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细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备
被引量:
3
1
作者
赵莉
陈皓斐
+8 位作者
张文宝
马正海
张壮志
张旭
古努尔·吐尔逊
米晓云
金映红
薛晶
石保新
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期2491-2501,共11页
【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL...
【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70基因的cDNA,酶切和测序结果表明EgHsp70基因已克隆入pMAL-p2x。表达条件优化实验结果筛选出Hsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时,以0.3 mmol.L-1 IPTG于30℃条件下诱导表达4 h。SDS-PAGE显示Hsp70融合蛋白相对分子质量约为68.6kD,经麦芽糖亲和层析法纯化获得了Hsp70融合蛋白,其表达量为2.5 mg.L-1。Western blotting检测证明制备的抗血清与EgHsp70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、E.granulosis虫体蛋白和E.granulosis虫体表面蛋白均能特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1﹕256 000。【结论】在大肠杆菌中表达并纯化获得了EgHsp70融合蛋白,并制备了高效价的兔抗EgHsp70蛋白抗血清,为研制包虫病疫苗及相关诊断试剂奠定了基础。
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关键词
细粒棘球绦虫
热休克蛋白家族基因Hsp70
抗血清
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职称材料
特长隧道标准化施工通风设计数值模拟研究
被引量:
1
2
作者
张瑞平
邱伟超
+2 位作者
王玮
唐宇
陈皓斐
《中国标准化》
2023年第6期176-179,共4页
为了解决高铁特长隧道标准化施工通风量小、污风淤积在隧道与横洞交界处无法排出的问题。依托池黄高铁某特长隧道工程,建立了三维数值计算模型,对比分析三种通风方案的通风流场特征及优缺点,从而对隧道标准化施工通风方案进行了优化。...
为了解决高铁特长隧道标准化施工通风量小、污风淤积在隧道与横洞交界处无法排出的问题。依托池黄高铁某特长隧道工程,建立了三维数值计算模型,对比分析三种通风方案的通风流场特征及优缺点,从而对隧道标准化施工通风方案进行了优化。结果表明:加强掌子面以及横正洞交界处的通风可有效稀释污染物,避免污染物的堆积;在隧道横正洞交界处增设射流风机能够加快污染物在隧道内的流动速度,提高污风排出效率。
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关键词
特长隧道
数值模拟
隧道通风
方案优化
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职称材料
题名
细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备
被引量:
3
1
作者
赵莉
陈皓斐
张文宝
马正海
张壮志
张旭
古努尔·吐尔逊
米晓云
金映红
薛晶
石保新
机构
新疆畜牧科学院兽医研究所
新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程国家重点实验室
新疆疾病预防控制中心免疫规划科
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期2491-2501,共11页
基金
公益性行业(农业)科研专项项目(200903035-12)
文摘
【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70基因的cDNA,酶切和测序结果表明EgHsp70基因已克隆入pMAL-p2x。表达条件优化实验结果筛选出Hsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时,以0.3 mmol.L-1 IPTG于30℃条件下诱导表达4 h。SDS-PAGE显示Hsp70融合蛋白相对分子质量约为68.6kD,经麦芽糖亲和层析法纯化获得了Hsp70融合蛋白,其表达量为2.5 mg.L-1。Western blotting检测证明制备的抗血清与EgHsp70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、E.granulosis虫体蛋白和E.granulosis虫体表面蛋白均能特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1﹕256 000。【结论】在大肠杆菌中表达并纯化获得了EgHsp70融合蛋白,并制备了高效价的兔抗EgHsp70蛋白抗血清,为研制包虫病疫苗及相关诊断试剂奠定了基础。
关键词
细粒棘球绦虫
热休克蛋白家族基因Hsp70
抗血清
Keywords
Echinococcus granulosus(Eg)
heat shock protein 70(Hsp70)
antiserum
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
特长隧道标准化施工通风设计数值模拟研究
被引量:
1
2
作者
张瑞平
邱伟超
王玮
唐宇
陈皓斐
机构
中交路桥华北工程有限公司
中南大学资源与安全工程学院
出处
《中国标准化》
2023年第6期176-179,共4页
基金
中交路桥建设有限公司科技研发项目“高速铁路特长隧道快速掘进关键技术研究”(项目编号:ZJLJ-2020-37)的资助。
文摘
为了解决高铁特长隧道标准化施工通风量小、污风淤积在隧道与横洞交界处无法排出的问题。依托池黄高铁某特长隧道工程,建立了三维数值计算模型,对比分析三种通风方案的通风流场特征及优缺点,从而对隧道标准化施工通风方案进行了优化。结果表明:加强掌子面以及横正洞交界处的通风可有效稀释污染物,避免污染物的堆积;在隧道横正洞交界处增设射流风机能够加快污染物在隧道内的流动速度,提高污风排出效率。
关键词
特长隧道
数值模拟
隧道通风
方案优化
Keywords
extra long tunnel
numerical simulation
tunnel ventilation
scheme optimization
分类号
U453.5 [建筑科学—桥梁与隧道工程]
U455 [建筑科学—桥梁与隧道工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备
赵莉
陈皓斐
张文宝
马正海
张壮志
张旭
古努尔·吐尔逊
米晓云
金映红
薛晶
石保新
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
下载PDF
职称材料
2
特长隧道标准化施工通风设计数值模拟研究
张瑞平
邱伟超
王玮
唐宇
陈皓斐
《中国标准化》
2023
1
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职称材料
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