善总有效率为92%,高于对照组的84%,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗组心电图改善总有效率为94%,高于对照组的85%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者治疗后C反应蛋白(CRP)为(5.24±2.38)mg/L,低于对照组的(6.15±2.19)mg/L;B型尿钠肽(BNP)为(52.90±45.24)pg/ml,低于对照组的(69.70±39.64)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹红注射液和环磷腺苷葡胺治疗冠心病不稳定型心绞痛安全方便,可明显提高临床疗效。

Sonoclot标记曲线用于体外循环后凝血功能的监测

目的：选用Sonoclot标记曲线监测CPB结束后的凝血功能，观察其特点与效果。方法：选择择期CABG病人9例，于CPB前后抽取血样，分别测定PT、APTT、Fbg、ACT、血小板计数(Plt)和Sonoclot标记曲线。结果：CPB结束用鱼精蛋白1：1拮抗后，ACT值恢复正常，PT、APTT有明显延长，血小板计数和Fbg含量明显下降。Sonoclot标记特征值仍保持正常。结论：病人可以接受在常规CPB方法下的凝血功能变化。Sonoclot标记曲线是一种直接判断凝血功能的便捷方法。

青少年宫教育——学校教育的延伸与补充

青少年宫是社会教育的主要阵地,是学校教育的延伸和补充。在开发学生智力,促进学生美育、德育、体育发展,提供学习表现的机会等方面做出了重要的贡献。

一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道

2017年6月,四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状,采集发病猪的肠道、淋巴结等样品,应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明,该猪场为猪轮状病毒(Po RV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染。通过采取综合防控措施,病情得到有效控制,减少了该猪场的经济损失。

妇科腹腔镜手术气腹对患者血流动力学的影响

目的采用无创血流动力学监测妇科腹腔镜手术气腹对血流动力学和机械通气气道峰压的影响。方法选择择期妇科腹腔镜手术患者(包括子宫肌瘤剔除术,卵巢囊肿剥除术)30例,年龄20～47岁,体质量46～74kg,ASA I～Ⅱ级。常规静脉快速麻醉诱导行气管内插管,持续泵入丙泊酚和瑞芬太尼,间断给予罗库溴铵维持麻醉。使用自动气腹机以1～2L/min的速度向腹腔内注入CO2,维持气腹压在2kPa以下。应用美国BioZ.Com无创血流动力学监测仪,进行血流动力学定量评估(以心输出量、每搏输出量评价左心室泵血功能;以速度指数、加速指数、左心室射血时间、预射血期、收缩时间比率评价左心室收缩功能;以胸腔液体水平、外周血管阻力评价前后负荷),Drager麻醉机进行呼吸参数监测。分别记录气腹前5min(T0)、气腹后5min(T1)、气腹后10min(T2)、腹后20min(T3)、气腹后30min(T4)、停气腹后5min(T5)的血压、心率、左心室功能、前后负荷变化和呼吸指标的变化。结果建立气腹后收缩压和舒张压升高,T2时达到高峰,放气腹后恢复(P<0.01);心排量持续升高,放气腹后5min(T5)与T0比较差异有显著意义(P<0.01);每博量在建立气腹前、后各时间点比较无明显变化,但在放气腹后5min(T5)升高,比较差异有统计学意义(P<0.05)。速度指数建立气腹后下降,T2时达到最低,与T0比较差异有统计学意义(P<0.05);左心室预射血时间在建立气腹后持续升高,放气腹后依然比T0时间高,比较差异有显著意义(P<0.01);左心做功建立气腹后未见明显变化规律,放气腹后与T0比较升高(P<0.05);胸腔液体水平在建立气腹前后无明显变化。外周血管阻力建立气腹后持续升高,放气腹后5min(T5)与T0比较差异有显著意义(P<0.01)。建立气腹后机械通气气道峰压升高,T2时达到高峰,比较差异有显著意义(P<0.01),放气腹后恢复。结论妇科腹腔镜手术气腹建立后气道压明显升高;气腹对血流动力学的影响随气腹压力的增加明显改变。提示对气腹所致肺功能及循环功能的不良影响应严密监护。

超声法评估老年妇科恶性肿瘤患者术前碳水化合物负荷方案

目的通过胃窦部超声检查探讨加速康复外科(enhanced recovery after surgery,ERAS)策略指导下的摄饮摄食方案在老年妇科恶性肿瘤手术患者中的应用。方法选取2018年4月至2019年3月在首都医科大学附属北京朝阳医院择期行腹腔镜手术的老年妇科恶性肿瘤患者90例。依据术前摄饮摄食方案不同分为口服碳水化合物组(研究组)和常规禁食禁饮组(对照组),每组各45例。研究组患者手术前晚20:00~22:00饮用复方碳水化合物饮品600ml,术前2h口服同一饮品300ml后禁饮。对照组患者手术前晚24:00后禁食禁饮。患者入室后行半卧位和右侧卧位胃窦部超声检查,测量胃窦部头尾径和前后径,获得胃窦部横截面积(antral cross-sectional area,CSA),进而计算得到胃容量(gastric volume,GV)及单位体重胃容量(GV/weight,GV/W)。应用GV半定量3级评估法联合GV/W评估患者围术期发生反流误吸的风险。记录两组患者口渴、饥饿评分,恶心、呕吐发生情况及术后首次排气时间。结果半卧位和右侧卧位时,研究组患者CSA、GV、GV/W均显著大于对照组(P<0.05)。共9例患者GV半定量分级为2级或GV/W>0.8ml/kg,均延迟麻醉诱导,无患者于围术期发生反流误吸。两组患者GV半定量评级和GV/W评级比较差异均无显著性(P>0.05)。与对照组比较,研究组患者口渴评分、饥饿评分、恶心评分及呕吐发生率均显著降低(P<0.05),且首次排气时间显著缩短(P<0.05)。结论ERAS理念指导下的摄饮摄食方案虽增加老年妇科恶性肿瘤手术患者麻醉诱导前GV,但不增加反流误吸风险,并能有效减轻患者不适,可在胃超声监测指导下安全应用。

血β_(2)-微球蛋白在肝移植急性肾损伤的判断价值

目的探讨血β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)数值范围在肝移植急性肾损伤(AKI)的分级价值和意义。方法本研究通过回顾性队列研究,选取2009年6月至2019年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院、解放军总医院第三医学中心和首都医科大学附属北京佑安医院行肝移植手术的病例纳入研究。共收集肝移植病例1636例,546例纳入分析。根据发生AKI的情况将其分为AKI组(n=219)和非AKI组(n=327)。定义AKI(1、2、3级)组和β_(2)-MG≤3 mg/L组、β_(2)-MG>3 mg/L组。收集非AKI组与AKI组性别、年龄、体重、终末期肝病模型(MELD)评分、血红蛋白(Hb)、Cr、β_(2)-MG、合并症、病因、术式、肾脏替代疗法(RRT)、28 d死亡率数据。比较AKI组各级β_(2)-MG均值及β_(2)-MG≤3 mg/L、β_(2)-MG>3 mg/L分布。用COX多变量回归分析AKI的影响因素。结果与非AKI组比较,AKI组血滤(P<0.001),28 d死亡率(P=0.006)明显增加。219例AKI患者1、2、3级分别为120、49、50例。β2-MG在AKI 3级均值为(4.81±4.11)mg/L,明显高于非AKI组(P=0.001)、AKI 1级(P=0.012)、AKI 2级(P=0.002)。按β_(2)-MG≤3 mg/L和β_(2)-MG>3 mg/L进行分组后,在AKI各级的人群分布差异有统计学意义(P=0.007)。COX多变量回归分析显示体重(OR:1.031;95%CI:1.015~1.046;P=0.001)和贫血(OR:1.651;95%CI:1.050~2.598;P=0.031)为肝移植术后AKI的独立危险因素。结论β_(2)-MG评价肝移植术后AKI各级有一定的参考价值,尤其在AKI 3级。虽然只验证到体重和贫血为肝移植术后AKI的独立危险因素,但3 mg/L以上β_(2)-MG的意义仍值得进一步探讨。

藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定

为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证。纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定。通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性。结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100%。成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性。p ET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103U·mg-1。研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向。

血清β_(2)微球蛋白对肝移植术后急性肾损伤的预测价值

目的探讨血清β_(2)微球蛋白(β_(2)-microglobulin,β_(2)-MG)数值参考范围在判断肝移植术后急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的价值和AKI各分级的意义。方法选取2003年6月至2013年12月首都医科大学附属北京朝阳医院、解放军总医院第三医学中心和首都医科大学附属北京佑安医院完成肝移植手术的患者697例,分别定义β_(2)-MG≤3 mg/L组、β_(2)-MG>3 mg/L组和非AKI组、AKI(1级、2级、3级)组。收集患者性别、年龄、体质量、终末期肝病模型(model of end-stage liver disease,MELD)评分、Hb、SCr、β_(2)-MG、合并症、病因、术式、肾脏替代治疗(model of end-stage liver disease,RRT)和28 d病死率。结果697例患者肝移植术后AKI的总体发生率为40.9%,其中AKI 1级、2级、3级分别占21.5%、8.8%和10.6%。与β_(2)-MG≤3 mg/L组比较,β_(2)-MG>3 mg/L组体质量、MELD评分、Hb、SCr、β_(2)-MG、AKI分级、贫血、腹水、肺部感染、肝肾综合征、乙型肝炎肝硬化、丙型肝炎、肝癌和28 d病死率均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。AKI分级后,AKI 3级组的β_(2)-MG水平[(4.80±4.12)mg/L]与非AKI组[(2.95±1.68)mg/L]、AKI 1级组[(3.15±1.65)mg/L]和AKI 2级组[(2.78±1.70)mg/L]比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。进一步按β_(2)-MG数值分组后,β_(2)-MG≤3 mg/L的AKI 2级组与非AKI组比较[(1.98±0.46)mg/L比(2.17±0.49)mg/L],差异有统计学意义(P=0.036);β_(2)-MG>3 mg/L的AKI 3级组与非AKI组和β_(2)-MG>3 mg/L的AKI 1级组比较[(6.97±4.38)mg/L比(4.44±1.54)mg/L、(4.64±1.55)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.001,P=0.001)。β_(2)-MG>3mg/L的AKI 3级组β_(2)-MG水平最高,为(6.97±4.38 mg/L)。体质量(OR=1.010,95%CI:1.010~1.037,P=0.001)和贫血(OR=1.571,95%CI:1.056~2.338,P=0.026)是肝移植术后AKI的危险因素。结论β_(2)-MG用于评价肝移植术后AKI各级有一定的参考价值,尤其在AKI 3级。虽然只验证到体质量和贫血为肝移植术后AKI的独立危险因素,但3 mg/L以上β_(2)-MG的意义仍值得进一步探讨。