重组人内皮抑素工程菌菌种稳定性考察

研究重组人内皮抑素突变体质粒HM-E的宿主菌E.coliBL21(DE3)在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性。研究表明,重组人内皮抑素工程菌在传代50代的过程中质粒稳定性(ST)高,为98%,菌体与菌落呈典型的大肠杆菌形态,反复冻融后表达量未下降,目标蛋白在菌体超声的沉淀中质量分数为(58.75±3.78)%,同时,四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT)结果表明目的蛋白质量浓度为20μg/mL时对内皮细胞ECV-304具有很高的抑制率,达(94.72±2.10)%。

人内皮抑素部分序列——Es-2的生物活性研究

目的:检测人工合成多肽Es-2抑制血管生成活性及其对肿瘤生长的影响。方法:采用MTT法和鸡胚给药实验,观察Es-2对肿瘤细胞和鸡胚尿囊绒膜(CAM)上血管生成的抑制情况。建立C57BL/6黑色素瘤(B16F10)小鼠模型,以不同剂量皮下注射给药,测量各组小鼠皮下移植肿瘤体积变化和抑瘤率。结果:Es-2对肿瘤细胞无抑制现象;在CAM实验中,新生血管生长受到明显的抑制。C57BL/6小鼠给药10 d后治疗组与对照组相比,Es-2 20 mg/kg组对小鼠黑色素瘤生长有一定抑制作用,其效果相当于10 mg/kg内皮抑素的治疗效果(P<0.05)。结论:Es-2具有开发成抗肿瘤药物的前景。

重组人内皮抑素工程菌发酵条件的优化

重组人内皮抑素(rhEndostatin)是人内皮抑素经过基因突变获得的新的蛋白质序列,是一种血管生成抑制剂类蛋白,具有抗肿瘤活性。实验对蛋白rhEndostatin产生菌E.coliBL21(DE3)的基本发酵条件进行了研究并用正交试验对培养基成分进行了优化,优化后的培养基组成为:蛋白胨1%,酵母粉0.5%,葡萄糖0.5%,NaCl 0.2%,Na2HPO4.12 H2O 1.5%,KH2PO40.2%,(NH4)2SO40.2%,MgSO4.7 H2O 0.02%,VB15 mg/L,VB21 mg/L,微量元素:CoCl2.6 H2O 5 mg/L,MnCl2.4 H2O,H3BO3,Na2MoO4.2 H2O,AlCl3.6 H2O,Ferric citrate均20 mg/L。优化后的培养基在发酵罐发酵,湿菌重达到45 g/L以上,目的蛋白产量达324 mg/L,为rhEndostatin的进一步研究开发打下了基础。