湿润暴露疗法/湿润烧伤膏对慢性创面组织中MMP-2和MMP-9表达的影响

目的探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)作用MMP-2和MMP-9促进慢性创面愈合的机制。方法90只Wistar大鼠随机分为5组:MEBO组、贝复新组、慢性组、急性组和空白组,每组18只,构建慢性难愈合创面模型。采用ELISA、Western blot和qRT-PCR技术,检测d 3、14创面组织中MMP-2和MMP-9表达变化。结果(1)与慢性组相比,MEBO组和贝复新组创面愈合时间明显缩短且愈合率升高(P<0.05);且生长情况及病理形态学改变更好;(2)与慢性组相比,d 3标本匀浆中,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达均增高(均P<0.05);而d 14,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9均降低(P<0.05);(3)与慢性组相比,d 3标本,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达量均增高(P<0.05);而d 14,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达均降低(P<0.05)。结论MEBT/MEBO促进慢性创面愈合可能与调控MMP-2和MMP-9,来参与ECM的降解与重塑相关。

再生医疗技术对深Ⅱ度烧伤患者的炎症因子水平及创面愈合的影响

目的:探讨联合应用亲水性纤维含银敷料辅助再生医疗技术对烧伤患者创面愈合及炎症反应的影响。方法:选择2015年3月-2019年1月在笔者医院进行治疗的烧伤患者240例,随机分为对照组和观察组。对照组采用亲水性纤维含银敷料治疗,观察组采用亲水性纤维含银敷料联合再生医疗技术进行治疗。对两组临床疗效、创面愈合及炎症反应影响进行评估比较。结果:观察组临床疗效分级比较显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但两组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者创面愈合时间、肉芽组织生长时间显著短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者血清TNF-α,IL-6及IL-10含量显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率低于对照组,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组创面溶痂率一直高于对照组,观察组创面细菌培养阳性率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:亲水性纤维含银敷料辅助再生医疗技术能够有效促进烧伤患者创面愈合,抑制炎性反应,从而改善烧伤患者预后。

五味消毒饮结合皮肤再生医疗技术对慢性难愈合创面MMP-13/TIMP-1调控研究

目的观察基质金属蛋白酶13(MMP-13)和组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)在慢性难愈合创面中的作用,探讨皮肤再生医疗技术(MEBT)结合五味消毒饮的部分作用机制。方法将90只雄性大鼠随机分为:湿润烧伤膏(美宝)(MEBO)+中药组、rb-FGF组、慢创组、急创组和空白组,每组各18只,建立创面模型,并于造模第3、7、14天采集标本组织,通过ELISA法检测标本组织匀浆中TNF-α和IL-6,以及Western-blot方法检测标本组织中MMP-13和TIMP-1的表达情况。结果(1)MEBO+中药组创面愈合时间短于慢创组(P<0.05),且愈合率高于慢创组(P<0.05)。(2)MEBO+中药组在造模第3天和第7天TNF-α表达高于慢创组(P<0.05);在第14天的时候,表达低于慢创组(P<0.05)。(3)MEBO+中药组在造模第3天IL-6表达高于慢创组(P<0.05);而在第7天和第14天表达低于慢创组(P<0.05)。(4)与慢创组相比,MEBO+中药组在造模第3天和第7天标本组织中MMP-13和TIMP-1的表达均升高(P<0.05);而在第14天,MMP-13的表达降低(P<0.05),TIMP-1的表达也降低(P>0.05)。(5)与慢创组相比,MEBO+中药组中MMP-13/TIMP-1比值在造模第3天的时候增高(P>0.05);且第7天的时候降低(P>0.05),第14天也降低(P<0.05)。结论皮肤再生医疗技术结合五味消毒饮促进慢性创面的愈合可能是通过调控MMP-13和TIMP-1的稳态关系,进而来维持细胞外基质(ECM)的稳态平衡。

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中EGFR表达的影响

目的研究探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(12只)、对照组(12只)、模型组(12只)、贝复新组(12只)及MEBO组(12只),其中,空白组大鼠做背部备皮处理后采用生理盐水纱布湿敷;对照组大鼠做深达筋膜层的全层皮肤缺损创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;模型组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;贝复新组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用贝复新治疗;MEBO组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用MEBO治疗。分别于治疗第3、7、14天取各组大鼠相同部位皮肤或创面组织进行HE染色,并用Western blot法检测组织中EGFR的含量,对比观察各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR的表达水平及组织病理变化。结果局部处理后第3、7天,除空白组外,其余各组大鼠创面组织HE染色病理切片均显示炎症细胞增多,有新生血管生成;局部处理后第14天,对照组、贝复新组、MEBO组大鼠创面组织中炎症细胞消失,创面再上皮化。局部处理后第3、7、14天,空白组大鼠背部皮肤组织中EGFR表达水平无明显变化,F=0.667,P>0.05,差异无统计学意义;对照组、模型组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平变化均较明显,F值分别为79.546、89.600、63.036、56.628,P均<0.01,差异具有统计学意义,其中对照组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平组间两两对比,除贝复新组与MEBO组对比,P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平多个样本均数对比,F值分别为57.036、134.368、92.829,P均<0.01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调大鼠慢性难愈合创面组织中EGFR的表达水平,促进慢性难愈合创面的愈合,能够为MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的临床应用提供理论基础。

BMSCs来源外泌体调节表皮HaCaT细胞及对烧伤创面愈合的促进作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的外泌体对表皮细胞(HaCaT细胞)增殖、侵袭与迁移的影响,以及对小鼠烧伤创面愈合的作用。方法:分离培养小鼠的BMSCs,超速离心法收集BMSCs来源的外泌体,采用BMSCs来源的外泌体培养HaCaT细胞,CCK-8法检测BMSCs来源的外泌体对HaCaT细胞增殖的影响,细胞划痕实验和Transwell实验检测BMSCs来源的外泌体对HaCaT细胞迁移与侵袭的影响。选取25只C57BL/6小鼠构建烧伤模型,22只成功建模,将存活小鼠分为对照组和外泌体组,每组11只,外泌体组烫伤周围注射BMSCs来源的外泌体,对照组小鼠同时注射等体积PBS溶液。采用Image J软件分析小鼠创面愈合率,通过HE染色观察创面组织学变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测创面组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的水平,免疫组织化学染色检测创面组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)表达。结果:成功分离培养出小鼠BMSCs,并得到BMSCs来源的外泌体。与对照组比较,实验组HaCaT细胞增殖活性明显升高;细胞的划痕愈合率较对照组显著升高,细胞侵袭数目较对照组也显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与对照组小鼠比较,经BMSCs来源的外泌体处理的小鼠,第3、7、14、21、28天的创面愈合率显著升高,创面组织结构得到明显改善,且组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量均显著降低,而抗炎因子IL-10的含量显著升高,Ⅲ型胶原表达明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:BMSCs外泌体可促进HaCaT细胞的增殖、侵袭与迁移能力,并减轻小鼠烧伤创面组织的炎症程度,促进创面愈合。

皮肤再生医疗技术对大鼠慢性难愈合创面组织中VEGFR-2表达的动态调控作用

目的动态观察皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed bum ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中VEGFR-2表达水平的影响,探讨MEBT/MEBO促进创面愈合的分子学机制。方法按照随机数表法将90只健康成年SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(18只)、对照组(18只)、模型组(18只)、MEBO组(18只)和贝复济组(18只),其中空白组仅做备皮处理,对照组做全层皮肤缺损创面模型,模型组、MEBO组和贝复济组做慢性难愈合创面模型;模型建立后,空白组大鼠备皮后皮肤予以生理盐水纱布湿敷,对照组及模型组大鼠创面予以生理盐水纱布覆盖治疗,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱覆盖治疗,贝复济组大鼠创面予以贝复济药纱覆盖治疗,并分别于治疗后第3、7、14天检测、对比各组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA的表达水平。结果创面处理后第3、7、14天,空白组大鼠皮肤组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平均无明显变化,P均>0.05,差异无统计学意义;而对照组、模型组、MEBO组及贝复济组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平变化均较明显,P均<0.05,差异具有统计学意义,其中对照组、MEBO组及贝复济组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势。治疗第3、7、14天,MEBO组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白和VEGFR-2 mRNA表达水平均高于模型组,P均<0.05.差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调创面组织中VEGFR-2的表达水平,促进创面愈合。

WPBL教学法在外科学教学中的应用

目的探讨WPBL在外科学教学中的应用效果。方法选择广西中医药大学2014级全日制中医学专业本科120名学生,按学生所在班级分为实验组(n=60)和对照组(n=60),以外科学"急腹症"章节为教学内容,教师对实验组学生应用WPBL模式进行教学,对照组学生采用传统课堂教学法,章节教学结束后对两组学生进行考试评价,并在实验组学生中开展WPBL教学满意度问卷调查。结果实验组学生主观性试题成绩比对照组学生明显提高,差异有统计学意义(P<0.001),两组学生客观性试题成绩和总成绩比较差异无统计学意义(P>0.05)。问卷调查结果显示实验组学生对WPBL教学模式普遍肯定(96.67%),认为该教学可以提高综合分析、解决问题及归纳总结的能力,加强临床逻辑思维能力,提高团队协作精神。结论 WPBL作为一种新的教学模式,虽存在一些不足,但其优势显著,能更好地适应培养新型医学人才的需要,值得在外科学基础教育中推广应用。

广西巴马火麻仁及其成分亚麻酸对幽门螺杆菌的抑制作用研究

目的探讨广西巴马火麻仁及其主要成分亚麻酸对幽门螺杆菌的抑制作用,解释广西巴马人群幽门螺杆菌感染率高、发病率低的原因,为防治幽门螺杆菌感染提供实验参考。方法通过琼脂稀释法和液体稀释法检测广西巴马火麻仁和亚麻酸对敏感性和耐药性幽门螺杆菌的最低抑菌浓度和杀菌浓度,用黄连素作阳性对照,PBS液作阴性对照。结果广西巴马火麻仁和亚麻酸对敏感性和耐药性幽门螺杆菌的最低抑菌浓度分别为8~16 mg/ml、0.128 mg/ml,最低杀菌浓度分别为128mg/ml、0.256mg/ml;黄连素的最低抑菌浓度为8~16mg/ml,最低杀菌浓度为64mg/ml。结论广西巴马火麻仁对幽门螺杆菌有一定的抑制作用,亚麻酸具有明显的抑制作用。

从细胞外微环境探讨MEBT/MEBO对慢性难愈合创面的修复作用

慢性难愈合创面多见于创伤导致的长期卧床患者及糖尿病等慢性疾病患者,具有病程较长、迁延难愈等特点。近年来部分研究学者发现,细胞外微环境中存在的细胞角蛋白、细胞外基质对创面修复具有一定的促进作用。但对慢性难愈合创面具有显著疗效的皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO),其作用机制是否也与细胞外微环境相关,则未见相关研究报道。为此,笔者于本研究中阐述了细胞外微环境中的细胞角蛋白、细胞外基质对慢性难愈合创面修复的意义,并分析了MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面修复与改善细胞外微环境,进而调控细胞分化方向的相关性及可能作用机制,旨在为MEBT/MEBO的临床应用提供部分理论依据。

细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的作用研究进展

细胞角蛋白(cytokeratin,CK)是角质细胞中的骨架蛋白,对细胞形态结构的维持以及损伤组织的修复具有重要作用。随着细胞角蛋白在创面修复中的作用被不断证实,以调节细胞角蛋白表达为作用机理的创面修复新理论、新方法、新技术也应运而生,但相对成熟的技术却较少,遂笔者在本文中综述了细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的作用研究进展,旨在为细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的进一步研究提供思路与线索。

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中CK10表达水平的影响

目的通过对比观察不同治疗方案对大鼠创面组织内CK10表达水平的影响,进一步揭示皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)治疗慢性难愈合创面的部分作用机制。方法将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组(18只)、急创组(18只)、慢创组(18只)、rb-bFGF组(18只)及MEBO组(18只),其中空白组大鼠仅做备皮处理,急创组大鼠建立急性创面模型,慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠建立慢性难愈合创面模型,且空白组大鼠局部皮肤予以生理盐水纱布湿敷,急创组及慢创组大鼠创面予以生理盐水治疗, rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor, rb-bFGF)凝胶治疗, MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)治疗,分别于治疗第3、 7、 14天对比观察5组大鼠皮肤或创面组织的形态学变化及CK10的表达水平。结果 (1)治疗第3天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,其他各组大鼠创面组织水肿明显,可见大量炎性细胞浸润及少量成纤维细胞与新生毛细血管分布;治疗第14天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,慢创组大鼠创面组织内仍有少量炎性细胞浸润,且有大量排列不规则的成纤维细胞分布,而急创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内可见排列整齐的新生毛细血管及完整的毛囊和皮脂腺等皮肤附属器,组织结构接近于正常皮肤组织。(2)治疗第3、 7、 14天,空白组大鼠皮肤组织内CK10表达水平无明显变化,P> 0.05,差异无统计学意义;而急创组、慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平呈现逐渐升高的趋势,P均<0.05,差异具有统计学意义。(3)治疗第7、 14天,急创组、rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均明显高于慢创组,P均<0.05,差异具有统计学意义;治疗第3、 7、 14天, rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均无明显差异,P均> 0.05,差异无统计学意义。结论 MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的疗效不亚于rb-bFGF凝胶,且改变表皮干细胞的外界生存环境,促进表皮干细胞向正常表皮细胞增殖、分化,可能是其促进慢性难愈合创面修复的作用机制。

γδT细胞在创面治疗中的作用及其影响因素研究进展

科学界对于γδT细胞的研究大部分都停留在对肿瘤的治疗,却少见于创面修复的报道,而创面修复一直是临床上的一大难题,只有更深入地探究其作用机制,才能更好地提出防治措施。该文将通过综述γδT细胞在创面愈合中的可能作用及其影响因素,以期为今后研究γδT细胞在创面修复作用及临床治疗创面提供可靠的科学依据。

MEBT/MEBO通过PTEN/AKT通路对慢性难愈合创面中基质金属蛋白酶表达的影响

目的通过观察湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)是否通过同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)通路影响慢性难愈合创面中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,探讨MEBT/MEBO的作用机制。方法 150只Wistar雄性大鼠被随机分为5组,美宝组(30只)、贝复新组(30只)、模型组(30只)、急性组(30只)和空白组(30只),并构建创面模型。于造模的第3、7、14天观察创面愈合情况,并采取创面标本组织,进行HE染色及Masson染色观察各组创面组织形态学变化和Western Blot检测各组PTEN、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白表达情况。结果(1)贝复新组及美宝组创面愈合时间显著短于模型组(P<0.05),创面愈合率高于模型组(P<0.05),且创面组织染色结果更好;(2)在造模第3天,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达量明显低于模型组(P<0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达高于模型组(P<0.05);第14天,与模型组比较,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达增高(P<0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论MEBT/MEBO可促进慢性难愈合创面的愈合,其可能作用机制是通过激活PTEN/AKT信号通路影响创面组织中MMP-2、MMP-9表达,及基底膜(BM)的降解与重塑。

湿润暴露疗法/湿润烧伤膏调控PI3K/Akt/eNOS信号通路促进创面修复的机制研究

目的探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)调控PI3K/Akt/eNOS信号通路转录水平影响血管生成促进体表慢性难愈合创面修复的作用机制。方法145只雄性SD大鼠按随机法分成空白组21只、对照组31只、慢性创面组93只,慢性创面组制备完成后按随机法分成模型组、贝复新组和MEBT/MEBO组,每组31只。Real-Time PCR技术检测干预治疗后第3、7和14天创面组织PI3K、Akt、eNOS、VEGFR2的mRNA转录水平。结果(1)MEBT/MEBO组大鼠创面愈合时间及创面愈合率明显优于模型组(P<0.05);(2)与模型组相比,造模后第7天,MEBT/MEBO组大鼠创面组织PI3K、Akt、eNOS、VEGFR2转录水平均高表达(P<0.05或P<0.01)。结论MEBT/MEBO能较理想地促体表慢性难愈合创面的伤口愈合,可能是通过活化PI3K/AKt/eNOS信号通路、刺激创面血管生成的作用机制,进而实现加快创面的愈合速率。

湿润暴露疗法/湿润烧伤膏干预PI3K-Akt-mTOR信号通路促进体表慢性难愈合创面修复的实验研究

目的探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)干预磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B (Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路促进体表慢性难愈合创面的修复机制。方法将160只雄性SD大鼠随机分为空白组24只、对照组(急性全层皮肤缺损组)34只和慢性难愈合创面组102只,慢性难愈合创面组(全层皮肤缺损+注射醋酸氢化可的松)造模成功后再随机分为模型组34只、贝复新组34只和MEBT/MEBO组34只。各组分别干预治疗后观察:(1)创面愈合情况,记录统计创面愈合时间;于第3、7、14天固定焦距拍照创面计算愈合率;(2)并同时于第3、7、14天取创面组织,石蜡切片HE常规染色观察第3、14天病理改变;(3)提取第3、7、14天创面组织蛋白,Western Blot法检测PI3K、p-Akt (S473)、p-mTOR (Ser2448)、p-p70 S6K (Thr389)、p-4E BP1 (Thr37/46)蛋白表达水平。结果 (1)与模型组比较,贝复新组及MEBT/MEBO组显著缩短大鼠创面愈合时间和提高创面愈合率(P<0.05)。(2)造模及干预治疗14天后,贝复新组及MEBT/MEBO组大鼠创面组织病理学形态学改善明显优于模型组。(3)与模型组比较,造模及干预治疗7天后贝复新组及MEBT/MEBO组大鼠创面组织PI3K和磷酸化Akt蛋白高表达(P<0.05),MEBT/MEBO组mTOR及其下游效应分子p70 S6K和4E BP1磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论 MEBT/MEBO可促进体表慢性难愈合性创面的愈合,较好改善其组织病理形态学改变,其作用机制可能与激活PI3K-Akt-mTOR信号通路,促进大量与愈合相关的蛋白质合成有关。