烯丙孕素缓释微球的制备及特性研究

为提高烯丙孕素的生物利用度,减少给药次数,降低猪场的养殖成本,旨在制备一种具有缓释长效性能的烯丙孕素缓释微球。以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物(mPEG-PLA)为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备烯丙孕素缓释微球,在模拟胃肠道环境的溶出介质中测定烯丙孕素缓释微球的体外释放情况,并对烯丙孕素缓释微球的药物稳定性进行考察。结果显示,烯丙孕素缓释微球的最佳制备条件为搅拌速度1000 r/min,水相中吐温-80含量0.2%,mPEG-PLA质量浓度0.07 g/mL,油水体积比0.6,水相中明胶含量1.0%;以最佳制备条件制得的烯丙孕素缓释微球平均包封率为(95.64±0.23)%,平均载药量为(9.83±0.61)%,mPEG-PLA对烯丙孕素的包埋效果最佳。烯丙孕素缓释微球呈球形或近球形,外观圆整,平均粒径为82.3μm。烯丙孕素缓释微球能在分别含1%吐温-80,pH 1.2、pH 4.1以及pH 6.8这3种不同溶出介质中持续释放4 h以上,且释放机理符合一级动力学方程。烯丙孕素缓释微球在高湿环境中的稳定性良好,但在高温和强光照射的条件下储存10 d时,烯丙孕素的含量分别下降3.00%和11.92%。烯丙孕素缓释微球具有缓释的性能,且制备方法简单,包封率高,载药量好,易于产业化生产,可进一步推动烯丙孕素在养猪业的开发利用。

鸡胚胎干细胞及其应用研究进展

鸡胚胎干细胞是一种多能性干细胞,从Ⅹ期胚盘分离胚盘细胞或早期鸡胚的生殖嵴分离原始生殖细胞,经体外长期抑制分化培养可得到鸡胚胎干细胞。为维持细胞在培养过程中的未分化状态,需要采用饲养层细胞培养,同时设计合理的培养液配方并添加多种抑制分化或促进增殖的细胞因子。通过碱性磷酸酶活性检测、胚胎表面特异性抗原检测、分化试验及嵌合体试验等方法,可对鸡胚胎干细胞进行准确鉴定。文章主要就鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定方法的研究进展及其应用前景进行简要综述,为进一步发展更高效的鸡胚胎干细胞培养体系并应用于生产实践提供一定的借鉴。

SIV、PCV-2、PRRSV三重PCR检测方法的建立

为建立猪流感病毒（SIV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）单一或混合感染的快速检测方法,针对病毒保守区设计3对特异性引物用于扩增SIV、PCV-2与PRRSV基因的相应片段,并通过优化反应条件,建立了SIV、PCV-2、PRRSV三重PCR检测方法,其最低检测限度为10-4-10-5数量级。用三重PCR和单项PCR/RT-PCR检测40份临床病料,符合率为100%。提示建立的三重PCR检测方法能够对SIV、PCV-2、PRRSV单一或混合感染的临床样品进行快速鉴别检测,具有一定的临床应用价值。

鸡胚胎干细胞的离体培养与鉴定

为探讨鸡胚胎干细胞的培养条件及鉴定方法,本试验以鸡胚成纤维细胞为饲养层,以高糖DMEM为基础培养基并添加SCF、bFGF、mLIF等抑制分化的细胞因子,离体培养鸡x期胚盘细胞。结果显示,该培养体系可以获得典型的呈集落状生长的细胞克隆,传至第4代仍可检测到胚胎干细胞的特定表面抗原SSEA-1;细胞克隆经悬滴——悬浮培养可形成拟胚体,并检测到中、内、外3个胚层的特异性基因CH-T、TTR、和β-activin的表达。结果表明,本试验培养出具有多分化潜能的鸡胚胎干细胞。

鸡Mx蛋白在293T细胞中的表达及其抗病毒活性

[目的]研究鸡Mx蛋白在293T细胞中的表达并检测其抗病毒活性。[方法]将鸡的Mx基因克隆入pEGFP-C1载体,经筛选鉴定后磷酸钙法转染293T细胞,并对转染细胞进行荧光分析以及RT-PCR与Western blot鉴定,同时提取细胞蛋白质,微量细胞病变试验检测其抗新城疫病毒的活性。[结果]试验构建的pEGFP-C1-cMx真核表达载体转染293T细胞后,在胞浆中可检测到绿色荧光,RT-PCR与Western blot结果进一步证实,pEGFP-C1-cMx可在293T细胞中表达,微量细胞病变试验显示,表达的融合蛋白可保护鸡胚成纤维细胞免受新城疫病毒感染。[结论]试验构建的pEGFP-C1-cMx表达载体可在293T细胞中表达具有抗新城疫病毒活性的鸡Mx蛋白。

鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定的初步研究

采用饲养层培养法,以高糖DM EM为基础培养基,同时添加胎牛血清以及5 ng/m l SCF,l0 ng/m l bFGF和1 000 IU/m l mL IF等细胞因子与鸡胚浸出液等,对鸡的X期胚盘细胞进行离体培养,并利用形态学鉴定、AKP染色、体外分化实验等方法对所获得的细胞克隆进行鉴定。实验结果表明,本实验建立的培养体系培养出了具有多分化潜能的类胚胎干细胞。

原代培养大鼠脂肪前体细胞分化过程中PPARγ和C/EBPαmRNA的表达(简报)

脂肪前体细胞是一类具有增殖分化能力的单能干细胞，在体内多种因素的影响下，脂肪前体细胞聚脂分化为成熟脂肪细胞。研究表明，脂肪前体细胞的聚脂分化过程受到一系列基因的调控，其中，过氧化物酶体增殖体激活受体（peroxisome proliferatom-activated receptor gamma，PPARγ）与CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT／enhancer binding protein alpha，C／EBPα）是调控脂肪前体细胞分化的两个主控基因，

鸡Mx基因的原核表达及表达蛋白抗病毒活性初步研究

将鸡Mx基因克隆入pET-32a载体,筛选鉴定后将重组阳性质粒转化到大肠埃希菌株BL21进行诱导表达,表达产物用Western blot鉴定,并经镍亲和层析法纯化及透析复性,得到的蛋白用微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性。结果显示,构建的载体经PCR扩增得到长度为2 118 bp的特异片段,测序结果证实与鸡Mx基因同源性99.95%,Western blot结果显示在78 ku处检测到特异性蛋白条带,微量细胞病变抑制试验结果显示,表达产物经8倍和256倍稀释后可分别保护50%鸡胚成纤维细胞免受新城疫病毒(NDV)和水疱性口炎病毒(VSV)的感染。结果表明,成功表达了鸡Mx蛋白,且表达产物具有一定的抗DNV和VSV活性。

三肽囊素对鸡血浆蛋白组分及IL-2与IL-6含量的影响

144只1日龄黄羽肉鸡随机分为4组,第7日龄时第I～IV组分别注射0、0.005、0.010、0.030mg/kg剂量的三肽囊素,在14、35及56日龄时每组各取一个重复,取血浆,醋酸纤维薄膜电泳检测血浆蛋白各组分的比率,放射免疫法检测血浆IL-2与IL-6的含量。结果显示不同剂量的三肽囊素可提高血浆γ球蛋白水平;对血浆IL-2的影响呈现前期抑制后期促进的作用;对血浆IL-6的影响是早期促进,中期抑制,后期又恢复到较高水平。上述结果表明三肽囊素在不同时期通过促进细胞以及体液免疫水平来提高机体的免疫机能。

16种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究

本试验采用对病毒的阻断、抑制、直接杀灭3种方式,研究了鱼腥草、菊花、山银花、知母、桂枝、麻黄、赤芍、柴胡、贯众、大青叶、桅子、薄荷叶、牡丹皮、水牛角、千里光、地胆草共16种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用。结果表明,16种中药除了牡丹皮、千里光、大青叶外,其余13种中药均有不同程度的抗PRRSV作用,综合3种作用方式,抗PRRSV效果最好的中药是鱼腥草、菊花、知母、桂枝、赤芍,其次为麻黄、柴胡、贯众。

新型生理调节剂的开发及在饲料中的应用

动物的生命活动是受到由机体神经和内分泌两大系统构成的调节网络精确调控的过程，一些与动物生产性能密切相关的生理活动，包括采食、消化、吸收、代谢、生长、发育、繁殖和泌乳等，都受到这一调节网络的精确调控。生理调节剂就是根据这些生理活动的调节机制有针对性地开发出的相关产品，对这些生理过程进行有目的的调控，

全能性相关基因cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达

背景:全能性相关基因cPouV、cNanog和Sox2对鸡胚胎干细胞自我更新和全能性的维持起重要调控作用,其在鸡早期胚胎中的表达情况和作用缺乏了解。目的:通过检测cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达情况,研究基因在早期胚胎发育过程中的作用。方法:将180枚新鲜受精种鸡蛋分为6组,分别孵育0,8,16,22,32,42h后取出。获取胚胎样品,以β-actin为内参基因,采用实时定量PCR检测其cNanog、cPouV和Sox2的相对表达量。结果与结论:cNanog和cPouV的表达量模式相似,在孵育的第0,8,16,22h表达量增加,孵育22h达到峰值,随后逐级下降。Sox2的相对表达量呈明显上调趋势。说明,cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎发育调控中的重要作用,且作为全能性的标志基因,作用有所相同。

胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定(RIA)法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化I、L-2基因表达与分泌的影响。结果表明,用10 ng/mL和1 ng/mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8 h后,能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应,显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05);100 ng/mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势,但与对照组无显著差异(P>0.05)。提示,胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应,并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌,其作用与剂量大小有关。

禽类间充质干细胞的研究:探索与前景

背景:禽类间充质干细胞是来源于禽类中胚层的一类多能性成体干细胞,具有强大的增殖能力和多向分化潜能,应用前景广阔。目的:对禽类间充质干细胞的来源、分离、纯化、培养和分化等方面的最新研究进展进行综述,为禽类间充质干细胞的进一步研究和应用提供理论依据和实验基础。方法:以"mesenchymal stem cells,poultry,chicken,isolation,culture,differentiation"和"间充质细胞,禽类,鸡,分离培养,分化"为检索词,由第一作者检索1990至2014年Pub Med和中国知网数据库,查阅近年禽类间充质干细胞的相关文献,最终保留42篇文献。结果与结论:禽类间充质干细胞在建立禽类细胞体外模型、研究禽类疾病发病机制以及动物营养和肉品质调控方面有着巨大的应用前景。间充质干细胞来源广泛,易于获得,不同组织来源间充质干细胞的分离、纯化、培养和生物学特性也有所不同。但是禽类间充质干细胞的研究还在探索过程中,还有许多亟待解决和深入探究的问题。

cPouV和cNanog基因在鸡胚多能性细胞发育过程中的表达定位

研究cPouV和cNanog基因在鸡早期胚胎中的时空表达规律,探索鸡胚早期发育过程中胚胎干细胞的增殖分化规律,为进一步研究2基因在鸡胚早期发育中的作用奠定基础。本试验分别构建了pMD-18T-cPouV和pMD-18T-cNanog重组质粒,制备了地高辛(DIG)标记cPouV和cNanog基因的cDNA探针,采用原位杂交的方法检测cPouV和cNanog在鸡早期胚胎中的表达模式。结果表明:在原条发生前,cPouV和cNanog基因均匀表达于明区。原条期,cPouV基因在原条及其周围表达,cNanog基因则表达于原条周围,原条上未见表达。随着神经板的形成,2基因大量表达于神经板、神经管和脑部周围。待鸡胚发育至14HH阶段,2基因主要集中表达于头部和心等血管富集处,在外周血管中也能检测到其表达信号。综上表明:随着胚胎的发育,能够表达cPouV和cNanog基因的多能性干细胞逐渐由中央明区向外周迁移。

阳山鸡的生产性能研究

为了解阳山鸡生产性能的基础数据,对阳山鸡繁殖性能和生长性能进行测定。结果表明：阳山鸡的开产日龄在141~150日龄之间,开产体重为1 661 g左右,初生蛋重为38 g左右,年平均产蛋率为26.7%,平均受精率和孵化率分别为87.7%、75.42%;在0、5、9、13、16周龄时,平均体重分别为28.73、307.49、664.28、1 210.28、1 460.54 g,其不同阶段平均日增重分别为7.95、12.74、19.50、11.92 g。

不同饲养层对鸡胚胎干细胞培养效果的影响

目的:为探索鸡胚胎干细胞培养的优化条件,比较不同饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养的效果。方法:用传至第2代的鸡胚成纤维细胞与鸭胚成纤维细胞,经丝裂霉素处理后制作饲养层,比较这2种饲养层以及不用饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养效果的影响。结果:在以鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞作为饲养层的培养体系中,鸡胚胎干细胞均可保持良好的生长状态,而且2种饲养层对鸡胚胎干细胞克隆形成的影响差异不显著(P>0.05)。结论:鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞均可作为较好的饲养层细胞用于鸡胚胎干细胞的离体培养。

三种中药提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

在前期筛选具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作用的中药研究基础上,选取药效较好的三种中药:穿心莲、芦根和夏枯草。为进一步研究其有效抗病毒成分,采用MTT法观察了穿心莲内酯盐、芦根多糖和夏枯草多糖成分对猴肾上皮细胞系(Marc-145)生长的影响,分别采用阻断、抑制、直接杀灭3种作用方式观察了各成分抗RPPSV感染作用。结果显示:穿心莲内酯盐对细胞最大安全浓度为0.16 mg/mL,芦根多糖为0.575 mg/mL,夏枯草多糖为1.125 mg/mL;芦根多糖在三种方式上均有不同程度的抗PRRSV作用,而穿心莲内酯盐和夏枯草多糖阻断PRRSV作用不明显,抑制和杀灭PRRSV作用明显。结果表明穿心莲内酯盐、芦根多糖和夏枯草多糖均有抗病毒作用,为抗病毒中药的主要药效成分。