hUMSCs外分泌上清联合替莫唑胺在不同胶质瘤细胞系中的协同增敏作用

目的:探讨人脐带间充质干细胞外分泌上清(hUMSC-CM)联合替莫唑胺(TMZ)在不同胶质瘤细胞系中的协同增敏作用及潜在机制。方法:采用2种血清剥夺法(24和48 h分批次撤血清法)收集hUMSC-CM并制备成冻干粉,设置5种浓度(0、1、3、6和9 g/L)处理大鼠恶性胶质瘤细胞系RG-2、人星形细胞瘤细胞系U251和人胶质母细胞瘤细胞系LN-428。通过CCK-8实验检测hUMSC-CM作用于胶质瘤细胞24、48和72 h后的肿瘤抑制可行性及敏感度。HE染色结合CCK-8法确定6种浓度(0、25、50、100、200和400µmol/L)的TMZ作用于胶质瘤细胞48 h后化疗敏感性的差异。筛选出低、高2种浓度(3和9 g/L)的hUMSC-CM和低、中、高3种浓度(50、100和200µmol/L)的TMZ配伍,作用于胶质瘤细胞后检测细胞活力和病理形态学变化。TUNEL染色检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved PARP1,以及自噬相关蛋白beclin-1和LC3的表达变化,探讨hUMSC-CM与TMZ体外联合给药协同增敏的作用机制。结果:3种胶质瘤细胞系对hUMSC-CM和TMZ的敏感度为RG-2>U251>LN-428。hUMSC-CM(3和9 g/L)与TMZ(50、100和200µmol/L)配伍给药对胶质瘤细胞生长的抑制作用比单独给药组显著增强(P<0.05),且随着配伍药物剂量的增加而增强。其中,9 g/L hUMSC-CM(C9)与50µmol/L TMZ(T50)配伍可有效抑制胶质瘤细胞生长。与C9或T50组相比,CCK-8实验显示C9+T50组细胞活力显著下降(P<0.05),HE染色和TUNEL检测结果显示C9+T50组细胞形态变化明显,出现典型凋亡形态学特征,流式细胞术结果显示C9+T50可诱导胶质瘤细胞周期发生阻滞,Western blot结果显示C9+T50组细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、cleaved PARP1、beclin-1和LC3-II/LC3-I水平显著升高(P<0.01)。结论:(1)hUMSC-CM与TMZ配伍给药对胶质瘤细胞的抑制作用具有广谱性,且两者之间存在增敏作用,在不同细胞系中呈现不同的增敏效果。(2)hUMSC-CM提高胶质瘤细胞对TMZ敏感度的机制可能与调节caspase-8/caspase-3/PARP1信号通路及自噬通路、诱导胶质瘤细胞发生凋亡和自噬有关。

白藜芦醇的临床应用研究进展

白藜芦醇是一种天然多酚类化合物,主要来源于花生、红葡萄、虎杖、桑葚等植物。白藜芦醇可作为心血管系统疾病和神经退行性疾病的预防药物,在心血管系统疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病、癌症等方面均有积极治疗作用。本文综述了白藜芦醇在预防和治疗不同疾病中的作用及机制,以期为临床上安全用药提供参考。

COX-2蛋白和VEGF-C蛋白在胃癌和非胃癌黏膜病变组织中的表达及临床意义

目的研究环氧合酶-2(COX-2)蛋白和血管内皮生长因子C(VEGF-C)蛋白在胃癌组织和非胃癌黏膜病变组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测45例胃癌标本、107例非胃癌黏膜病变组织及23例胃癌手术癌旁正常黏膜组织中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白的阳性表达情况,应用SPSS16.0统计软件进行数据整理分析。结果 1胃癌组织中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表达程度明显高于非胃癌黏膜病变组织及正常胃黏膜组织(P<0.05);2胃癌组织中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表达程度与淋巴结转移和临床分期相关(P<0.05);3 COX-2蛋白与VEGF-C蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关(P<0.05)。结论 COX-2蛋白与VEGF-C蛋白在胃癌前病变发展为胃癌的过程中起着重要作用。COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌的进展及淋巴的转移过程中密不可分,COX-2蛋白、VEGF-C蛋白之间共同作用促进胃癌的淋巴转移。

胃癌及癌前病变中COX-2和VEGF-C蛋白表达及COX-2与H.pylori的相关性研究

目的研究COX-2蛋白和VEGF-C蛋白在胃癌及癌前病变中的表达,探讨COX-2蛋白与幽门螺旋杆菌(H.pylori)的相关性。方法应用免疫组化SP法检测胃癌和其他非癌胃黏膜病变组织中COX-2、VEGF-C的阳性表达情况;对所有病例采用甲苯胺蓝染色法测定H.pylori感染状况。结果 COX-2、VEGF-C在胃癌中的阳性表达率分别为64.4%,57.7%;胃癌组中H.pylori感染的COX-2表达率较未感染组显著升高(P<0.01)。在H.pylori感染的胃癌组与不典型增生组、慢性萎缩性胃炎组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。H.pylori感染的胃癌COX-2表达在高-中分化与低分化之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 COX-2、VEGF-C在胃癌组织中存在过度表达;H.pylori感染导致胃癌组织中COX-2的表达上调,促进其他非癌组织胃黏膜病变中COX-2的表达。

前列腺癌组织中HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白表达及意义

目的观察前列腺癌组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测56例前列腺癌和30例正常前列腺组织中的HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白。结果HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白在前列腺癌中阳性表达率分别为64.3%、44.6%、87.5%,而在正常前列腺组织中阳性表达率为0、3.3%、83.3%,二者比较,HIF-1α、Bcl-2蛋白阳性表达有统计学差异;前列腺癌组织中HIF-1α、Bcl-2阳性表达与病理分级、临床分期有关(P均<0.05),Bax阳性表达与病理分级、临床分期无关(P均>0.05)。Spearman等级相关分析,前列腺癌组织中HIF-1α与Bcl-2表达呈正相关(rs=0.747,P<0.05),HIF-1α与Bax表达呈负相关(rs=-0.539,P<0.05),Bcl-2与Bax表达无相关(rs=0.082,P>0.05)。结论 HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白在前列腺癌组织中高表达,HIF-1α可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达从而参与前列腺癌的发生、发展过程。

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达。结果 MTT法显示17-AAG能明显抑制胃癌SGC-7901细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901细胞发生G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的加大,阳性表达率也逐渐增加。结论 17-AAG通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,上调SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。

姜黄素的药理作用、临床应用及机制研究进展

姜黄素(curcumin)是从姜黄、郁金、莪术等中药根茎中提取的多酚类物质。姜黄素具有抗肿瘤、抗氧化、抑制炎症等广泛的积极生物活性。本文总结姜黄素在心血管系统、神经系统、呼吸系统、消化系统、内分泌系统、肿瘤性疾病中的预防和治疗作用及其机制。

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶(PI)染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白(VEGF-C蛋白)表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖(P<0.05);流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为(3.23±1.43)%、(9.71±2.20)%、(14.15±2.34)%、(23.65±2.58)%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。

17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况;采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.

热休克蛋白90与肿瘤的研究进展

热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠,维持细胞的蛋白质空间构象和保护细胞免受损伤等重要生物学功能的一种蛋白质。HSP90在维持分子伴侣结构、调控细胞周期及凋亡、协调激素信号传递、促进创面愈合方面发挥重要作用。并且HSP90在肿瘤的发生和演进中也发挥重要的作用。近年来,HSP90抑制剂针对恶性肿瘤进行相关研究,在分子靶向治疗方面取得一定的成果,但在临床应用还需进一步的研究。本文以热休克蛋白90为靶标对肿瘤的相互关系研究现状进行综述。

抑癌基因PTEN在膀胱癌中的研究进展

膀胱癌在中国为最常见的泌尿系肿瘤,膀胱癌的发生发展是一个多步骤的过程。PTEN通过FAK途径,P13K途径等发挥其脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长,调节细胞迁移与黏附,参与胚胎的发育及维护免疫系统的稳定。PTEN的失活与膀胱癌紧密联系。PTEN的表达与BCL-2,Survivin,VEGF,P53等因子调控。

VEGF在膀胱癌中的研究进展

膀胱癌是我国泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤。VEGF是最重要的血管生长因子,它在膀胱癌细胞系中的表达提示其可能在膀胱肿瘤的发生和发展中起重要作用,可以刺激膀胱肿瘤的血管生成,促进肿瘤生长,可作为判断膀胱癌生物学行为的指标之一。膀胱VEGF的表达与PTEN、DC、HIF-2a、CD147等有关。VEGF的表达可以作为判断膀胱癌恶性程度和预后的参考指标。

17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌Hep G2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察Hep G2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检测17-AAG处理肝癌Hep G2细胞前后bax和bcl-2的mRNA蛋白表达。结果 AO/EB荧光染色结果显示对照组呈均匀绿色荧光,实验组随着药物浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞逐渐增多;流式细胞仪结果显示17-AAG促进肝癌Hep G2细胞凋亡;RT-PCR结果显示17-AAG能使bax的mRNA蛋白表达水平升高、bcl-2的mRNA蛋白表达水平下降,其作用呈剂量效应关系。结论 17-AAG具有促进肝癌Hep G2凋亡作用,其机制可能与其上调bax、下调bcl-2蛋白表达有关。

热休克蛋白与胃癌的研究进展

热休克蛋白(HSP)是生物进化过程中一类高度保守、具有重要生理功能的蛋白质,主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠,具有维持细胞的蛋白质空间构象和保护细胞免受损伤等重要生物学功能。HSP在肿瘤的发生和演进中发挥着重要的作用。对HSP与胃癌的最新研究进展进行综述。

姜黄素对大鼠脊髓损伤后后肢功能恢复的作用机制

目的:观察姜黄素(CUR)对大鼠脊髓损伤后的运动功能的影响,并探讨其对大鼠脊髓损伤的神经保护作用机制,为临床治疗脊髓损伤提供理论和实验依据。方法:采用HI-0400脊髓打击器制备脊髓急性打击损伤动物模型。将105只SD健康清洁级大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、脊髓损伤组(SCI)、姜黄素组(SCI+CUR),在脊髓损伤模型建立后30 min灌胃,以后每天灌胃1次,直到处死为止。SCI+CUR组0.5%羧甲基纤维素钠制备姜黄素(100 mg/kg)灌胃,Sham组与SCI组同等剂量的0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。应用BBB评分评估大鼠术后3d,7 d,14 d,21 d和28 d后肢运动功能恢复的情况;分别在术后12 h、1 d、3 d和7 d天取脊髓组织和血液,通过免疫荧光法检测NF-κB,免疫组化发检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白,Elisa法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 :BBB评分中3 d时SCI+CUR组与SCI组时无明显差异,7 d、14 d、21 d和28 d SCI+CUR组得分高于SCI组,其差异具有统计学意义(P<0.05);炎症因子NF-κB的表达于脊髓损伤后12 h出现,1 d达高峰,3 d下降。SCI+CUR组中NF-κB在各个时间点的表达与SCI组出现的时间点相对应,SCI+CUR组少于SCI组;Sham组无明显的Bax及Bcl-2蛋白染色。SCI+CUR组中Caspase-3及Bax染色明显较SCI组减弱,而Bcl-2较SCI组增强。结论:姜黄素可以促进大鼠脊髓损伤后后肢运动功能的恢复,其作用机制是通过抑制NF-κB而阻止炎症发生;并通过抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达来抑制细胞凋亡,从而促进了大鼠脊髓损伤后的运动功能恢复。

稀释碘伏对人结肠癌细胞株SW480体外生长的影响

目的观察稀释碘伏对人结肠癌细胞株SW480体外生长的影响。方法体外培养SW480,分别用0.05%、0.025%、0.01%的碘伏处理,MTT法测算细胞生长抑制率,PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。结果 0.05%、0.025%、0.01%的碘伏对SW480的生长抑制率分别为84.0%、84.3%8、4.5%,三者相比,P>0.05;0.01%的碘伏分别作用13、5、min后,SW480的生长抑制率分别为82.4%8、3.6%8、4.0%,三者相比,P>0.05。0.01%碘伏处理SW480细胞1 min即可诱导其凋亡,凋亡率达78.3%。结论稀释碘伏在体外对人结肠癌细胞具有明显的生长抑制及诱导凋亡的作用。

P53、Bcl-2和Bax在膀胱癌的表达及意义

目的探讨P53、Bcl-2、Bax蛋白在膀胱癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学(SP法)测定67例膀胱癌和13例正常膀胱黏膜组织中P53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 P53、Bcl-2、Bax蛋白在膀胱癌中阳性表达率分别为74.6%,64.2%,70.1%,而在正常膀胱黏膜组织中阳性表达率为15.4%,23.1%,100%。P53和Bcl-2蛋白的表达与膀胱癌病理分级呈正相关(rP53=0.667,rBcl-2=0.625,均P<0.05),与临床分期呈正相关(rP53=0.638,rBcl-2=0.717,均P<0.05);Bax蛋白表达随着膀胱癌病理分级、临床分期下降,但无相关性(P>0.05);P53蛋白的表达与Bcl-2蛋白表达存在正相关(r=0.778,P<0.05)。结论 P53蛋白可能参与了膀胱肿瘤增殖水平的调控,Bcl-2、Bax蛋白可能参与了细胞凋亡的调节。P53蛋白可能通过调节Bcl-2蛋白的表达参与膀胱癌的发生、发展。

促红细胞生成素对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:32只SD大鼠,采用夹闭双侧颈总动脉30min再灌注24h制作脑缺血/再灌注模型。随机分为4组(n=8):假手术组、脑缺血/再灌注组、Epo组及阳性对照组(尼莫地平),观察缺血/再灌注后血清一氧化氮(NO)和脑组织匀浆中超氧化歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及脑组织含水量的变化。结果:Epo组血清NO和脑组织匀浆中MDA含量显著下降,SOD活性显著升高,脑组织含水量显著下降,与缺血/再灌注组相比有显著性差异。结论:大鼠脑缺血/再灌注后,Epo能减轻脑组织的含水量,减少自由基的生成,减轻脂质过氧化反应,对脑缺血/再灌注损伤有保护作用。

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法 MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关(P<0.01);两者联合抑制作用显著增加,且表现出时间、剂量依赖性(P<0.01)。(2)RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论 17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。

胰岛素诱导的低血糖大鼠下丘脑增食欲素-A的表达

目的:探讨急性低血糖应激对大鼠下丘脑增食欲素-A(orexin-A)的表达影响。方法:胰岛素皮下注射建立急性低血糖大鼠模型,检测外周血中葡萄糖和胰岛素水平的变化。采用免疫组织化学染色观察下丘脑orexin-A表达的改变和灰度值测量,观察其染色强度。结果:低血糖禁食组大鼠下丘脑orexin-A的表达明显增加(P<0.05),而低血糖进食组orexin-A表达无明显改变。灰度分析显示低血糖禁食组染色强度最高,与对照组比较有明显统计学差异(P<0.05)。结论:急性血糖的降低可以增强大鼠下丘脑orexin-A的表达,而摄食行为可抑制此效应。