熊果酸对心肌缺血损伤的保护作用及相关机制研究

目的探讨熊果酸对心肌缺血损伤的保护作用及相关机制。方法体外细胞实验取鼠源心肌细胞H9c2并分为对照组、模型组、熊果酸组(75μmol/L熊果酸作用24 h),采用低氧培养箱培养24 h法建模;比较3组H9c2细胞凋亡率、凋亡相关蛋白表达水平以及RhoA、ROCK1蛋白表达水平。动物体内实验取成年雄性SD大鼠36只并按随机数字表法分为对照组(给予5%二甲基亚砜)、模型组(给予5%二甲基亚砜)、熊果酸组(按40 mg/kg剂量给予熊果酸),采用皮下注射异丙肾上腺素法建模;比较3组大鼠心脏功能指标,血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,心肌缺血面积百分比,心肌组织RhoA、ROCK1蛋白表达水平。结果体外细胞实验结果显示,与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率、凋亡相关蛋白表达水平以及RhoA、ROCK1蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05);与模型组比较,熊果酸组上述指标均明显降低(均P<0.05)。动物体内实验结果显示,与对照组比较,模型组大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室压力最大上升速率(LV+dp/dtmax)、左心室压力最大下降速率(LV-dp/dtmax)均明显降低(均P<0.05),而左心室舒张末压(LVEDP),血清CK-MB、LDH和AST水平,心肌缺血面积百分比以及心肌组织RhoA、ROCK1蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05);与模型组比较,熊果酸组大鼠LVEDP,血清CK-MB、LDH和AST水平,心肌缺血面积百分比以及心肌组织RhoA、ROCK1蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05),而LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax均明显升高(均P<0.05)。结论熊果酸可能通过抑制RhoA/ROCK途径来抑制心肌细胞凋亡,从而对心肌缺血损伤起保护作用。

响应面法优化虎杖总游离蒽醌提取工艺的研究

目的:优化虎杖总游离蒽醌提取工艺。方法:以虎杖总游离蒽醌得率为响应值,在单因素试验基础上,固定提取温度为70℃,提取次数2次,选取溶剂配比、提取时间和液料比3个因素进行Box-Behnken design(BBD)—响应面法(RSM)对其两相酸水解提取工艺进行优化。结果:在提取温度70℃,提取次数2次,溶剂配比0.45,提取时间124 min,液料比26.76时,虎杖总游离蒽醌的提取率最高,可达(16.35±0.75)mg/g。结论:采用Box-Behnken响应面法建立的总游离蒽醌提取工艺模型提取率高,能很好地预测实验结果,优化结果可为生产提供参考依据。

奥拉西坦联合多奈哌齐治疗血管性痴呆效果观察

目的观察奥拉西坦联合多奈哌齐治疗血管性痴呆的效果。方法该院2015年1月至2016年6月接诊的血管性痴呆患者90例,随机分为观察组与对照组各45例。两组均行常规治疗,观察组予奥拉西坦联合多奈哌齐治疗,对照组单独使用多奈哌齐治疗,比较两组患者治疗后的认知功能和生活自理能力、疗效及不良反应情况。结果观察组治疗总有效率为91.1%,高于对照组的71.1%,精神状态量表(MMSE)和日常生活活动能力(ADL)评分亦高于对照组,不良反应发生率8.9%,低于对照组的35.6%;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论奥拉西坦联合多奈哌齐治疗血管性痴呆疗效优于单独使用多奈哌齐,能改善患者认知功能,提高生活能力,且不良反应率较低。

吴茱萸碱介导线粒体凋亡途径保护H_(2)O_(2)所致L-O2肝细胞损伤

目的探究吴茱萸碱对过氧化氢(H_(2)O_(2))所致L-O2肝细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法将L-O2肝细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组;对照组细胞为正常培养的L-O2细胞,H_(2)O_(2)组细胞用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)处理细胞6 h,低、中、高剂量实验组细胞分别用4、8和16μmol·L^(-1)的吴茱萸碱处理细胞24 h后,再用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)继续处理细胞6 h。用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞存活率,用流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,用JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位,用化学发光仪检测三磷酸腺苷(ATP)水平,用蛋白质印迹法检测各组细胞相关蛋白表达水平。结果对照组、H_(2)O_(2)组、高剂量实验组细胞存活率分别为(100.00±3.92)%、(64.09±2.69)%和(94.89±5.78)%,细胞凋亡率分别为(3.05±0.27)%、(19.75±1.47)%和(5.58±0.34)%,JC-1红/绿荧光比值分别为2.55±0.37、0.55±0.03和2.11±0.11,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cl Caspase-3)蛋白表达水平分别为0.34±0.02、1.07±0.05和0.40±0.04,细胞色素(Cyt C)蛋白表达水平分别为0.30±0.02、0.91±0.09和0.35±0.03,磷酸化C-Jun氨基端激酶(p-JNK)蛋白表达水平分别为0.32±0.03、1.04±0.04和0.52±0.05,线粒体裂变因子(Mff)蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.94±0.15和0.45±0.05。以上指标,H_(2)O_(2)组与对照组比较,高剂量实验组与H_(2)O_(2)组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吴茱萸碱预处理可通过改变线粒体膜电位介导线粒体凋亡途径,抑制细胞凋亡,从而减轻H_(2)O_(2)所致的L-O2肝细胞损伤,这可能与JNK/Mff通路有关。

中药组方联合门冬氨酸钾镁治疗肝硬化的临床疗效观察

[目的]通过临床疗效观察及免疫组化研究探讨中药组方治疗肝硬化的临床治疗效果。[方法]选取2016年2月～2018年4月收治的病毒性肝炎后肝硬化患者100例,随机分为对照组和研究组,每组各50例,记录2组患者中显效、好转、无效的例数,计算总有效率。记录2组患者主要症状及体征改善情况,记录治疗前后胁痛、纳差、乏力、腹胀、肝大、黄疸、出血等症状的病例数,将2组治疗后的病例数进行统计学分析。治疗前后进行肝功能检查,比较2组数据差异;用ELISA检测患者治疗前后血清中TNF-α、IL-6和IL-8水平,比较2组数据差异;采用检测TGF-β1、CXCR1 mRNA和IL-8 mRNA的表达含量。[结果]治疗前,对照组与研究组各指标差异无统计学意义;治疗后,2组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。[结论]中药组方联合门冬氨酸钾镁治疗病毒性肝炎后肝硬化的临床治疗效果较好。

基于谱效关联分析的吴茱萸抗炎活性的质量标志物研究

目的采用谱效关联分析方法探索吴茱萸Euodia rutaecarpa抗炎活性的质量标志物(quality marker,Q-Marker),为其抗炎活性的质量控制提供依据。方法采用超高效液相色谱(UPLC)对24批吴茱萸药材进行指纹图谱分析;以脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立体外炎症细胞模型,考察24批吴茱萸药材对细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)以及细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide-synthase,iNOS)水平的影响;采用SPSS软件关联指纹图谱色谱峰峰面积与抗炎活性的关系,并采用UPLC-四级杆飞行时间质谱(QTOF-MS)对吴茱萸的抗炎活性成分进行指认。结果24批吴茱萸药材对RAW264.7细胞上清液NO抑制率为12%~82%,谱效关联分析共筛选出14个吴茱萸潜在抗炎成分,分别为吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等吲哚喹唑啉类生物碱以及奎宁酸类成分、绿原酸类成分、喹诺酮类生物碱等。与模型组比较,柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸、隐绿原酸可显著抑制RAW264.7细胞上清液中NO水平及细胞内iNOS水平(P<0.05、0.01)。结论柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸和隐绿原酸为吴茱萸抗炎活性的Q-Marker。