不同胚胎发育速度对冻融单囊胚移植妊娠结局的影响

目的研究冻融单囊胚移植周期中,胚胎发育速度对囊胚移植妊娠结局的影响。方法回顾性分析2017年1月至2022年5月在厦门大学附属妇女儿童医院生殖医学科首次进行冻融单囊胚移植患者的临床资料,共纳入1744个周期。根据囊胚形成时间分为3组:D5上午组(n=1482),D5下午组(n=174)和D6组(n=88);又按照女方年龄进行分组:≤35岁组(n=1557),>35~<40岁组(n=149)和≥40岁组(n=38)。分析不同年龄组中不同囊胚形成时间亚组的基础资料及妊娠结局,并结合囊胚形态学评分,分析不同囊胚形成时间各组中不同囊胚评级亚组的基础资料和妊娠结局;采用多因素Logistic回归分析临床妊娠的影响因素。结果≤35岁组中,D5上午组的HCG阳性率(78.33%vs.63.19%vs.60.00%)、临床妊娠率(59.34%vs.44.44%vs.42.86%)及活产率(50.27%vs.38.02%vs.25.81%)均显著高于D5下午组或D6组(P均<0.0167)。>35~<40岁组中,D5上午组的HCG阳性率(75.45%vs.38.46%vs.38.46%)、活产率(45.54%vs.9.52%vs.8.33%)显著高于D5下午组或D6组(P均<0.0167);D5上午组的流产率显著低于D6组(12.07%vs.75.00%,P<0.0167)。≥40岁组中不同发育速度囊胚移植的妊娠结局均无显著性差异(P均>0.05)。按照囊胚评级进行分层分析,结果显示D5上午组不同级别囊胚的临床妊娠率(62.12%vs.58.68%vs.50.58%)间存在显著性差异(P<0.05),D5下午组不同级别囊胚临床妊娠率(62.50%vs.53.03%vs.33.00%)间亦存在显著性差异(P<0.05);且临床妊娠率随着囊胚评级降低出现下降的趋势。结论囊胚发育速度可能是评估囊胚质量的重要指标,发育速度越快的囊胚其发育为优质囊胚的可能性越大。囊胚评级相同时,发育速度较快的胚胎具有更高的发育潜能,可以获得更好的妊娠结局。随着女方年龄的增长,囊胚发育速度对妊娠结局的影响越来越小,但仍需进一步扩大样本量进行更加深入的研究。

阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠肺移植术后闭塞性细支气管炎的影响

目的本研究使用抗CD40L抗体(克隆号:MR1)阻断CD40-CD40L信号通路,利用小鼠原位左肺移植模型,对比其与传统免疫抑制剂环孢素/甲泼尼龙对小鼠术后移植物闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis,OB)的治疗效果,并进一步评估其对移植物术后损伤的影响及相应机制,为临床肺移植术后治疗方法提供新思路。方法构建小鼠原位左肺移植模型,以野生型Balb/c小鼠作为供体小鼠,野生型C57BL/6小鼠作为受体小鼠。移植术后10 d,牺牲小鼠,采用苏木精/伊红(hematoxylineosin,HE)染色、Masson染色以及中性粒细胞特异性染色(抗髓过氧化物酶),观察各组移植左肺的组织病理学改变,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测移植物中白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)mRNA的表达水平的变化。结果术后10 d,注射了环孢素/甲泼尼龙和抗CD40L抗体治疗的小鼠,移植左肺外观体积增大;病理结果显示抗CD40L抗体治疗组较环孢素/甲泼尼龙治疗组炎性细胞浸润和OB现象得到有效缓解(P<0.05),中性粒细胞浸润显著减少(P<0.01);抗CD40L抗体治疗组移植物中IL-17A mRNA表达水平,较环孢素/甲泼尼龙治疗组显著降低(P<0.01)。结论利用抗CD40L抗体阻断CD40-CD40L信号通路能够有效保护移植物细支气管上皮,缓解小鼠肺移植术后急性排斥和OB反应以及小气道损伤,且效果优于传统抑制剂环孢素/甲泼尼龙。

阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠原位气管移植术后早期气道上皮细胞的影响

目的本研究利用小鼠原位气管移植模型,应用anti m CD40L阻断CD40-CD40L信号通路,探讨其对气管移植模型中IL-17A介导的免疫反应的机制及其调控对移植物的影响,进一步解析其对移植物损伤和疾病预后的影响,为临床寻求新的预防和治疗方法。方法建立小鼠原位气管移植的模型,选取野生型Balb/c小鼠作为供体,野生型C57BL/6小鼠作为供体或受体。移植术后第3天,利用实时荧光定量PCR技术检测各组移植气管中IL-17A m RNA表达水平、ELISA检测血清中IL-17的含量;移植术后第15天,采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色,观察各组移植气管组织的病理学改变。结果注射anti m CD40L(MR-1)抗体后,术后3 d移植物中IL-17A m RNA相对于同种异型非特异性免疫球蛋白抗体组有所下降(P<0.05);各组血清中IL-17的含量变化不明显(P>0.05)。术后15 d病理结果显示注射anti m CD40L后可以有效改善气管上皮细胞的损伤。结论阻断CD40-CD40L信号通路能够缓解原位气管移植术后IL-17A对气管上皮细胞的损伤。

抗CD3单抗诱导CD4+FoxP3+调节性T细胞分化并缓解小鼠肺移植急性排斥

目的建立小鼠原位左肺移植模型,探究抗CD3单抗缓解肺移植急性排斥损伤的作用机制,为其在临床肺移植的应用提供理论依据。方法选取SPF级野生型BALB/c和C57BL/6小鼠,构建原位左肺移植模型,设置同种同型对照组(C57BL/6→C57BL/6,6只)、同种异型对照组(BALB/c→C57BL/6,6只),同种异型单抗处理组(BALB/c→C57BL/6,4只)。术后第2~6天及第9天每日腹腔注射50g抗CD3单抗。采用苏木精-伊红、马松染色以及CD3/髓过氧化物酶(MPO)免疫组化染色,观察各组移植肺T淋巴细胞和中性粒细胞浸润分布情况,进行急性排斥病理评分;实时荧光定量RT-PCR检测移植肺组织转录因子FoxP3和细胞因子IL-17A、IFN-γ的mRNA表达水平;流式细胞术检测受体小鼠脾脏中FoxP3+调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞的比例。结果移植术后10天,同种同型组移植肺外观呈淡红色,柔软有弹性,病理学检测未见明显的炎症细胞浸润和组织损伤;同种异型对照组移植肺外观呈绛紫色,硬度增加;同种异型单抗处理组外观淡红柔软,与同种异型对照组比较,淋巴细胞、中性粒细胞浸润显著减少,急性排斥损伤病理评分降低。实时荧光定量RT-PCR结果显示,与同种同型组相比,同种异型组移植肺中IL-17A和IFN-γmRNA的表达水平升高;抗CD3单抗可降低移植肺中IL-17A与IFN-γmRNA表达水平,升高FoxP3mRNA表达水平。流式细胞术结果显示,与同种同型、同种异型对照组相比,单抗处理组小鼠脾脏中Treg占CD4+T细胞的比例显著升高。结论抗CD3单抗可诱导CD4+FoxP3+Treg的分化并缓解肺移植急性排斥损伤。