海藻硫酸多糖对铜绿假单胞菌感染的凡纳滨对虾抗氧化防御系统的影响

为了研究海藻硫酸多糖对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗氧化防御系统的影响,试验先采用磷钼络合物法测定5种海藻硫酸多糖(PE-Ⅰ、PE-Ⅱ、LJP-Ⅰ、LJP-Ⅱ、LJP-Ⅲ)总抗氧化活性[以二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照],采用滤纸片法测定5种海藻硫酸多糖的抑菌圈直径,同时测定PA对凡纳滨对虾的半数致死浓度(LC_(50))。将健康的对虾随机分为3组,分别为模型组、试验组及对照组,每组20尾,对照组与模型组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加抑菌效果最好的海藻硫酸多糖的基础日粮,饲喂14 d后模型组和试验组腹腔注射PA菌悬液(浓度为攻毒48 h后的LC_(50))30μL,对照组不做任何处理。攻毒后第24小时、48小时、7天、14天统计死亡率,收集攻毒48 h后各组对虾肠道内容物,计数PA的菌落总数。利用试剂盒测定血淋巴中血浆总蛋白(TP)质量浓度、酚氧化酶(PO)活性,肝胰腺组织中总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化防御酶活性及丙二醛(MDA)含量;采集对虾肝胰腺组织用苏木精-伊红(H.E.)染色试剂盒染色进行组织病理学观察。结果表明:6种物质的总抗氧化活性大小为LJP-Ⅱ>LJP-Ⅰ>LJP-Ⅲ>BHT>PE-Ⅰ>PE-Ⅱ,其中LJP-Ⅱ、LJP-Ⅰ、LJP-Ⅲ总抗氧化活性显著高于BHT(P<0.05);海藻硫酸多糖LJP-Ⅱ在浓度150 mg/mL时对PA的抑菌圈直径最大,达到(15.05±0.04)mm,因此选取LJP-Ⅱ作为日粮添加物,研究其对PA感染的凡纳滨对虾抗氧化防御系统的影响。当攻毒剂量为30μL时,PA对凡纳滨对虾48 h的LC_(50)为7.96×10~(6)cfu/mL。与模型组相比,攻毒后第14天试验组的死亡率显著下降(P<0.05);血淋巴中TP质量浓度、PO活性,肝胰腺组织中SOD、CAT、GSH-Px活性均显著升高(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05)。饲喂添加海藻硫酸多糖LJP-Ⅱ日粮可明显改善PA感染对虾肝胰腺组织、管腔和小管损伤程度,形态结构趋于正常。说明海藻硫酸多糖LJP-Ⅱ可显著提升抗氧化防御系统生化指标水平,减轻PA对肝胰腺组织的损伤。

新形势下海南槟榔产业发展SWOT分析

本文针对海南自贸港建设背景下槟榔产业面临的挑战,通过SWOT分析明确了产业发展的机遇和挑战。优势方面包括海南的地理环境、种质资源、原料产地、科技支撑和产业集群优势;劣势方面包括盲目种植、加工能力薄弱和人才缺乏;机遇方面包括政府重视、自贸港建设和中医药产业发展;挑战方面包括槟榔黄化病、加工滞后、负面舆论、产业政策缺失和自贸港建设需求。最后,针对存在的问题,提出了政策支持、科学种植、产品升级和科技创新等建议。

微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解制备低分子量浒苔多糖的研究

为制备抗氧化活性较强的低分子量多糖,以辽宁营口沿海地区的浒苔为原料,采用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解法制备低分子量浒苔多糖,利用DEAE-52、Sephadex G-100进行层析分离,对比浒苔多糖降解前后的理化性质与抗氧化活性,通过红外光谱法对降解后的浒苔多糖进行结构表征,利用薄层层析、高效液相色谱对分离到的多糖LEPⅢa组分进行单糖组成分析。结果表明,利用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解可在较短时间(15 min)降解得到低分子量的浒苔多糖,经层析分离后,得到3种低分子量浒苔多糖LEPⅠ、LEPⅡ、LEPⅢa,分子量Mw分别为(23.6±0.5)、(24.6±0.6)、(22.9±0.5)kDa。与未降解的浒苔多糖相比,微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解得到的低分子量多糖的分子量、粘度均显著降低(P<0.05);抗氧化活性显著增强(P<0.05)。降解产物的分子量均在30 kDa以下,粘度在2 mPa.s以下;8 mg/mL LEPⅢa的总抗氧化能力由降解前的(315.2±10.3)U/mL增加到(661.8±18.3)U/mL,铁离子还原能力由降解前的51.3%±1.0%增加到83.4%±2.2%。LEPⅢa的红外光谱结果表明其为一种硫酸多糖,硫酸基含量14.6%±0.5%;薄层层析结合高效液相色谱分析表明LEPⅢa是一种由葡萄糖、鼠李糖、糖醛酸等组成的含硫酸基团低分子量多糖,D-(+)-甘露糖、L-(+)-鼠李糖、D-葡糖醛酸、D-(+)-葡萄糖的摩尔比为0.97:4.43:3.13:24.8。本研究表明,利用微波辅助H_(2)O_(2)/V_(C)降解制备低分子量浒苔多糖,能够明显改善多糖的理化性质,显著提高其抗氧化能力,制备的多糖可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。

产耐热纤维素酶菌株的分子鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的水样中筛选出1株60℃生长的纤维素酶产生菌NR615。通过ITS序列及系统发育进化树的分析表明该菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。该菌株在28～60℃生长较好。对菌体及产酶条件进行优化得出:初始pH6.5,碳、氮源分别为结晶纤维素、牛肉膏时有利于产酶。其产生的纤维素酶的最适反应温度65℃,最适pH5.0,且在50～70℃有一定稳定的活性。经过响应面分析优化培养基,发酵5 d时活力达到2.411 3 IU/mL。这些特征表明,该菌株是1株性能良好的耐热纤维素酶生产菌株。

一株耐热纤维素酶产生菌的筛选及酶学特性

从辽宁鞍山汤岗子温泉附近土样中分离得到能产生纤维素酶的真菌,通过形态观察和18S rRNA序列分析,该菌株为蒙昧的散囊菌纲(Uncultured Eurotiomycetes)。实验中对酶学性质进行了检验,测定得出该菌株产生的纤维素酶最适温度为65℃,在温度高达75℃仍能保持70%的酶活力,它的最适pH值为6.5,pH在5～8的范围内酶活力保持稳定。实验表明该菌株所产纤维素酶具有较高的pH稳定性和温度稳定性,值得对该酶进行进一步的研究。

苦瓜多糖的抗氧化活性与降血糖作用相关性研究

采用DEAE-32及葡聚糖凝胶G-75柱层析获得了具有抗氧化活性的苦瓜多糖组分,通过饲喂四氧嘧啶构建小鼠糖尿病模型,探讨了苦瓜多糖的抗氧化活性与降血糖作用的相关性。结果表明,纯化后的苦瓜多糖在20mg/mL时对羟自由基(.OH)清除率可达82%。随着苦瓜多糖体内抗氧化活性增加,其对小鼠血糖升高抑制作用也显著增强,当多糖浓度达到250mg/kg时,降糖效果与格列本脲相同。

脱色素玉米活性肽对小鼠抗运动性疲劳的影响

以小白鼠为试验动物,建立小鼠疲劳模型,探讨脱色素玉米活性肽缓解疲劳的细胞生化机制。根据脱色素活性肽的药理作用,采用运动训练学方法研究了脱色素玉米活性肽对小鼠耐力及抗疲劳能力的影响。结果表明,脱色素玉米活性肽高剂量组(0.075 g/ml)能显著增强小鼠游泳时间、延长爬杆时间及常压耐缺氧时间(P<0.01),增加肝糖原、肌糖原含量(P<0.01),降低血清和肝组织中血清尿素氮(BUN)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活力(P<0.01)。说明脱色素玉米活性肽对增强机体负荷的适应能力、抵抗疲劳产生和加速消除疲劳等方面具有明显作用。

酿酒酵母海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建

从耐热性极强的酿酒酵母菌株AS2 1 41 6中分离纯化出总RNA和mRNA ,以AMV逆转录酶合成cDNA ,采用保守引物 ,从该cDNA中扩增克隆出tps1基因 ,对该基因的全序列分析表明 ,该基因含有 1 50 7个核苷酸 ,与国外报道相关基因的同源性达 99 6%。利用BamHⅠ和SacⅠ切点将tps1基因插入植物表达载体 pBin438多克隆位点上 ,得到tps1基因植物表达载体重组质粒。

小分子苦瓜多糖MCPⅡa的纯化及结构分析

利用酶解结合水溶醇沉提取水溶性的苦瓜多糖(Momordica charantia polysaccharide,MCP),经Sevag法除蛋白、DEAE-纤维素离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤获得活性多糖MCPⅡa。由高效凝胶渗透色谱检测可知MCPⅡa为均一多糖,平均分子质量为13.0 k D,单糖组分分析显示其单糖组成为鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖(各组分物质的量比为12∶3.05∶19.89∶5.95∶56)。傅里叶红外光谱、核磁共振及刚果红实验发现其存在C1、C2、C3、C5连接,在水溶液中具有稳定的β-三股螺旋构象,扫描电镜下显示其为菱形晶体颗粒。

绿色木霉葡聚糖内切酶(EGⅠ)基因克隆及在酿酒酵母中的表达

以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉Sn-9106的总RNA为模板,采用RT-PCR技术获得大小为1 400 bp的cDNA片段,该序列与GenBank中的E00390葡聚糖内切酶序列相比,氨基酸序列同源性达91%。将EGⅠ基因构建入表达载体pESC中,在GAL10启动子控制下,目的基因在酿酒酵母Fm135a中成功表达,所得葡聚糖内切酶经初步纯化后,SDS-PAGE检测为49 kD,比活力为2.45 U/mg。

一种具有自由基清除活性的酸性苦瓜多糖的分离纯化及单糖组成分析

苦瓜粗多糖(MCP)经DEAE-纤维素凝胶柱层析及Sephadex G-100凝胶柱层析纯化后,得到多糖组分MCP Ia,经紫外光谱分析及醋酸纤维素薄膜电泳法纯度检验,结果表明MCP Ia是单一组分。HPLC分析其单糖组成为L-鼠李糖、D-木糖、D-果糖和D-半乳糖,单糖物质的量比为4.4:2.3:1:5.7,另外,MCP Ia还可能含有葡萄糖;MCP Ia红外光谱表明:苦瓜多糖存在分子内和分子间的氢键,分子中存在C—H键伸缩振动,存在—OH的变形振动,存在呋喃糖苷吸收峰,是典型的多糖类化合物。

一株产胞外中性β-葡萄糖苷酶菌株的鉴定及酶学特性研究

从碱性土壤中分离筛选得到一株产胞外中性β-葡萄糖苷酶的菌株ZL-110。采用16SrDNA序列分析方法对其进行分子学鉴定,结果表明,其在分类学地位上归属于芽孢杆菌属。采用SDS-PAGE方法测得该β-葡萄糖苷酶的分子量约为43kD。酶学特性研究结果表明,该酶以水杨酸苷为底物时,最适pH值与最适温度分别为7.0和50℃,是一种中性酶,具有较好的热稳定性。

IGF-1和COX-2在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的检测胰岛素样生长因子(IGF)-1和环氧合酶(COX)-2在子宫内膜组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法 150例子宫内膜样腺癌组织(EA组)、54例非典型增生(AHE组)及84例正常子宫内膜组织(NE组)。应用免疫组化SP法检测IGF-1及COX-2在各组中的表达情况。结果 (1)EA组IGF-1和COX-2阳性表达率(70.0%、78.7%)高于NE组(45.2%、44.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。(2)EA组IGF-1阳性表达在不同子宫肌层浸润间差异有统计学意义(P<0.05);COX-2阳性表达在不同病理分级间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)IGF-1和COX-2在子宫内膜样腺癌中表达呈正相关(rs=0.183,P<0.05)。结论 IGF-1和COX-2在子宫内膜样腺癌中可能存在协同作用,同时检测有利于早期诊断和预测其分化浸润情况。

白色链霉菌聚赖氨酸抑菌作用的研究

筛选到1株聚赖氨酸(PL)产生菌白色链霉菌(Streptomyces albus)。发酵液经过Amberlite IRC-50离子交换粗分离和Sephadex G-25凝胶层析精制,得到纯化的白色链霉菌聚赖氨酸(PL110)。SDS-PAGE分析其分子量为5kDa。应用牛津杯法分析PL110对多种病原菌的抑制作用并测定最小抑菌浓度(MIC)。抑菌稳定性实验表明,高温加热后Streptomyces albus所产生PL110的抑菌作用没有下降;其在低pH值条件下有较好的抑菌效果。最后,应用扫描电镜初步探索了聚赖氨酸的抑菌机理。

醇溶性玉米功能肽对小鼠辐射的防护作用研究

通过60Co-γ射线照射小鼠,检测玉米功能肽对辐射的防护作用。将小鼠按照对照组、给药组进行辐射。3 d后,白细胞、淋巴细胞均显著降低(P<0.01),给药组与对照组差异显著,血小板数目减少不显著(P>0.05),SOD活性下降,MDA含量升高。10 d后,白细胞、淋巴细胞数目有所恢复,给药组增加显著,血小板下降显著,SOD活性升高,MDA含量减少。

芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

以芽孢杆菌作为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化β-葡萄糖苷酶,并测定了其部分酶学性质。结果表明:该酶以水杨酸苷为底物时,最适pH值为7.0,最适温度为50℃,是一种中性酶,具有较好的热稳定性。金属离子对酶活性影响较大,其中Fe2+对酶的激活作用最为明显,而K+对酶有明显的抑制作用。

酶工程课程的创建及教学改革初探

酶工程是高校生物技术专业的主干课。本文结合工作实践 。

绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)基因克隆与表达

绿色木霉Sn-9106是一株分解纤维素能力较强、能利用秸秆固体发酵生产纤维素酶的工业菌株。通常丝状真菌纤维素酶合成受纤维素、槐二糖等的诱导。本研究利用秸秆粉诱导绿色木霉Sn-9106纤维素酶基因,在诱导3.5d时,纤维素酶组分之一——葡聚糖内切酶Ⅰ的mRNA转录达到峰值,收集菌丝提取总RNA,以单链cDNA为模板,PCR扩增获得编码葡聚糖内切酶Ⅰ基因(egl1),去除信号肽序列后构建重组质粒PET-egl1,实现其在大肠杆菌中的表达,所得重组葡聚糖内切酶经组氨酸标签亲和层析纯化得到单一的E-GI蛋白,SDS-PAGE检测为49ku,活力为2.37U/mL。

玉米SOD的纯化与化学修饰

本文利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用金属螯合亲和层析纯化了SOD。比活为8597,纯化倍数为307,回收率为29.4%,电泳后活性染色与蛋白染色均得到3个条带,达到了电泳纯。针对SOD稳定性较差的缺陷,进行了PEG修饰SOD研究。修饰率46%,SOD活性保持度为81%。修饰后的玉米SOD的温度稳定性、pH稳定性均明显提高,与天然SOD相比,PEG-SOD的胰蛋白酶酶切耐受性明显增强。结果表明,PEG修饰玉米SOD是可行的,PEG是一种较好的SOD化学修饰剂。

高温海藻糖合酶产生菌的诱变选育及产酶条件研究

通过紫外线复式诱变,筛选到一株高产高温海藻糖合酶的突变菌株SN02004-01-3,与出发菌株Bacillus sp.SN02004-01相比,其产酶能力提高了3.6倍。传代试验结果证明:突变菌株SN02004-01-3具有良好的遗传稳定性。突变株发酵条件优化后表明:最适培养时间为16h,最适pH为7.0,最适生长温度为70℃。