高速逆流色谱法分离纯化红曲色素组分

采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化红曲发酵产品中6种Azaphilone类色素组分。筛选弱极性分离溶剂系统正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,研究6种色素组分在不同溶剂体系中的分配系数,建立两步逆流萃取分离的技术路线。经过HPCCC分离纯化和丙酮结晶操作,得到6种高纯度的Azaphilone类色素组分,纯度均大于98.5%,得率达到81.40%～84.78%,所得的6种色素组分的摩尔吸光系数分别为13313、13877、9380、9360、25621、25849L/(mol·cm)。本研究可提供一种新型的制备高纯度红曲Azaphilone类色素组分的技术路线。

Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用

研究红曲代谢产物Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用。用MTT法评价Monascin对A375增殖的抑制作用;PI流式单染检测细胞周期分布;透射电镜观察细胞超微结构变化;以黑色素含量、酪氨酸酶活力和体外迁移能力为指标检验Monascin对A375诱导分化作用。Monascin对A375具有一定的增殖抑制作用,并能将其阻滞在G0/G1期;透射电镜观察到A375核质比变小且细胞器增多;黑色素含量增多,相对酪氨酸酶活力提高,体外迁移能力下降。试验结果表明,Monascin对A375具有较显著的诱导分化作用。

氨基酸改性熊果酸衍生物的合成及对胃癌细胞的抑制作用

目的合成具有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物并研究其对胃癌细胞的体外抑制活性及作用机制。方法以乙二胺为连接臂,采用多种氨基酸对熊果酸C28位进行接合修饰,合成一系列氨基酸改性熊果酸衍生物。MTT法考察对胃癌细胞株BGC-823、AGS的体外抑制活性,同时采用Annexin V/PI双标记染色及细胞周期检测探讨其抗癌机制。结果大部分衍生物对BGC-823、AGS的抑制活性强于熊果酸;Annexin V/PI双染色结果表明化合物3和4可诱导BGC-823发生凋亡;细胞周期检测表明衍生物3～6可诱导AGS发生凋亡,凋亡率达44.69%～92.64%。结论带有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物具有良好的抗癌活性,其作用机制为诱导细胞凋亡;开发具有伯氨基的衍生物是提高熊果酸抗癌活性的可行途径之一。

聚乙二醇缀合熊果酸衍生物的合成及体外抗癌活性

目的:合成具有一定水溶性的聚乙二醇(PEG)缀合熊果酸衍生物并考察其体外抗癌活性。方法:以熊果酸(ursolic acid,UA)作为母核,采用PEG、琥珀酸对其C28位进行接合修饰,合成一系列PEG缀合熊果酸衍生物并考察其水溶性和抗癌活性;采用流式细胞术探讨其抗癌机制。结果:所合成系列PEG缀合熊果酸衍生物的水溶性较熊果酸有明显改善,同时具有更显著的体外抗癌活性;化合物8c对5株受试肿瘤细胞的IC50(48 h)均小于10μmol.L-1,将AGS细胞阻滞于G2/M期并具有诱导凋亡作用(凋亡率高于70%)。结论:将熊果酸C28位进行PEG修饰是保持和提高其抗癌活性的有效途径之一。

熊果酸衍生物的合成及对前列腺癌PC-3细胞的抑制活性

目的:合成具有不同电负性基团的熊果酸衍生物并研究其抗癌活性。方法:合成一系列携带正电性基团或负电性基团的熊果酸衍生物,并用软件预测衍生物油水分配系数及水溶性的改善情况;采用MTT法考察熊果酸衍生物对人前列腺癌PC-3细胞的抑制活性;采用细胞周期分析及AnnexinV/PI双标记法探讨其抗癌机制。结果:熊果酸衍生物的水溶性较熊果酸有明显改善;荷负电基团的熊果酸衍生物抑癌活性远低于熊果酸,而负载正电性基团显著提高了熊果酸的体外抗癌活性,其作用机制为诱导细胞发生凋亡及细胞周期阻滞;其中熊果酸衍生物UA-3,UA-4,UA-5b的水溶性提高70倍以上,对PC-3细胞的IC50(48 h)均<10μmol.L-1,将细胞阻滞于G0/G1期并具有诱导凋亡作用(凋亡率均>50%)。结论:采用正电性基团修饰熊果酸是提高抗癌效果并改善其水溶性的有效途径之一。

酿酒酵母中D-(-)-扁桃酸脱氢酶性质研究

采用DEAE Sepharose离子交换层析、Butyl Sepharose疏水层析和Blue Sepharose亲和层析等分离方法,从高产D-（-）-扁桃酸的酵母菌株BY1.1b中纯化得到电泳纯的D-（-）-扁桃酸脱氢酶.采用Sephacryl S-200分子筛层析柱测得该酶的相对分子质量约60 kDa,用SDS-PAGE电泳测得该酶亚基分子量为32 kDa,表明该酶属于同型二聚体.该酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.0.该酶在低于30℃,pH5.5~8.0较为稳定.以NADH和苯乙酮酸为底物,其Km值分别为Km（NADH）=99.2μmol/L和Km（苯乙酮酸）=263.3μmol/L.