抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定

目的研制鼠抗人凋亡相关蛋白 TFAR19的单克隆抗体，以进一步探讨 TFAR19蛋白的结构与功能。方法以纯化的重组人 TFAR19蛋白为抗原 ,免疫 BALB/c小鼠，将 TFAR19蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0进行细胞融合，经克隆筛选获得鼠抗人 TFAR19蛋白单抗的杂交瘤细胞株，以间接 ELISA、 Western免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果获得了 3株稳定分泌抗人 TFAR19单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (C1,C10,2C12),其分泌的单抗效价高，特异性好，亲和力不一，免疫球蛋白亚类均为 IgG1。 Western免疫印迹分析证明 TFAR19蛋白在凋亡细胞中高表达。结论所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的 TFAR19蛋白，为进一步探讨 TFAR19蛋白的生物学效应提供了条件。

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的 :探讨凋亡相关分子TFAR19在TF 1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法 :以TFAR19的单克隆抗体为工具 ,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段 ,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位 ,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine,PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果 :TFAR19蛋白在撤除GM CSF的TF 1细胞中表达水平显著增高 ,伴有明显的核转位现象 ,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论 :TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一 ,这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应 。

大黄素对HL-60/ADR耐药细胞多药耐药逆转作用的研究

本研究旨在探讨大黄素(emodin)对人急性白血病HL-60/ADR耐药细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)逆转作用及其相应的作用机制。采用MTT法检测HL-60/ADR细胞对大黄素以及8种临床常用化疗药物的耐药性,比较大黄素联合化疗药物后对HL-60/ADR细胞耐药逆转效果,应用DNA倍体和DNA Ladder分析检测大黄素与阿霉素联合用药后细胞凋亡改变,RT-PCR和Western blot分别检测耐药相关基因和蛋白表达变化,流式细胞术检测大黄素处理后HL-60/ADR细胞内阿霉素荧光阳性率和柔红霉素平均荧光强度(MFI),激光共聚焦显微镜检测细胞内柔红霉素分布变化。结果表明:大黄素对HL-60/ADR耐药株和相应HL-60细胞敏感株的IC50值接近,分别为24.09±1.72μmol/L和23.18±0.87μmol/L,对阿霉素(ADR)、柔红霉素(DNR)、依托泊苷(VP16)、长春新碱(VCR)、阿糖胞苷(Ara-C)、高三尖杉酯碱(HHT)、米托蒽醌(MTZ)和吡柔比星(THP)呈现不同程度耐药。小剂量大黄素对8种药物耐药逆转倍数介于1.58-4.12之间,其中对ADR的耐药细胞逆转效果最好。大黄素与ADR联合用药组可见明显的亚二倍体凋亡峰和典型的DNA降解梯状带形成。与单药组比较,联合用药组MRP1、TOPOⅡβ、GSTπ、BCL-2耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平下调明显,细胞内ADR和DNR蓄积水平增加,胞浆和胞核DNR分布增加,该作用与大黄素呈浓度依赖性。结论 :大黄素具有逆转HL-60/ADR细胞多药耐药作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因表达水平、增加细胞内化疗药物蓄积和促进细胞凋亡作用有关。

大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用

本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR及Western blot法检测大黄素作用后不同时间段bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平的变化。结果表明,大黄素对HL-60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。较低浓度大黄素即可抑制HL-60/ADR细胞集落形成,IC50值为5.79μmol/L。细胞周期分析显示,与对照组比较,40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高(p<0.01),G2/M期细胞比率降低(p<0.01),而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性(p>0.05),各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。大黄素作用12小时HL-60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低,Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,作用24小时caspase-3酶活性显著升高,作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL-60/ADR细胞不同时间段,bcl-2、c-myc mRNA和Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,并呈时间依赖性。结论:大黄素能够有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,并诱导其凋亡,bcl-2、c-myc表达水平下调,线粒体跨膜电位水平降低和caspase-3激活可能参与了该过程。

志苓胶囊对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖抑制和诱导凋亡的影响

目的研究志苓胶囊(ZLJN)对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖影响及诱导凋亡作用。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成分配制成不同浓度的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,采用MTT比色法、集落形成试验,分别检测细胞存活率和集落形成率。通过流式细胞仪进行DNA倍体分析、Bcl-2蛋白表达、线粒体跨膜电位及Caspase-3活性检测;DNA片段化分析法、Annexin V-FITC标记法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果不同浓度的药物组与NCI-H446共培养后,细胞生长明显受抑制,细胞集落形成率明显降低,呈浓度依赖性;各药物组处理后的细胞线粒体跨膜电位和Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3活性增强;琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯形带;各药物组均检测到明显的亚二倍体G1峰(凋亡峰);Annexin V-FITC法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到晚期凋亡细胞。复方组诱导细胞凋亡作用强于中药组和西药组。结论志苓胶囊可以有效抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,细胞线粒体跨膜电位水平降低,Caspase-3活性增强和Bcl-2表达下调可能参与了该过程。

青海省互助北山国家地质公园地质遗迹及其综合评价

重要的地质遗迹是国家的宝贵财富,是生态环境的重要组成部分。青海省互助北山国家地质公园位于青藏高原和黄土高原的过渡带,地质遗迹丰富多样,保存完好,对我国西部环境演变研究具有很高的科研价值。本文分析了北山地质公园内的地质遗迹类型及分布,并对其进行了详细的综合评价。

志苓胶囊对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞凋亡及h-TERT、CD44表达的影响

目的研究志苓胶囊(抗癌复方Ⅱ号)对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446诱导凋亡作用机制以及对细胞黏附分子表达的影响。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成份配制成相应的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,倒置显微镜观察、Hochest33258荧光染色法检测凋亡细胞,RT-PCR、Western blot、流式细胞仪分别检测bcl-2、bax、hTERT基因mRNA和相应蛋白表达水平变化以及黏附分子CD44的表达变化。结果NCI-H446经不同的药物组处理后,倒置显微镜、Hochest33258荧光染色可观察到细胞凋亡形态学改变,bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平均有不同程度下降,bax基因表达水平则有不同程度增强,复方组改变最明显,各药物组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。中药组和西药组hTERT基因和蛋白表达水平未见明显改变,复方组表达水平下调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。各药物组CD44表达水平降低,其中复方组降低水平最明显(P<0.01)。结论志苓胶囊可能通过下调NCI-H446细胞bcl-2、hTERT基因和CD44分子表达,增强bax基因表达,从而诱导NCI-H446细胞凋亡,抑制细胞黏附、转移。

PHA对人扁桃体T细胞CD4和CD8抗原复合表达的研究

本文利用双色荧光试剂、流式细胞术证明了新鲜分离的儿童扁桃体T细胞中含有少量的CD4^+CD8^+细胞。CD4^+CD8^+的复合表达似乎与T细胞活化有关,其主要表达在大的淋巴母细胞上。用PHA刺激T细胞5天后,产生的CD4^+CD8^+细胞数可达38.33％;与此同时,细胞上CD8抗原的密度明显增高。另外,PHA活化的CD4^+CD8^+细胞能高水平表达CD25、CD38及HLA-DR抗原,但缺乏CD1抗原的表达。我们的实验结果提示:人扁桃体T细胞活化产生的CD4^+CD8^+细胞亚群不同于CD4^+CD8^+的所谓双阳性胸腺细胞,由于CD4和CD8分子直接与MHC抗原相互作用,这些分子的复合表达可能在免疫调节中起重要作用。

云南元谋龙街粉砂层的粒度特征与成因

对云南元谋龙街粉砂层保存较好的龙街剖面进行了年代地层学和沉积学研究。该剖面厚40.6m,距顶部10.9m处14C年龄为26305±1152aBP,指示龙街粉砂层的地质时代为晚更新世。粒度分析结果显示,龙街粉砂层主要由粉砂组成,中值粒径的平均值为15.28μm,频率曲线呈现明显的双峰特征,几乎没有粗尾。与内蒙古岱海湖相沉积、甘肃西峰黄土、安徽宣城河流沉积的粒度分布及粒度参数特征对比,龙街粉砂层与岱海湖泊沉积的粒度特征基本一致,而与西峰黄土及宣城河流相沉积明显不同,表明龙街粉砂层是水动力较弱的湖泊沉积物。

青海共和盆地达连海湖泊流域表土花粉-气候响应面分析

孢粉分析是研究过去全球变化的一种重要方法,而研究花粉与现代气候之间的相互关系是古气候定量重建研究中的前沿课题。要预测未来气候的中长期变化,必须从花粉记录中定量提取古气候信息,建立的多种孢粉-气候数学模型必须经过不同边界条件下的古气候数据检验校正才能应用到实际当中。花粉-气候响应面方法是考虑了花粉与气候间的非线形关系上,提出的将现代花粉丰度在地理空间的分布转换为气候空间的分布,并以提供定量的古气候数据,已被广泛应用于COHMAP等各种重要古气候研究项目。本文就是利用该方法,以青藏高原东北部共和盆地达连海湖泊流域54个表土样品中的花粉丰度及采样点的气候参数为基础数据,通过主成分分析选择了特征值高且指示意义明显的4种花粉类型,对其丰度与7月平均温度及年平均降水量两个气候参数进行多项式回归分析,其结果显示模型对数据拟合较好,为定量重建该区古气候变化提出了较为准确的数量指标。

青海大学资源勘查工程专业本科生毕业论文质量的反思

本文分析了青海大学资源勘查工程专业本科毕业论文工作中存在的主要问题及影响本科毕业论文质量的原因。笔者根据自身指导本科毕业论文的体会,提出了转变观念、合理选择题目、增强指导教师实践能力和加强过程管理、建立淘汰制度等措施。

振动扣击机治疗小儿支气管肺炎疗效观察

目的:探索振动扣击机治疗小儿支气管肺炎疗效。方法:将住院小儿支气管炎80例,随机分为治疗组和对照组。治疗组用常规消炎、雾化吸入治疗外,用振动扣击机治疗。结果:治疗组治愈率达95%,总有效率为100%,而对照组治愈率为63%,总有效率为85%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:振动扣击机治疗小儿支气管炎确实舒适、安全,可以缩短病程。

黄河源区荒漠化现状及其驱动力研究

黄河源区是青藏高原荒漠化严重的地区之一,为了遏制黄河源区荒漠化的进一步发展,从地质学的角度分析了荒漠化产生的驱动力机制。结果认为该区荒漠化有异于其他地区,是现代地质作用增强导致了下垫面的改变,气候变化引起多层面的荒漠化,人为及鼠类的活动起着推波助澜的作用;其过程首先是以缓慢的自然荒漠化过程为基础,自然与人为因素共同作用所形成的。

对青海盐湖资源优势转为经济优势的思考

分析了青海盐湖资源的概况、特点及开发利用状况 ,并就开发利用过程中的问题。

生物入侵对生态环境的影响及对策

文中综述了生物入侵的概念、途径、过程及中国生物入侵的现状、特点和危害,并提出了相应的对策。

健康教育对癫痫疗效的影响

目的:探讨癫痫患儿的健康教育方法,为有效避免和减少癫痫发作提供依据。方法:将70例癫痫患儿分为观察组35例和对照组35例,对照组采用常规癫痫护理,观察组给予系统性癫痫知识健康教育。结果:观察组总有效率97%,显著高于对照组,对照组有效率70.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:开展健康教育有助于提高癫痫患儿的疗效,提高其生活质量。

特布他林和布地奈德联合雾化吸入治疗毛细支气管炎疗效观察

目的:探讨布地奈德联合特布他林雾化吸入治疗在小儿毛细支气管炎急性发作中的临床效果及安全性。方法:将80例确诊为毛细支气管炎的患儿随机分为观察组和对照组各40例,两组均给予常规治疗,观察组加用布地奈德、特布他林雾化吸入治疗。结果:观察组在咳嗽、喘憋、哮鸣音、湿啰音的消失时间和临床控制率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗期间观察组未见明显不良反应。结论:布地奈德联合特布他林雾化吸入治疗毛细支气管炎疗效确切、安全,是一种值得推广应用的临床治疗方法。

环境磁学在第四纪气候与环境研究中的应用

阐述了新兴的交叉学科环境磁学的原理及矿物学参数,论述了环境磁学在第四纪气候与环境中的应用,也指出了环境磁学存在的问题与发展的趋势。

24h动态脑电图对小儿神经系统疾病的鉴别诊断价值

目的:探讨动态脑电图对小儿神经系统疾病的诊断价值。方法:采用美国PI公司型号PI400A-B脑电监测系统,对临床诊断癫痫40例及非癫痫性发作40例进行24h动态脑电图检查。结果:临床诊断癫痫中32例,痫性放电检出率高达80%,40例非癫痫性发作,在发作中及间期均未捕捉到典型的痫性放电。结论:24h动态脑电图对痫性放电检出率高,方便实用。

bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病原代白血病细胞抑制作用的体外实验研究

目的 :研究两种类型 (b2a2和b3a2 )bcr-abl反义寡核苷酸 (Aspo)对慢性粒细胞白血病 (CML)原代白血病细胞作用效果。方法 :合成硫代磷酸反义寡核苷酸 (Aspo) ,CML细胞经bcr-ablAspo作用后 ,台盼蓝拒染法计算活细胞数 ;甲基纤维素半固体培养法培养造血祖细胞集落 ;流式细胞仪检测细胞P2 10蛋白表达率 ;半定量RT -PCR检测细胞bcr-ablmRNA表达情况。结果 :16例CML患者经两种类型bcr -ablAspo作用后 ,活细胞数及造血祖细胞集落数均有不同程度减少 ,其中慢性期与急变期比较无显著差别 (P >0 0 5 ) ,且两种类型之间存在交叉抑制作用。正常人外周血或骨髓分离的单个核细胞经bcr -ablAspo处理后 ,CFU -GM形成无明显变化。 16例CML原代白血病细胞经bcr-ablAspo作用后 9例P2 10转阴 ,7例残存克隆细胞bcr-ablmRNA完全受抑制 ,未完全受抑制者其表达率均不同程度低于空白组 ,正义Spo作用组未见明显改变。结论 :bcr -abl反义寡核苷酸具有一定抗慢性粒细胞白血病效果 ,对正常细胞CFU -GM无影响 ,提示它有可能成为CML自体骨髓移植或外周血干细胞移植体外净化的一种有效方法。