NLRP3炎症小体在肿瘤中的作用及其抑制剂研究进展

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体是固有免疫系统的重要组成部分,由NLRP3、ASC和Pro-caspase-1组装形成,能介导IL-1β和IL-18等炎性因子的成熟和释放,促进炎症反应,而肿瘤微环境中的慢性炎症对免疫抑制和肿瘤的发生发展具有重要的影响,先天免疫系统中异常活化的NLRP3炎症小体能促进多种肿瘤的发生和发展,因此NLRP3炎症小体成为了抗肿瘤药物研发比较热门的靶标,现对NLRP3炎症小体在一些特定类型的肿瘤中的作用进行介绍,并围绕近年来抑制NLRP3炎症小体的新药开发及药物与相关肿瘤的研究进展进行综述。

过表达Ubc9酶对乳大鼠心肌细胞低氧损伤的保护作用

目的探讨类泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰中的泛素缀合酶类E2I(Ubc9)对体外乳大鼠心肌细胞(NRCM)急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法采用分离纯化细胞法培养NRCM,对NRCM分别转染5,10,20,50和100感染指数(moi)的纯化的大鼠Ubc9基因腺病毒(Adv-Ubc9),转染48 h后在荧光显微镜下分别观察其绿色荧光蛋白(GFP)的荧光强度,并用Western印迹法检测转染效率。NRCM行氧葡萄糖剥夺(OGD)分别处理0,2,4,6,12和24 h后,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、自噬相关蛋白P62/SQSTM1(P62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达。NRCM转染Adv-Ubc9 50 moi 48 h,使得Ubc9过表达,随后OGD处理6 h,建立心肌细胞急性低氧模型,利用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、P62、LC3和类泛素化修饰蛋白1(SUMO-1)的表达水平,蛋白免疫共沉淀法检测Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平。NRCM转染Ubc9的小干扰RNA(Ubc9-siRNA)48 h,使Ubc9沉默,随后行OGD处理6 h,Western印迹法检测活化的胱天蛋白酶3的表达水平。NRCM给予巴伐洛霉素A1(BFA1)50 nmol·L^(-1)作用2 h,Western印迹法检测LC3表达水平。结果Adv-Ubc9在50与100 moi时转染成功且效率一致,与单纯OGD组相比,过表达Ubc9能明显降低OGD引起的心肌细胞凋亡(P<0.01)、降低活化的胱天蛋白酶3的表达(P<0.01),而沉默Ubc9使心肌细胞OGD处理后的活化的胱天蛋白酶3表达上调(P<0.05),说明过表达Ubc9能抵抗OGD引起的心肌细胞凋亡。与正常对照组相比,OGD处理后,自噬底物P62发生堆积(P<0.01),自噬蛋白LC3Ⅱ明显下调(P<0.05),自噬流出现障碍;当过表达Ubc9后能明显逆转OGD引起的自噬底物P62堆积(P<0.05),改善自噬流障碍,但对自噬蛋白LC3Ⅱ影响不明显。在此基础上给予BFA1阻断自噬体与溶酶体融合过程后,与OGD+BFA1组相比,Adv-Ubc9+OGD+BFA1组的LC3Ⅱ表达明显上调(P<0.01),提示Ubc9改善自噬流障碍的作用可能与同时促进自噬激活和自噬降解过程有关;蛋白免疫共沉淀结果显示,与正常对照组相比,OGD处理后SUMO-1蛋白表达水平基本无变化,而过表达Ubc9后,SUMO-1蛋白表达明显上调(P<0.01),OGD处理后,Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平下调(P<0.01),而过表达Ubc9后,Vps34和Beclin1的SUMO化修饰明显上调(P<0.01),说明过表达Ubc9可能通过提高与自噬激活和自噬降解过程均相关的Vps34和Beclin1的SUMO化修饰,从而同时促进自噬激活和自噬降解过程改善OGD后的自噬流障碍,进而抵抗OGD引起的心肌细胞凋亡。结论高表达Ubc9酶能显著抑制OGD导致的心肌细胞凋亡,该保护作用可能是增强了Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平,从而同时促进自噬激活(形成自噬体)和自噬降解(自噬体与溶酶体融合)过程,进而改善OGD后自噬流障碍。

产金属β-内酰胺酶细菌的治疗药物研究进展

金属β-内酰胺酶属于B类β-内酰胺酶,可广泛水解除单环外的其余β-内酰胺类抗生素。产金属β-内酰胺酶的菌株常常表现为多重耐药,增加了临床抗感染治疗的难度。产金属β-内酰胺酶细菌的治疗药物主要包括基于氨曲南的药物联合治疗、头孢地尔、新型β-内酰胺酶抑制剂联合治疗和基于传统抗生素类结构研发的新型抗生素。基于此,概述了产金属β-内酰胺酶细菌的治疗药物的研究进展,以期为产金属β-内酰胺酶细菌感染的临床治疗提供参考。

米诺环素对OGD/R诱导的H9c2细胞损伤的作用研究

目的观察米诺环素对H9c2心肌细胞氧糖剥夺(OGD)/复氧复糖(R)损伤的保护作用,并研究其作用机制是否与抗凋亡有关。方法用减少氧气和糖的供给造成急性心肌细胞缺氧缺糖,然后在预定时间内恢复氧及正常含糖培养基供应的方法建立OGD/R模型。将心肌H9c2细胞分为正常组(常规培养不加干预)、模型组(OGD 6 h/1 h,OGD 6 h/6 h,OGD 6 h/12 h)和低、中、高浓度实验组(OGD/R+1,10和50μmol·L^-1米诺环素)。用台盼蓝和噻唑蓝法检测不同浓度米诺环素和不同时间点复氧对H9c2细胞OGD/R损伤诱导的细胞死亡率或存活率的影响。用Western blotting法检测米诺环素对凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3、Bax、Bcl-2、JNK及p-JNK的影响。结果在OGD 6 h/R 6 h条件下,模型组细胞死亡率为(30.11±6.16)%,与正常组(1.23%)和中浓度实验组(9.33±2.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和中、高浓度实验组细胞OD值分别为0.35±0.01,0.23±0.02,0.27±0.02和0.28±0.03;在OGD 6 h/R 12 h条件下,正常组、模型组和高浓度实验组细胞OD值分别为0.37±0.01,0.27±0.02和0.32±0.02,2个模型组分别与相应的正常组和中或高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和低、中、高浓度实验组的Cleaved Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.83±0.03,1.65±0.24,1.47±0.09,1.29±0.17和0.88±0.16,p-JNK和JNK蛋白相对表达量的比值分别为0.45±0.06,0.84±0.06,0.75±0.05,0.58±0.07和0.37±0.05,模型组的上述指标与正常组和低、中、高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05,P<0.01)。在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和高浓度实验组的Bax和Bcl-2蛋白相对表达量的比值分别为0.52±0.10,1.00±0.13和0.72±0.18,模型组的上述指标与正常组和高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论米诺环素对H9c2细胞OGD/R损伤有保护作用,其保护机制与调节凋亡相关蛋白的表达从而抑制凋亡有关。