新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达

【目的】对新城疫病毒(NDV)HN09-69株P基因进行克隆、序列分析和表达鉴定,为研究P和V蛋白的功能,及NDV新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以HN09-69株NDV为研究对象,根据GenBank上发布的相关P基因参考序列设计引物,进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析,将P基因的核苷酸序列与相关参考株的P基因序列进行比对分析并构建进化树。将P基因克隆到原核表达载体PET28a(+)中,得到重组质粒rPET28a(+)-P,将重组表达质粒转化到BL21(DE3)中诱导表达,用SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表达情况。【结果】扩增出了HN09-69株P基因的ORF,序列长度为1 188bp。NDV HN09-69株核苷酸与弱毒株La Sota、clone-30同源性分别为82.5%和82.4%,与强毒株F48E8同源性为84.9%,与鸭源,鹅源NDV核苷酸同源性分别为97.9%～98.4%和96.0%～98.0%。SDS-PAGE电泳和Western blotting检测结果表明,重组P蛋白分子质量约为54ku,符合预期结果,在大肠杆菌中主要以可溶性的形式表达。【结论】NDV HN09-69株与SDWF-02和SD-09鸭源强毒分离株同源性高,亲缘关系近。重组P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。

2010—2011年河南省部分地区H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行病学调查

为了解河南省H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行情况。从河南省15个地市发病鸡场采集病鸡组织样品309份,采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,并利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和RT-PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果表明:3类病毒的总检出率为26.54%,其中NDV、IBV和AIV(H9)的检出率分别为11.00%、3.88%和11.65%。2010年10月NDV和IBV检出率均最高,分别为30.00%、15.00%,2011年1月AIV(H9)检出率最高,为43.24%。2类病毒混合感染的检出率达3.24%。表明2010年7月—2011年4月H9亚型禽流感、新城疫以及鸡传染性支气管炎在河南省部分地区普遍流行,且存在一定程度的混合感染。为有效预防和控制河南省3种主要疫病提供了科学依据。

雌二醇和胰岛素样生长因子-Ⅰ诱导的胰岛素样生长因子-Ⅰ受体和雌激素受体间的作用研究

目的研究发现,雌激素受体(estrogen receptor,ER)与配体的结合导致非核效应,雌二醇可以在所有层面上影响胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factors,IGF-Ⅰ)系统。文中研究雌二醇和IGF-Ⅰ所诱导的胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)和ER之间的相互作用。方法培养乳腺癌细胞MCF-7和NWTB3细胞,在ER和IGF-IR阳性的MCF-7细胞中转染空载体(NEO)导致IGF-IR下降,而在ER阴性的IGF-IR形成的NWTB3细胞中转染ER。免疫沉淀试验研究ER和IGF-IR相互结合,免疫印迹试验研究IGF-IR下游的信号通路激活情况,荧光显微镜下观察显示GFR-ER融合蛋白在细胞内的分布。结果 MCF-7乳腺癌细胞转染IGF-IR反义cDNA(SX13),造成细胞膜上的IGF-IR减少了50%。在NEO的细胞中,雌二醇和IGF-Ⅰ诱导了ER与IGF-IR的快速结合,而在SX13细胞中,该相互作用被遏制。在用ER转染NWTB3细胞过表达IGF-IR后,ER与IGF-IR的相互作用在15 min内被雌二醇和IGF-Ⅰ诱导。结论 ER与IGF-IR的相互作用可能对ER的非核效应至关重要。

鸡α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ基因的克隆和真核表达载体的构建

试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferaseⅠ,ST3GALⅠ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3GALⅠ基因的完整ORF区,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,进行PCR、限制性酶切和DNA序列分析鉴定。结果表明,ST3GALⅠ基因全长1029bp,测序结果同GenBank数据库收录的序列一致,无任何密码子缺失与突变,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上的目的基因大小方向均正确。本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ST3GALⅠ真核表达载体,为下一步的真核表达及对ST3GALⅠ基因的功能研究奠定了基础。

传染性法氏囊病病毒河南分离株(HN04)A片段cDNA的克隆及序列分析

利用RT-PCR技术,以传染性法氏囊病毒河南分离株(HN04)基因组RNA为模板,扩增并克隆IBDV HN04株基因组A片段cDNA。测序结果表明:克隆的A片段全长3260个核苷酸,包括2个部分重叠的开放阅读框(ORFl和ORF2)及两端的非编码区。ORFl和ORF2分别编码含有1012个氨基酸的结构蛋白(VP2-4-3)及含有145个氨基酸的VP5。IBDV HN04株基因组A片段核苷酸序列与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒株核苷酸序列的同源性高达94.9%～99.4%,血清Ⅱ型毒株核苷酸序列同源性为83.8%。对IBDV HN04株的A片段核苷酸及其推导氨基酸进行序列分析,结果显示HN04株与国内外IBDV数株弱毒株的同源性在99.0%以上。

2'-5'寡聚腺苷酸合成酶的抗病毒作用及机制研究进展

2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(OAS)是干扰素诱导产生的重要抗病毒蛋白,可利用细胞内游离的三磷腺苷合成2',5'-磷酸二酯键连接的寡聚腺苷酸(2-5As),后者活化核糖核酸酶L(RNase L),进而抑制DNA病毒和RNA病毒感染。OAS也是细胞内识别病毒双链核糖核酸(dsRNA)的模式识别受体,能够识别具有一定长度或基序特征的病毒dsRNA分子,避免自身免疫应答产生,维持细胞稳态。本文对活化OAS蛋白的dsRNA特征、活化机制、OAS的抗病毒作用以及病毒逃逸OAS-RNase L通路的作用机制进行总结,以期为后续研究提供参考。

我国人畜间布鲁氏菌病流行状况

为了解我国人间、畜间布鲁氏菌病(以下简称布病)流行现状,分析流行特征,利用2006—2017年农业部《兽医公报》公布的畜间布病数据以及公共卫生科学数据中心公布的全国人间布病数据,分析我国人畜间布病在时间、空间和群间的流行特征。结果显示:2006—2017年我国人间和畜间布病流行趋势整体基本吻合,均呈现先上升后下降趋势,但在发病增长率及发病高峰年度上存在差异;人间和畜间布病在发病月份上呈正相关,主要集中在每年的3—8月,其中在5—6月为发病高峰期,表现出明显的季节性特征;空间分布上,人畜间布病病例主要集中在内蒙古和新疆等北方省份,但出现向南方省份扩散的趋势;群间分布上,布病感染动物以绵羊为主,其次为牛,感染人群具有明显的职业特征,以农民为主(76.2%),男性偏多(男女性别比为2.9:1),主要集中在25～64岁(占84.7%)。结果表明,我国人间和畜间布病流行特征基本一致,北方仍然为我国布病的主要流行区,但已开始向南方扩散。因此需要在布病流行高风险季节,针对高风险畜群和人群进行重点防控,按照《国家布鲁氏菌病防治计划(2016—2020年)》确立的目标、防治原则和策略,逐步控制和净化布病。

畜间布病防控存在的问题及应对措施

布鲁氏菌病（以下简称布病），又称波状热，是由布鲁氏菌属细菌引起牛、羊、猪等哺乳动物和人类，共患的一种传染病。其主要特征是侵害生殖系统和关节，引起流产，生殖器官炎症，导致不孕不育等症状。本病不同程度的流行，给畜牧业发展和人类健康带来严重的危害。世界动物卫生组织将布病收录为多种动物共患疫病名录中，我国将其列为二类动物疫病。随着近年畜牧业的快速发展，家畜养殖规模不断扩大，引种和流通愈加频繁，加快了布病的区域传播和流行，农业部兽医局和国家卫计委发布的疫情数据显示我国畜间和人间布病感染数呈现逐年上升的趋势。目前布病疫情形势已经到了历史最严峻的时期，加强布病防控已迫在眉睫，而作为布病防控攻坚战的“主力军”——基层畜牧部门，承担着布病防控的重要任务。因此，本文旨在结合当前固始县布病防控现状及存在的问题进行思考，探讨布病防控的应对措施，为畜间布病防控提供参考。

河南固始县布病防疫社会化服务的探索与实践

本文总结了河南省固始县布病防疫政府购买服务的实践经验,并提出提高服务能力、加强属地管理、加强政府监督和扩大购买服务范围等建议,充分发挥社会化服务在兽医领域的巨大作用,促进动物防疫体制改革。

畜禽活体样品采集技术及注意事项

畜牧业的快速发展促进了动物疫病的变异和传播，使疫病防控工作面临更大挑战。畜禽免疫抗体的监测、流行病学调查、病原学快速诊断已成为疫病防控工作的重要部分。而样品采集是开展各项检测工作的基础，决定着检测结果准确与否，也是兽医人员必须具备的技能。如何科学、快速、安全、高效地完成样品采集对兽医人员提出更高的要求。

如何充分发挥特聘动物防疫专员的作用

随着我国畜牧业的快速发展以及畜禽养殖集约化、规模化程度的不断提高,动物疫病形势日趋复杂。特别是近年来,非洲猪瘟等重大动物疫病及人畜共患病严重威胁着畜牧业的健康发展和人民群众身体健康,给基层动物防疫工作带来了巨大的挑战,而当前大部分基层动物防疫体系工作力量薄弱、队伍老龄化等问题较为突出。

固始县动物疫苗冷链体系建设现状及对策

动物疫苗冷链体系建设是动物疫病防控体系建设的重要组成部分,是事关动物防疫工作成败的重要基础性工程。疫苗在储存及运输过程中的温度是直接影响疫苗质量最重要的因素,因此加强动物疫苗冷链体系建设,确保疫苗的JC存、使用在规定条件下进行,防止疫苗失效变质,从源头上保证免疫注射效果,为全面提升动物疫病防控水平奠定坚实的基础。固始县动物疫苗冷链体系建设虽然较过去有了一定程度的提高,但与国家相关建设标准及实际需求仍有较大差距。

浅谈流浪动物的现状及管理建议

随着人们生活水平的提升,宠物行业迅速发展,也导致了流浪动物数量激增,流浪动物伤人事件时有发生,引起了一系列社会矛盾。本文从流浪动物的现状、存在问题、危害等方面进行了论述,并提出了相应的解决建议,以期能更好地管理、救助流浪动物,减少流浪动物引起的社会问题。

河南固始县村级动物防疫员现状调查与思考

本文调查了河南固始县村级动物防疫员现状,指出村级动物防疫队伍建设中存在管理体系不健全、防疫队伍老龄化严重、专业素质偏低、工资待遇偏低、工作条件差,缺乏必要的安全保障等问题,并提出建立健全基层动物防疫人员聘用和考核机制、加强村级动物防疫人员培训、推进兽医社会化服务,促进防疫机制改革等措施。

猪圆环病毒的分离与鉴定

无菌条件下采集患有多系统衰竭综合征的断奶仔猪的淋巴结、肺脏和脾脏组织病料,对病毒进行电镜观察、间接免疫荧光试验、荧光定量PCR测定、动物人工感染试验。动物人工感染试验结果表明,将第18代PCV2病毒接种于4头未免疫过的健康猪只体内,其中2头有较严重的临床症状,另外2头有较轻微的临床症状,对剖杀时采集的血液进行间接免疫荧光试验,结果呈阳性,说明即使经过多次传代,PCV2病毒仍然能够使猪只感染。

我国禽肉出口面临的问题与应对措施

禽肉是我国较早进入国际市场的畜产品。近年来,我国禽肉产量快速增长,仅次于美国成为世界禽肉第2大主产国。2014年,我国禽肉产量1751万t,占世界总量的18.6%,产值达到6600亿元。我国年出口禽肉50万t,主要出口省市有山东、河南、福建、上海等。