6-BA与NAA不同浓度配比对大花蕙兰原球茎诱导的影响

以大花蕙兰茎尖为外植体,研究6-BA与NAA浓度梯度配比对大花蕙兰原球茎的诱导、增殖及分化的影响.结果表明:6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L浓度配比下,大花蕙兰茎尖存活率达到93.3%;6-BA0.8mg/L+NAA 0.4mg/L浓度配比下,原球茎诱导率达到85.8%;6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L浓度配比下,原球茎增殖系数达到4.59;6-BA 0.8mg/L+NAA 0.5mg/L浓度配比下,原球茎出芽率达到87.5%.首次报道采用6-BA 0.8mg/L+NAA 0.5mg/L浓度配比组合适合大花蕙兰茎尖培养,可同时获得较高的原球茎诱导率(80.8%)和出芽率(87.5%),比目前已报道的最佳原球茎诱导率(72.7%)和出芽率(76.7%)提高8%以上.

建兰花叶病毒TGB1和TGB2基因的原核表达

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB1,TGB2基因,并将目的基因插入pGEX-4T3中,构建相应的原核表达载体。将表达载体转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后成功表达出目的蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测证实目的蛋白分别是融合GST的CymMV TGB1和TGB2蛋白。两个蛋白的表达为下一步抗体制备以深入开展CymMV TGB1和TGB2功能研究奠定了基础。

一步式IC-RT-PCR同时检测2种兰花病毒的探讨

齿兰环斑病毒(Odontoglossum ring-spot virus,ORSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)复合侵染兰科植物的现象在自然界中非常普遍。通过设计一对简并引物可以同时扩增获得复合感染的兰科植物中两种病毒核酸片段(CymMV约558 bp,ORSV约825 bp),由此建立一步式免疫捕获-反转录-聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)技术以检测2种病毒的复合侵染情况。利用该技术对来自广东汕头的35株兰样进行感病性测试,发现31株呈阳性,感病率为88%。阳性株中,ORSV感染率为87%(27株),CymMV感染率为29%(9株),复合感染率16%(5株),说明这一地区ORSV感病率较高,并与CymMV存在明显复合感染。扩增条带T载体克隆测序表明,与已知CymMV和ORSV分离物的核酸分子平均同源性分别高达97%和99%。

本氏烟ORSV和CymMV病毒的侵染性检测及鉴定

以本氏烟为研究材料,分别接种感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cym MV)的蝴蝶兰病汁液,通过免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)和Western-Blot等分子免疫分析手段,发现这两种在兰花上常见的病毒均能侵染烟草.研究结果为建立有效的多年生兰科植物常见病毒的实验室模式寄主,更深入高效地研究这两种病毒的发病机制提供了有效材料.

妙用“夸张”

“夸张”是语文中常用修辞手法之一，目的在于突出事物的本质和特征，从而引起共鸣，给人以鲜明深刻的印象。心理学家认为：“某些刺激偏离周围环境或偏离人们的预期效果时，会使人们产生新颖感、独特感和惊奇感，这种能引起差异的刺激会很容易唤起人们的注意力，给人们留下深刻的印象。”

启迪思维,从善问开始

问与答,是数学课堂上常见的学习方式。回顾课堂,或许教师更侧重于自己发问的权利,对于学生,只期待他们能圆满回答、顺利解决老师的问题即可。但长此以往,学生在解决此类模仿性、封闭性、确定性的问题中,只会成为亦步亦趋的思维"小跟班"。《数学课程标准》明确指出,使学生能够"运用数学的思维方式进行思考",注重"增强发现和提出问题的能力、分析和解决问题的能力"。问题解决,成为与知识技能、数学思考、情感态度并列的四项具体目标之一。一、精心预设促感悟——发现和提出问题之"起点"

“比较”这把“钥匙”,如何开启?

比较是确定事物之间相同、相似或差异的思维过程和逻辑方法,也是学生理解和掌握知识的一种学习方法。比较,就如同一把打开智慧大门的“钥匙”,数学教学中运用比较,能进行直观体验,丰富感知;找寻联系,探究本质;分辨异同,迁移类推。

西藏法治营商环境问题分析及立法建议

在全国范围内来看,西藏自治区总体的营商环境各项评价指标分数较低,整体排名靠后,营商环境成为制约西藏自治区高质量发展的短板,与国内其他先进地区相比,整体还存在较大的提升空间和优化前景。目前,西藏优化营商环境的规定散见于各级各类规范性文件,而规范性文件给投资者带来的投资安全环境是明显弱于立法的。自治区人大有必要通过地方性立法的方式制定《西藏优化营商环境条例》,使得营商法治环境更加稳定,更符合西藏实际,也利于诚信政府的建设。

无精子症男性激素水平变化及睾丸病理分析

目的通过血清激素水平检测和睾丸病理分析,研究无精子症与男性激素水平变化及睾丸病理的相关性。方法征集80例无精子症男性为研究对象,于3个月内检查精液3次,同时检测血清卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮、垂体泌乳素等,并对睾丸进行活体组织检查。另征集年龄相仿的40例精子质量正常男性为健康对照组,健康对照组只进行血清性激素水平检测。结果 80例患者中32例(40%)激素水平异常,48例(60%)激素水平正常。35例睾丸发现病理改变,32例激素水平异常患者重,26例存在睾丸病理改变。结论无精子症男性常见内分泌病变及睾丸病理变化,其病因可能包括环境因素、内分泌干扰物和基因多态性。

基于网络药理学的护肝清脂片治疗非酒精性脂肪肝病分子机制研究

目的:利用网络药理学的方法研究护肝清脂片治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的物质基础及作用机制。方法:在TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索护肝清脂片全方药材的有效活性成分及其靶点,以类药性(DL≥0.18)和口服利用度(OB≥30%)作为筛选条件,剔除无作用靶点的活性成分,但对文献有报道的化学成分依旧保留。在OMIM、TTD数据库中检索NAFLD的治疗靶点并与药物活性成分靶点做交集,Cytoscape软件构建护肝清脂片-活性成分、活性成分-NAFLD治疗靶点网络,利用DAVID和KEGG数据库对潜在靶点进行富集分析,ClueGo对核心靶点进行Go分析,分析后发现护肝清脂片治疗NAFLD的通路涉及toll样受体信号通路、脂肪细胞因子信号通路、细胞凋亡信号通路等,所得结果通过动物实验进行验证。24只SD雄性大鼠随机分为3组:正常对照组、模型组、护肝清脂片组,持续造模10 w后处死取大鼠肝脏,Western blot和qRT-PCR技术检测大鼠肝组织相关通路的关键蛋白及mRNA的表达情况。结果:护肝清脂片能显著降低高脂饮食大鼠体质量、肝指数及肝脏TC、TG、TNF-α、IL-6水平及p-ASK1蛋白表达,显著升高其肝脏CPT1α mRNA及蛋白表达,显著降低其肝脏MYD88、TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:本研究通过网络药理学的方法,成功构建了护肝清脂片-活性成分-NAFLD治疗靶点网络,预测护肝清脂片治疗NAFLD的物质基础和作用机制,并通过动物实验进行初步验证,结果与网络药理学预测结果相符。护肝清脂片及其活性成分可能通过影响脂肪细胞因子信号通路、toll样受体信号通路、细胞凋亡信号通路对NAFLD起到治疗作用。

护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响

目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激(ER stress)的影响及其可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组(CON)、FFA组、护肝清脂片低剂量组(HG-L)、护肝清脂片中剂量组(HGM)、护肝清脂片高剂量组(HG-H)及非诺贝特阳性对照组(FF),在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)含量及培养上清液谷草转氨酶(AST/GOT)、谷丙转氨酶(ALT/GPT)的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ蛋白及(或)mRNA的表达情况。利用siRNA瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、ALT含量升高(P<0.001);与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆积,差异有统计学意义(P<0.05),并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δsiRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义(P<0.001)。然而,与PKC-δsiRNA+FFA组相比,PKC-δsiRNA+HG-H组GRP78和P-PERK表达下调更显著(P<0.001,0.01),CHOP和CASPASE-12则无统计学差异(P>0.05)。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。

护肝清脂颗粒的质控研究

目的:研究护肝清脂颗粒的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法定性鉴别复方中泽泻、山楂、荷叶、蒲黄和三七药材;采用HPLC法对复方中香蒲新苷、金丝桃苷、荷叶碱和23-乙酰泽泻醇B的含量进行测定。采用Waters Symmetry C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相,流速1.0 mL/min,分段变波长检测,柱温40℃,进样量10μL。结果:泽泻、山楂、荷叶、蒲黄和三七的TLC图斑点清晰,阴性对照无干扰。香蒲新苷、金丝桃苷、荷叶碱和23-乙酰泽泻醇B检测浓度线性范围分别为18.6～186.2μg/mL、22.9～228μg/mL、2.0～20.1μg/mL、7.7～76.8μg/mL;精密度、重复性及稳定性良好(RSD<2.0%);加样回收率分别为99.87%～105.0%、95.15%～96.93%、98.00%～101.1%、96.65%～99.98%。结论:建立的薄层色谱法和高效液相色谱法简便、准确,适用于护肝清脂颗粒的质量控制。

具有抑菌活性植物乳杆菌细菌素生物稳定性研究

为了测定具有抑菌活性植物乳杆菌产细菌素的稳定性,利用乙酸乙酯萃取得到细菌素粗提液,采用牛津杯法测定植物乳杆菌细菌素在温度、pH、酶及紫外线4种不同因素的处理下对大肠杆菌的抑菌效果。结果表明:排除酸和过氧化氢的干扰后,植物乳杆菌细菌素仍具有抑菌性。植物乳杆菌细菌素在121℃高温处理30 min后仍存有81%的抑菌活性;在pH 3.0~8.0内均有良好的抑菌效果,在pH为8时仍保存69%的抑菌活性;在经由胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶及蛋白酶K的处理后,抑菌活性分别保留84%、98%、67%、91%、88%和98%;在经过紫外照射2 h后,该细菌素依然保留83%的抑菌效果。说明植物乳杆菌细菌素抑菌性较稳定,食品防腐剂可作为开发和利用。

西藏基层社会治理法治化的若干问题及对策

新时代党的治藏方略是做好西藏工作的根本遵循,必须长期坚持、全面落实。法治作为治国理政的基本方式,作为新时代党的治藏方略的重要原则,必将贯穿西藏工作的全过程。"治国必治边,治边先稳藏"的战略思想深刻的阐明了治国、治边、稳藏的内在关系,为西藏工作提供了根本遵循。西藏的稳定关系到整个国家的发展和稳定大局,西藏发展和稳定的重点和难点在基层,做好西藏社会基层工作事关西藏工作的全局。文章通过对基层一线工作的调查和访谈,发现西藏基层治理存在的问题,并有针对性的提出构建西藏基层社会治理法治化的对策。

荧光定量PCR法检测发酵果汁中嗜酸乳杆菌

发酵饮品中目标菌种的定量检测对其质量与安全有着重要的意义。为了将发酵果汁中的嗜酸乳杆菌准确定量,采用现阶段食品微生物检测中广泛运用的分子学方法——荧光定量PCR法进行测定。根据嗜酸乳杆菌基因保守区域的序列设计其特异性引物和探针,以基因组纯化试剂盒提取纯化目标菌株的DNA为模板,利用荧光定量PCR方法先对模拟样品实施检测并制作出标准曲线,得到的相关系数为0.992,线性关系良好,可依此进行未知样品检测。最终检测出未知样品即发酵果汁中嗜酸乳杆菌的含量为2.27×10^(8) CFU/mL,并与平板计数结果基本一致。由此表明,荧光定量PCR法可快速准确地对发酵果汁中嗜酸乳杆菌实现定量检测。

类芽孢杆菌CH2的筛选、酶活性及全基因组分析

红树林土壤微生物种类丰富,是筛选纤维素降解菌的可靠来源。为了有效利用农作物秸秆资源,本研究从红树林土壤中筛选出一株具有纤维素降解能力的类芽孢杆菌CH2,研究不同培养时间、NaCl浓度、pH值和温度下羧甲基纤维素酶(CMC)和滤纸分解酶(FPA)活性,测试其对水稻和玉米秸秆的降解能力,并对CH2进行基因组测序和分析。结果表明:随着培养时间、NaCl浓度、pH值和温度的提高,CMC和FPA活性均呈先上升后下降的趋势。培养时间72~84 h、NaCl浓度6.0 g·L^(-1)、pH 7及36℃条件下,CMC和FPA活性均最高。对水稻和玉米秸秆的降解试验显示,CH2可有效降解水稻和玉米秸秆,在0 g·L^(-1) NaCl(对照)条件下,10 d降解率分别为30.4%和47.0%,且在15 g·L^(-1) NaCl条件下,降解率与对照组无显著差异,表明菌株CH2具有良好的耐盐性。基因组测序显示,CH2基因组为6797325 bp,包含6312个编码基因。基因组注释结果显示,CH2含有多个纤维素和半纤维素降解酶基因,这些酶主要隶属于GH家族,包括内切-1,4-β-木聚糖酶、木聚糖1, 4-β-木糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶。该菌具有应用于农作物秸秆降解的潜力。

伙伴计划:构筑“爱之门”特色文化的基石

常熟湖甸之上,有一所小而精致的学校,北靠葱郁虞山,南临旖旎尚湖。她,就是五爱小学。五爱小学创立于民国二年(1913年),由美国基督教监理会女布道会捐款,指派明美丽、慧治灵两位美国女士办校,故取名为"明慧"。虽则几经战乱,几易校址,几改校名,但"明慧"二字却历久弥新。由"明慧"展开来,学校将"明知慧众"作为校训,将"爱之门"作为特色文化,寓意着学校的期许——期待孩子们自进入五爱之"门"起,能在持续的学习与更新中拥有通透的知识,抵达真正的智慧;也寓意着学校的祝愿——祝福孩子们能带着明媚的心态与聪慧的特质去打开"成长之门""人生之门",并将爱泽福于他人、泽福于社会。

基于计算药理学研究麻荟宣肺清毒方治疗新型冠状病毒肺炎的机制

目的通过网络药理学与分子对接手段探究麻荟宣肺清毒方的活性化合物及其治疗新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)的分子机制。方法用网络药理学与分子对接手段阐明麻荟宣肺清毒方的药效学基础和药理机制,包括COVID-19差异表达基因的获取、有效成分及其靶点的筛选、药物与疾病复杂网络的构建、关键子网络的分析等。结果利用生物信息学方法,从GEO数据集(GSE147507)中鉴定出2982个COVID-19肺组织差异表达基因。通过网络分析,共鉴定出麻荟宣肺清毒方中的159种成分和213个与COVID-19相关的靶点,在270个KEGG通路和324个GO条目上显著富集。分子对接分析结果表明,吴茱萸次碱、新隐丹参酮Ⅱ和槲皮素是与血管紧张素转换酶2(ACE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、趋化因子CC配体2(CCL2)和肿瘤坏死因子(TNF)相互作用的活性化合物,对与COVID-19相关的炎症和肺损伤具有治疗作用。结论麻荟宣肺清毒方的多种活性成分通过对COVID-19的多种生物通路作用于多个靶点。研究结果为阐明麻荟宣肺清毒方在COVID-19治疗中的作用机制提供了证据,也为进一步研究麻荟宣肺清毒方提供了指导。

深圳市罗湖区学校课桌椅分配现状

目的探讨深圳市罗湖区课桌椅分配现状,为制定标准课桌椅分配方案提出参考。方法运用横断面研究,以学校为单位,随机抽取深圳市罗湖区16所中小学校,调查学生课桌椅匹配合格率和学生就坐符合情况,分析存在的问题。结果 16所学校中,公办学校使用的是升降式课桌椅,课椅使用的型号为1～6号,课桌使用的型号为1～8号;民办学校升降式课桌椅使用的型号为1～5号或3～9号,固定式课桌为5号、3号、2号,固定式课椅为6号、5号、2号。2013年上半年抽查的16所中小学校中,课桌合格率为35.56%,课椅合格率为39.94%,罗湖区的学校课桌椅分配合格率均较低。结论罗湖区中小学校课桌椅分配存在问题,应采购并分配使用与身高匹配的课桌椅。