中国人杜氏肌营养不良症患者基因缺失的研究

作者应用从人类 Xp21区分离得的杜氏肌营养不良症(DMD)基因内的8种探针和肌营养不良蛋白基因的 cDNA 探针对69例无亲缘关系的 DMD 进行了基因分析。结果表明应用基因组探针可检测出9例(13%)在 Xp21区域内有不同程度的缺失,如应用系列 cDNA 探针,基因缺失的检出率上升为56.5%。基因缺失的部位集中于 cDNA 探针8和7所检测的区域,占所有基因缺失患者的80%左右。这些结果有助于开展 DMD 的产前诊断。

应用PCR扩增Y染色体性别决定区序列鉴定山羊胚胎性别

在对山羊的Y染色体性别决定区(SRY)序列进行分析的基础上,设计出特异于山羊SRY序列的PCR引物,对山羊胚胎的分割胚的SRY序列进行扩增,以鉴定胚胎性别。胚胎移植后的妊娠及产羔情况证实,性别鉴定结果可靠。

猴类p^(ERT)87-15位点的多态性分析

应用人X染色体上的PERT87－15DNA探针，分析了猕猴属的猕猴、豚尾猕猴、熊猴、毛面短尾猴和红面短尾猴等共5种89只猴子的基因组DNA，首次发现在相当于人类pERT87－15的位点上存在着3个“等距”的多态性位点。单体型分析提示这3个多态位点位于其X染色体上。这些结果表明，人类某些基因组探针也可适用于某些灵长类动物基因组DNA的多态性分析，并为研究动物DNA及其种系发生提供了新的信息。

试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定

奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期 ,在显微操作下 ,吸取4～6个胚胎细胞 ,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊 ,移植后妊娠率分别为37 5% (牛 ,3/8)和61 4% (羊 ,27/44)。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊 ,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。

转人血清白蛋白基因试管牛的研究

构建了含人血清白蛋白（hALB）基因的cDNA全序列、内含子1以及山羊β－酪蛋白基因启动子和5’端上游调控序列在内的乳腺表达载体pcDNA3.1－GCALBm，并通过显微注射将其导入经过体外受精（IVF）的奶牛受精卵中，体外培养到桑椹胚后期，取出少许细胞，应用巢式PCR对其进行目的基因整合及性别的预鉴定，将10枚整合胚移植于8头受体母牛，结果有3头妊娠，受孕率为37.5％（3／8），其中2头于妊娠中期流产，另有1头足月分娩产下1头有人血清白蛋白基因整合的雄性转基因试管牛，转基因实验的总有效率为12.5％（1／8）。

山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析

用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 。

红系特异的GFP基因在转基因小鼠中的整合和表达

应用荧光定量PCR技术对由位点控制区LCR的HS2元件和 β 珠蛋白基因启动子指导的红系特异表达绿色荧光蛋白 (GFP)基因的转基因小鼠中外源基因拷贝数进行测定 ,使用荧光显微镜和流式细胞仪检测小鼠外周血中GFP的表达水平 ,并运用荧光原位杂交技术 (FISH)确定了其中两只转基因小鼠中外源基因的整合位点 ,结果表明 :在转基因小鼠中外源基因的拷贝数各不相同且相差较大 ,而且拷贝数与GFP基因的表达量之间未呈现出相关性 ;FISH分析确定出两只转基因小鼠的外源基因整合于不同的染色体上 ;

124例HbH患者α珠蛋白基因的分析

目的分析１２４例ＨｂＨ患者的α珠蛋白基因的分子缺陷状况及其分布，为ＨｂＨ的基因诊断和产前诊断提供科学依据。方法应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、限制性内切酶分析ＰＣＲ产物、血红蛋白电泳和ＬｏｎｇＰＣＲ等技术，对受检ＨｂＨ病患者的α珠蛋白基因组织进行了鉴定。结果在１２４例ＨｂＨ病患者中，缺失型患者有８３例，占６６．９％；其中右侧缺失型（α－３．７）４５例，占缺失型患者总数的５４．２％，主要分布于广东、湖北、云南等省区，左侧缺失型（α－４．２）３８例，占缺失型患者总数的４５．８％，主要分布在广西和江西；非缺失型患者４１例，占３３．１％；其中ＨｂＣｏｎｓｔｎｔＳｐｒｉｎｇ（ＨｂＣＳ）患者９例，占非缺失型患者总数的２２．０％，Ｈｂ广西（ＨｂＱＳ）患者３例，占非缺失型患者总数的７．３％，其他α＋地贫突变类型２９例，占非缺失型总数的７０．７％。结论不同地区ＨｂＨ患者的α珠蛋白基因的突变类型有明显的差异，该项研究为ＨｂＨ病的分子遗传学和ＨｂＨ病的基因诊断提供了依据。

中国人凝血因子Ⅷ基因多态性和血友病A的产前诊断

本文应用克隆化的凝血因子Ⅷ(下称FⅧ)基因cDNA及其旁侧的DNA片段作为探针,分析了123名中国正常人和22例血友病A患者的FⅧ基因及其旁侧的多态性位点Bcl Ⅰ/18e,Xbal/221,MspI/St14和BgI I/DX13。获得了中国人上述4个位点的RFLP资料,并应用RFLP连锁分析对2例血友病A高危妊娠进行了产前诊断。

亨廷顿氏病发病及基因诊断

亨廷顿氏病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎｓ，ｄｉｓｅａｓｅ，ＨＤ）是神经系统一种严重的常染色体显性遗传病［１］。该病的遗传学基因是在ＩＴ１５基因的开放阅读框架的５’端有一个多态的（ＣＡＧ）ｎ三核苷酸重复序列异常扩增，在正常人群中其拷贝数为１１～３４，而ＨＤ...

应用荧光原位杂交分析移植山羊体内的人源细胞

目的 应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析人造血干细胞(human hematopoietiestem cell,hHSC)经宫内移植至山羊体内后人源细胞的存在、比例及其动态变化。 方法 用人特异17号染色体卫星DNA探针对13头移植山羊进行间期FISH(interphase FISH,IFISH)分析,并用人男性特异Y染色体卫星DNA探针对其中2头移值人男性HSC的山羊进行IFISH分析。标本采用外周血细胞滴片、骨髓涂片和肝脏组织印片。结果 在13头移植山羊中,11头山羊体内有人源细胞存在,其中2头为人男性细胞,证实这些山羊为人/山羊异种移植嵌合体;人源细胞比例随山羊月龄递减,最长已存活21个月;所检测月龄段的移植山羊外周血、骨髓和肝脏组织中人源细胞比例小于1‰,但其中2头山羊肝脏组织中人源细胞集中一处,局部比例高达207.92‰和392.41‰。结论 FISH检测出人源细胞能在山羊体内存在并长期存活,表明山羊是经宫内移植hHSC的合适受体;人源细胞在外周血和骨髓中比例低,而在肝脏组织局部比例高,提示山羊肝脏组织局部内环境适于人源细胞存活、增殖和分化。

氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm）对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示:用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、28及72h后,不仅其γ-珠蛋白mRNA水平升高,其β-珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ-β-珠蛋白基因的转换机制相关。

Westgard多规则质量控制法在HPLC筛查珠蛋白生成障碍性贫血中的应用

目的探讨Westgard多规则质量控制法在应用高效液相色谱(HPLC)技术对珠蛋白生成障碍性贫血进行分子检测和筛查中的应用价值。方法应用全自动HPLC分析系统对血红蛋白分子中胎儿血红蛋白(HbF)和血红蛋白A2(HbA_2)两个组分进行定量检测分析,对每一组分的低值和高值质量控制品与每批次样品进行同批检测,绘制Levey-Jennings质量控制图。应用Westgard多规则1_(2s)/1_(3s)2_(2s)R_(4s)对每批次检测结果进行室内质量控制。分析HbF和HbA_2的两个质量控制品在选用的质量控制警戒值1_(2s)出现前后的重测比对结果,验证质量控制规则在临床诊断中的适用性并探讨该规则在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用价值。珠蛋白生成障碍性贫血的基因诊断分别采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)法检测缺失和反向点杂交技术检测常见的基因突变位点。结果 Westgard质量控制警戒值1_(2s)出现后,重测比对结果差异无统计学意义(P>0.05),与该批次的基因诊断符合率无明显差异。研究建立并验证Westgard多规则1_(2s)/1_(3s)2_(2s)R_(4s)在应用HPLC分析技术对HbF和HbA_2定量检测的质量控制作用,证实可以通过质控品检测出误差类型,降低假失控概率,可应用于定量检测珠蛋白生成障碍性贫血的临床诊断和筛查中。结论 Westgard多规则质量控制法在应用全自动HPLC定量分析珠蛋白生成障碍性贫血的筛查诊断中起到重要的室内质量监控作用,可以评价临床检测报告的可靠性,并且对导致结果不可靠的误差实时监控。

应用氯前列烯醇诱导山羊多胎率的研究

为了增加养羊业的经济效益,以及医学、药学进行山羊动物试验的需要,必须提高山羊的繁殖效率,增加山羊怀孕的多胎率。为此作者特设计采用氯前列烯醇(Cloprostenol)对华东地区的山羊(江苏海门山羊)进行同步处理并配种以达到提高山羊的多胎率,提高山羊利用效率的目的。试验分成两组,氯前列烯醇诱导组(T)136头和非诱导组(UT)136头。结果显示,采用氯前列烯醇诱导的山羊(T)多胎率达到78.7%(107/136),怀孕羔羊数平均达到了2.01只/胎(273/136),而未采用氯前列烯醇诱导的对照组山羊(UT)的多胎率只有39.0%(53/136),怀孕胎数平均为1.31只/胎(179/136),两组之间差异极显著(P<0.01),氯前列烯醇处理组羔羊出生后生长、发育正常。本试验结果表明,通过氯前列烯醇诱导可以明显提高山羊的怀孕多胎率,对山羊优良品种的繁育、种群的快速扩繁及试验用山羊的研制等具有重要的经济价值和应用价值。

血红蛋白G-Chinese的结构分析

本文报道了在中国内地首次发现的一例Hb G-Chinese(α230(B11)Glu→Glnβ2),并应用高压液相层析和微量双偶合法等技术对其一级结构进行了分析。

应用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别的鉴定及移植

本研究是用直接测序技术测定了奶牛SRY的DNA序列,在此基础上设计和合成了牛类SRY特异引物并通过聚合酶链反应(PCR)直接扩增牛胚胎的SRY特异DNA序列,对胚胎进行性别鉴定并移植成功。 研究方法是:由牛静脉血中的白细胞提取DNA,经扩增后直接测定DNA的序列,在此基础上,设计并合成了两对特异于牛SRY序列的PCR扩增引物A、B和C、D。对32头奶牛的白细胞DNA及17枚胚胎(全胚、二分胚、三分胚)的SRY序列进行PCR扩增。实验结果表明,32头奶牛的白细胞DNA 样品,其中有12头公牛样品均显示清晰的特异扩增带,20头母牛样品和空白对照样品均无特异扩增带。17枚奶牛胚胎用引物A、B“一次扩增”结果,有10枚胚胎出现清晰的特异扩增带,另7枚胚胎无特异扩增带,其中2枚三分胚共6个样品,其结果完全一致。用引物C、D进行“二次扩增”的10枚显示特异扩增带的胚胎均显示出另一条清晰的特异扩增带,而另外7枚未显带的样品亦均无特异的扩增带。为验证扩增的SRY序列,特设计了特异于牛SRY的ASO探针(寡核苷酸探针)进行点杂交。结果表明,凡有特异扩增带的均出现阳性杂交结果;相反,无特异扩增带的PCR产物均为阴性杂交结果,证明 扩增的为SRY特异DNA片段。经过性别鉴定的牛二分胚,已有4枚胚胎移植成功。其结果均与胚胎性别鉴定结果相符合。

Hb D Punjab基因的鉴定——DNA 扩增在异常血红蛋白研究中的应用

本文应用作者设计的寡核苷酸引物和探针,通过聚合酶链反应(PCR)扩增β珠蛋白DNA序列,并通过限制酶EcoRI酶谱分析或寡核苷酸杂交,快速鉴定Hb D Punjab基因。应用这种技术先后对汉、藏、哈萨克等3个民族4个家系的Hb D Punjab基因进行了鉴定。

可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统

为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性，构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用；再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体，转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞，同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接，部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８，而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去。