miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-99a mimics)、miR-99a抑制物(miR-99a inhibitors)以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果(1)高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99a mimics的与转染control mimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱(P<0.05),而MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力明显增强(P<0.01)。(2)Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99a mimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.01);MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力增强(P<0.01),而侵袭能力基本不变(P>0.05)。(3)生物信息学方法预测徼管相关蛋白(MTMR3)是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3'UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。(4)干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论(1)miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。(2)miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。

双光子显微镜在免疫学研究中的应用

双光子显微镜是一种对活体组织进行荧光成像的新技术。它由于具有对细胞损伤小、成像深度大和可用于活细胞长时间观察等优点而逐渐被应用于细胞生物学、神经生物学、免疫学等研究领域。近些年来双光子显微镜在免疫学研究中的应用很广，主要是用于免疫细胞发育、分化、迁移和功能研究等方面。