熊脱氧胆酸抑制兔胆结石形成的作用及机制

目的 :观察熊脱氧胆酸 (UDCA)对新西兰兔胆囊结石形成、肝氨肽酶N(APN)mRNA水平及胆汁中APN活性和总蛋白含量的影响 ,探讨UDCA预防胆囊结石形成的机制。方法 :(1)动物模型 :新西兰兔 30只。对照组 10只 ,普通饮食 ;结石组 10只 ,喂含 1.2g·d-1胆固醇的成石饮食 4周 ;UDCA组 10只 ,同时喂饲含 1.2g·d-1胆固醇和 0 .0 45 g·d-1的UDCA饮食 4周。 (2 )APN表达 :根据兔APN基因cDNA序列设计引物 ,提取肝总RNA ,利用RT PCR方法 ,检测肝APNmRNA水平的变化。 (3)APN活性 :用化学法检测。 (4 )胆汁中脂类、总蛋白的含量 :用生化方法检测。 (5 )胆固醇饱和指数 (CSI)计算 :用Carey表计算。 结果 :结石组 6只 (6 / 10 )出现胆囊结石 ,9只 (9/10 )出现胆固醇结晶 ,UDCA组和对照组无结石及结晶出现 ;对照组和UDCA组胆囊胆汁中CSI(对照组 0 .80±0 .0 9、结石组 1.38± 0 .2 7及UDCA组 1.18± 0 .11)、总蛋白浓度 (对照组 1.2 5± 0 .49、结石组 4.5 8± 0 .93及UDCA组 3.12± 0 .78)明显低于结石组 (P均小于 0 .0 5 ) ,而结石组APNmRNAIOD比值 (对照组 0 .6 5± 0 .18、结石组1.0 8± 0 .35及UDCA组 0 .72± 0 .2 3)、APN活性 [对照组 (6 .10± 2 .5 3)U·L-1、结石组 (2 3.6 4± 10 .36 )U·L-1及UDCA组 (8.0

胆汁中氨肽酶N的分离、提纯及其促成核作用的初步研究

目的 观察氨肽酶N(APN )在胆石形成中的成核活性。方法 应用伴刀豆凝集素A亲和层析、羟基磷灰石柱层析及高压液相法从胆石症患者胆汁中分离、提纯胆汁中的APN ,并用模拟胆汁观察APN的成核活性。结果 最终APN纯化倍数达 2 94倍 ,酶的活性为12 .9nM·min-1·μg-1,分子量为 130kDa。随后在模拟胆汁观察到APN有明显的促成核活性。结论 APN在胆固醇结石形成中具有促成核作用。

氨肽酶N在胆固醇结石成因中作用的初步研究

目的 观察胆固醇结石病人和无结石者之间胆囊胆汁中氨肽酶N(APN)活性的变化及熊去氧胆酸 (UDCA)对APN活性的影响。方法 选择胆结石病人 ,随机分成两组 ,服用UDCA组和非服药组 ,无结石行上腹部手术的病例作为对照组。测定胆囊胆汁中蛋白质、APN活性、胆固醇、磷脂、胆盐、胆固醇饱和指数 ,比较各组结果。结果 发现APN活性在胆固醇结石病人胆囊胆汁中含量较无结石者高 (1 2 37± 0 371vs0 895± 0 2 47) ,P <0 0 5 ,服用UDCA后胆汁中APN活性较不服用UDCA者降低 (0 711± 0 2 45vs 1 2 37± 0 371) ,P <0 0 5。结论 本实验显示胆固醇结石病人与无结石者之间存在着APN活性上的差别 ;UDCA能够在降低胆固醇饱和指数的同时 ,也降低APN活性。

胆汁中氨肽酶N的分离提纯及其成核作用的研究

目的 从胆石症病人胆汁中分离、提纯氨肽酶N(aminopeptidasen ,APN) ,观察其成核活性 ,并探讨熊去氧胆酸对APN的影响。方法 应用ConA亲和层析法、羟基磷灰石柱层析及高压液相离子交换柱法分离提纯胆汁中的APN ,并用模拟胆汁系统观察APN的成核活性及比较胆固醇结石组、熊去氧胆酸 (ursodeoxycholicacid ,UDCA)组及对照组胆汁中各种成分的变化。结果 APN的纯化倍数达 339倍 ,该酶的活性为 42 0mU/ug。提纯的APN经SDS PAGE及SepharoseG 2 0 0鉴定为单一成分 ,其分子量为 130KDa。用体外模拟胆汁观察APN的成核活性为 0 5 742 ,表明APN具有促成核活性 ,发现胆固醇结石患者的APN活性较无结石者升高 ,服用UDCA后APN活性降低。胆固醇饱和指数 (cholesterolsaturationindex ,CSI)在胆固醇结石患者较无结石者升高 ,服用UDCA后CSI降低 ;与APN活性下降相平行。结论 APN可能在胆固醇结石形成中通过促进成核并影响胆汁CSI起一定作用。

拓扑异构酶Ⅱα,P糖蛋白在胆囊癌中的表达及其临床意义

目的 从细胞分子水平对胆囊癌化疗的耐药性进行研究 ,为临床化疗药物的筛选提供理论依据并获得更有效的临床化疗效果。方法 应用免疫组织化学的方法 ,检测胆囊癌中的主要耐药基因拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡα ,TopoⅡα)、P糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)的表达情况 ,并结合病理组织学分级、临床分期进行研究。结果 TopoⅡα在胆囊癌中的表达 ( 91 7% )明显高于对照组 ( 10 % ) (P <0 0 5 )。P糖蛋白在胆囊癌中的表达 ( 5 8 3 % )高于对照组 ( 2 5 % ) (P <0 0 5 )。TopoⅡα在低分化癌的阳性率明显高于中高分化癌 ,但与肿瘤的TNM分期无关。P糖蛋白的表达与胆囊癌组织学分级、TNM分期均无关。结论 TopoⅡα在胆囊癌中明显高表达 ,选择TopoⅡα抑制剂进行化疗有助于提高化疗效果。

肝脏微粒体膜脂质成分及膜流动性变化对胆红素葡萄糖醛酸化的影响

目的 研究致胆固醇结石饮食对肝脏微粒体膜成分及流动性的影响 ,探讨影响胆红素葡萄糖醛酸化的因素。方法 通过饮食诱发小鼠胆囊胆固醇结石 ,检测小鼠胆汁中胆红素成分、肝脏胆红素尿苷二磷酸葡萄糖苷醛转移酶 (B UGT)活性及肝脏微粒体膜脂质成分和微粒体膜流动性变化。结果 胆固醇结石小鼠肝脏B UGT活性比正常对照低 (P <0 0 1) ,而胆汁中单结合胆红素占总胆红素的比例升高 (P <0 0 1) ,二者呈显著负相关关系 (r =- 0 6 5 45 ,P <0 0 1) ;同时发现胆固醇结石小鼠肝脏微粒体膜脂区荧光偏振度较正常对照明显升高 (P <0 0 1) ,而微粒体膜胆固醇含量升高 (P <0 0 1) ,微粒体膜胆固醇的含量及膜的荧光偏振度与肝脏B UGT活性的高低显著负相关 ,相关系数 r分别为 - 0 6 36 9(P <0 0 1)和 - 0 45 32 (P <0 0 5 )。结论 致胆固醇饮食增加了肝脏微粒体膜的胆固醇含量和胆固醇与磷脂的比例 ,降低了肝脏微粒体膜的流动性 ,可能是造成胆红素酯化障碍 ,胆汁中单结合胆红素增多 。

原发性高血压患者腹腔镜胆囊切除术内皮素水平的研究

目的 了解腹腔镜胆囊切除术 (laparoscopiccholecystectomy,LC)对原发性高血压患者内皮素 (endothelinET)水平的影响。方法 通过前瞻性研究 ,采用放射免疫法 ,对行LC术和开腹胆囊切除的 37例Ⅱ、Ⅲ期原发性高血压胆囊结石患者及 76例单纯胆石症患者 ,分别于术前、术中、术后测定其血浆ET水平。结果 高血压组术前ET值高于单纯胆石症患者 ,但差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;高血压LC组术中ET值稍高于术前 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,术后ET值显著低于术前、术中 (P <0 0 1) ,高血压开腹组术中ET值稍高于术前 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,术后ET值低于术前 ,但差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;单纯胆石症LC组术中ET值稍高于术前 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,术后显著低于术前、术中 (P <0 0 1) ,开腹组术中ET值稍高于术前 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,术后显著低于术前 (P≤ 0 0 5 ) ;高血压LC组ET值术中与术前及术后与术前差值稍高于单纯胆石症组 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 LC术对原发性高血压患者ET水平无明显影响。

药物诱导胆红素葡萄糖醛酸转移酶的基因表达对小鼠胆结石形成的抑制作用

目的 通过药物诱导肝脏胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（ Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ） 基因表达，观察其对胆固醇结石形成的抑制作用。 方法 对３ 组 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ 小鼠５０ 只分别予正常商品饲料（ 对照组， Ｎ 组）１０ 只，致石饮食（ 胆石组， Ｇ 组）２０ 只，另一组在致石饮食中加００５ ％ 苯巴比妥（ 苯巴比妥组， Ｐ 组）２０ 只，６ 周后观察结石形成率，检测结石中胆固醇沉淀量，比较肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ活性及其基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ水平的表达、胆汁中胆红素成份、血脂变化。 结果 Ｐ 组与 Ｇ 组胆结石形成率差别不显著，但 Ｐ 组比 Ｇ 组小鼠胆结石中胆固醇沉淀量显著减少（ Ｐ＜ ００１） ；３ 组中 Ｇ 组小鼠肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ 活性及基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ水平的表达均最低， Ｎ 组肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ活性最高， Ｐ 组肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ 基因表达ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平最高； Ｇ 组小鼠胆汁中单结合胆红素（ Ｍ Ｃ Ｂ） 占总胆红素的比例在３ 组中最高，而 Ｎ 组最低 结论 致石饮食通过某些机制抑制了肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ 的活性和基因表达，致使胆红素葡萄糖醛酸化障碍，胆汁中 Ｍ Ｃ Ｂ增多，促进了胆固醇结石的形成，苯巴比妥能诱导肝脏 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ 基因的表达，使 Ｂ Ｕ Ｇ Ｔ活性升高?