脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1～ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。

荧光定量PCR与半定量PCR检测HBVDNA的对比分析

目的对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBVDNA的载量,为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。方法取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测,结果作统计学分析。结果两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异(χ2=1.75,P>0.05)。结论临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量PCR法检测血清HBVDNA的载量。

婴儿母传麻疹抗体的动态观察及对麻疹疫苗的免疫应答

检测142对母、婴血清中的麻疹血凝抑制抗体(HI),结果有19对母、婴抗体均为阴性,7例低滴度(≤1∶4)抗体母亲的婴儿抗体也为阴性,麻疹抗体的阴性率母亲为13.4%,刚出生的婴儿为18.3%,抗体几何均值(GMT)分别为8.3和6.5.婴儿在3、5、7及8月龄时抗体累积阴性率分别为51.0%、78.1%、97.8%及100%.对母传麻疹抗体消失的14例3月龄、39例5月龄及21例7月龄婴儿进行沪_(191)麻疹减毒活疫苗接种,免疫1月后的抗体阳转率分别为57.2%、97.5%及100%.抗体GMT为12.34、18.89和22.23,在有麻疹患者的地区可考虑将免疫年龄提前到6月龄.

肺炎衣原体膜表面蛋白重组质粒的构建

目的构建表达肺炎衣原体膜表面蛋白(OMP)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白.方法用高保真PCR方法从肺炎衣原体扩增OMP片段,双酶切后插入原核表达质粒pQE 30,在大肠杆菌M15中表达.结果 重组质粒经双酶切鉴定与目的基因长度相符;各表达蛋白经SDS PAGE分析,相对分子量与文献相符.结论 该重组质粒可用于核酸疫苗的备选质粒,基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于肺炎衣原体检测试剂盒的制备.

肾病综合征血清肿瘤坏死因子的改变

本文用ＥＬＩＳＡ法检测小儿肾病综合征活动期２０例血清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）浓度，并以３１例健康小儿体检血标本及５例系统性红斑狼疮作对照，结果显示正常儿ＴＮＦ血清浓度为（２．３８±０．５２）ｎｇ／ｍｌ，肾病综合征及系统性红斑狼疮血清ＴＮＦ升高分别为（５．９２±０．９６）ｎｇ／ｍｌ，及（６．１６±０．９９）ｎｇ／ｍｌ，提示ＴＮＦ参与病理过程。

麻疹抗体检测方法的比较研究

采用血凝抑制法(HI)、血熔抑制法(HLI)、中和试验法(Nt)及酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清麻疹抗体,并对此4种方法的敏感性、实用性及易推广性作一客观评价,结果显示HI法简便、快速、特异而可靠,但不及HLI法、Nt及ELISA法敏感,特别是HI抗体<1:2的人,用其他3法部分人仍可测出抗体,但HLI及HI法需用猴血细胞,Nt法需用细胞培养,在广大基层单位推广具有一定困难。因此作者推荐ELISA法,因其具有操作简便、快速、特异及敏感,不需猴血及细胞培养,判断结果方便、正确等优点。

乙肝血清HBV标志定量与HBV DNA的关系及临床意义

目的 探讨乙型肝炎患者的乙肝病毒标志 (HBVM )定量与HBVDNA检出的相关性及临床意义。方法 对 3 89例各型乙肝患者用放射免疫定量分析测定HBVM ,用聚合酶链反应法测定HBVDNA。结果 HBVDNA在乙型肝炎患者血清中总检出率为 5 1 93 % ,并以重型肝炎、急性乙型肝炎为最高 ;慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化其次 ,淤胆型肝炎为最低 ;HBeAg阳性组与抗 HBe阳性组HBVDNA检出率分别为84 76%和 3 4 3 7% ,(P <0 0 0 1)。结论 HBsAg、HBeAg的含量与HBVDNA检出率有明显相关性 ,可用HBeAg替代HBVDNA的检测。

2'-5'寡腺苷酸受体的研究

２┐５寡腺苷酸受体的研究吴南屏王信子刘克洲陈离伟刘新恒①姚曼华①（浙江医科大学传染病研究所，杭州３１０００６）①中科院上海生化所，上海２０００００作者简介：吴南屏，女，４０岁，副研究员，在职博士；指导教师，王信子，女，５８岁，教授，主要研究干扰素...

PCR检测宫颈糜烂患者疱疹病毒、支原体结果分析

ＰＣＲ检测宫颈糜烂患者疱疹病毒、支原体结果分析浙江医科大学传染病研究所（杭州３１０００６）吴南屏王信子吴灵娇陈离伟陈智宫颈糜烂是妇科常见病，病因复杂，常与内分泌、细菌、病毒感染有关。已知疱疹病毒（ＨＳＶ）Ⅱ型与生殖器感染有关〔１〕，支原体可导致非淋球...

抗寡聚腺苷酸PPPA2' P5' A2' P5' A单克隆抗体的研制

将ＰＰＰＡ２Ｐ５Ａ２Ｐ５Ａ（２－５Ｐ３Ａ３）与甲基牛血清白蛋白偶联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得了抗２－５Ｐ３Ａ３单克隆抗体。以〔３Ｈ〕２－５Ｐ３Ａ３作为探针，采用放射免疫沉淀法测定单克隆抗体效价，其单抗经１∶１０００稀释后仍能结合５０％放射性探针，而且有较强特异性，亚型属ＩｇＧ２ａ。

抗PLC/PRF/5肝癌细胞单克隆抗体及其部分特性研究

本文采用杂交瘤技术获得了3株分泌抗PLC/PRF/5细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA和间接免疫荧光法检测证实,所分泌的抗体为抗PLC/PRF/5肝癌细胞的单抗,具有较好的细胞特异性。3株中2株属IgG_1亚美,1林分泌IgG_2a亚类抗体。

麻疹疫苗初免月龄的探讨

１９９０年在诸暨市采集１１３对母、婴血，其母、婴麻疹抗体阴性率均为３１．０％。１９８６年在湖州市采集母、婴配对血１４２份，其抗体阴性率分别为１３．４％和１８．３％，１９９０年又采集１４０对，其抗体阴性率分别为１１．４％和２０．ｏ％。鉴于这一情况，作者认为在麻疹未消灭之前，保护婴儿免于发病，在有麻疹流行的地区，可考虑将初免月龄从８月龄提前到６月龄。

杭M_（13）株麻疹减毒活疫苗免疫持久性的追踪研究

在自然麻疹基本控制的诸暨县，１５８名易感儿童接种杭Ｍ（１３）株麻疹减毒活疫苗后观察其免疫持久性。免后１个月麻疹ＨＩ抗体ＧＭＴ为２５１，阳转率为１００％，免后３年内抗体下降幅度较大，第４年起基本稳定在较低水平上，但抗体阴转率逐年增加，至免后１５年ＨＩ抗体ＧＭＴ为８．１，累积阴转率为１１．４％，仍有８８．６％的接种者具有对麻疹的免疫力，无需进行麻疹疫苗的再接种。对２４名再免对象也进行了长达１２年的连续观察，并探讨了再免的机理是抗体免疫回忆反应。

2′-5′P_3A_3抗病毒活性在细胞间转移

2'-5'P_3A_3是干扰素作用于细胞后产生的三聚腺嘌呤核苷酸,它具有广泛的抗病毒和免疫调节作用.本文就2'-5'P_3A_3抗病毒活性能否在细胞之间转移进行了研究,并证实了这一效应.

浙江省部分地区人群流感病毒抗体检测分析

目的 了解浙江省人群流感病毒血凝抑制抗体水平。方法 对 1999年春采自浙江省三个地区的64 6份正常人血清进行血凝抑制抗体的测定。结果 总阳性率A/京防 /2 62 /95 (H1 N1 )为 65 5 %、A/沪防 /1/98(H3N2 )为 78 1%、B/深防 /12 /97为 63 0 %。三个地区对A/沪防 /1/98(H3N2 )的抗体阳性率及抗体几何平均滴度 (GMT)均较高。不同地区间抗体阳性率和GMT均有很大不同 ,温州、湖州市人群抗体阳性率及GMT明显高于杭州市。结论 A/沪防 /1/98(H3N2 )的同一类病毒在浙江省既往有过流行 ,近期再度流行的可能性不大。不同地区人群的免疫状态是不均衡的。

多重聚合酶联反应检测60例性病病原体

目的 为能一次性同时检测出淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)和解脲支原体 (UU)所引起的泌尿生殖道感染。方法 采用多重聚合酶联反应 (PCR)检测 6 0例性病患者泌尿生殖道标本 ,并与传统方法及单一PCR进行了比较研究。结果 若以传统方法作为标准 ,多重PCR检测NG、CT、UU敏感性分别为 10 0 %、10 0 %、 92 % ,特异性分别为 93 2 %、 93 %、 10 0 % ;与NG、CT及UU单一PCR的符合率均为 10 0 %。配对计数资料卡方检验结果表明多重PCR与传统方法检出NG、CT与UU的阳性率无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 本研究表明多重PCR可同时检测多种病原体 ,且有简便、快速、敏感、特异的优点 ,适用于临床检测。

miR-122对乙型肝炎病毒抗原表达的影响

目的:探讨miR-122对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg表达的影响。方法:设计合成2条miR-122的反义寡核苷酸(anti-miR-122,LNA-antimiR-122)、hsa-miR-122以及阴性对照anti-GFP,脂质体介导转染HepG2.2.15细胞。取细胞转染24 h、48 h后的培养液,时间分辨荧光免疫法检测anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组、hsa-miR-122组以及anti-GFP组HBsAg和HBeAg的表达,定量PCR检测各组HBV DNA的表达。转染48 h后,提取细胞内总RNA,Taqman技术实时荧光定量PCR检测各组miR-122的表达。结果:①转染48 h后anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组miR-122表达明显受抑制,低于阴性对照组(P<0.001)。hsa-miR-122组miR-122水平较阴性对照组升高(P<0.001)。②hsa-miR-122组HBsAg、HBeAg表达均低于阴性对照组(P<0.001);anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组HBsAg、HBeAg表达均高于阴性对照组(P<0.001)。③转染24 h与48 h后各组HBV DNA表达与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-122可调节乙型肝炎病毒抗原表达。

聚合酶链反应检测口腔血中HCV RNA

聚合酶链反应检测口腔血中ＨＣＶ ＲＮＡ浙江医科大学口腔门诊（杭州３１０００６）陈水易，陈民栋，陈晖，彭春梅，陆瑛浙江医科大学传染病研究所陈智，陈离伟输血和不洁静脉用药是ＨＣＶ传播的主要途径，但有相当部分丙型肝炎患者否认具有受血史或静脉药瘾史，故可能还...

杭M_(13)株麻疹减毒活疫苗接种后免疫干扰素产生的研究

应用麻疹减毒活疫苗对易感者进行广泛接种可有效地控制麻疹的流行.然疫苗接种后免疫性能持续多久,目前尚无定论.国内诸暨麻疹疫苗免疫持久性研究协作组(简称'诸暨协作组')较系统地观察麻疹疫苗的免疫持久性。