辩论式教学在《食品安全学》课程中的应用

近年来,食品安全问题受到全世界的共同关注,它关系到人民健康、社会稳定、国家声誉等方方面面。《食品安全学》是高等院校食品质量与安全专业的主干课程,由于其学科交叉性强、内容多、知识点分散等特点,因此存在授课难度大、教学质量难以达到预期效果等问题。作为一门新兴课程,其建设和发展必然要经历循序渐进的过程。辩论式教学是以学生为主体,由小组或全班成员围绕特定的论题辩驳问难,各抒己见,在辩论中主动获取知识、提高素养的一种教学方式。本文结合《食品安全学》课程的特色内容,探讨如何将辩论式教学引入《食品安全学》课程中,以期达到更好的教学效果,从而促进综合型专业人才的培养。

《食品酶学》教学方法的探讨和应用

随着食品工业的不断发展,酶制剂在食品生产中的应用越来越广.《食品酶学》作为高等院校食品类专业的必修基础课,其课程建设的重要性也随之上升.由于《食品酶学》的学科领域偏重于生产实践的应用,但目前的教学仍然依赖传统注入式讲授法和理论知识练习法简单结合的方法,教学模式单一,致使学生缺乏分析和解决实际问题的能力.因此,在《食品酶学》教学方面的当务之急是引入符合本课程特点的教学新方法.文章着重比较分析了几种现代教学法,并结合实践案例进行分析讨论,以期为《食品酶学》的教学提供方法借鉴和引导,并通过综合应用这些方法使其达到最优教学效果.

核酸适配体及其在化学领域的相关应用

核酸适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列,能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合,它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台,并在许多方面展示了良好的应用前景。本文从核酸适配体的性质和体外筛选过程等方面出发,着重综述了核酸适配体的化学修饰方法及其在分析化学和酶化学中应用的研究进展。

鼠脑组织中6-羟基-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉及其相关生物胺的高效液相色谱-电化学检测

建立了大鼠脑组织中6-羟基-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉（6-OH-MTHβC）、5-羟色胺（5-HT）和5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）含量的高效液相色谱-库仑阵列电化学检测（HPLC-ECD）方法。采用的色谱柱为Discovery（HS F5柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为缓冲液（40mmol/L柠檬酸＋20mmol/L磷酸氢二钠＋0.3mmol/L乙二胺四乙酸二钠,pH4.0）-甲醇（体积比为78∶22）混合液,流速为1mL/min。6-OH-MTHβC、5-HT、5-HIAA在1.0~500.0μg/L范围内线性关系良好（r〉0.999 2）,检出限分别为0.56,0.26,0.53μg/L,日内和日间精密度（以相对标准偏差表示）均低于6.1%,回收率分别为87.1%~98.2%,87.0%~95.3%,90.1%~97.7%。用该方法检测新生7d的SD胎鼠脑内6-OH-MTHβC及5-HT、5-HIAA的含量,发现SD胎鼠在急性酒精中毒8h后6-OH-MTHβC显著上升（P〈0.05）;而5-HT和5-HIAA的含量有所下降,但无显著性差异。该法简便、稳定、灵敏度高,适用于测定鼠脑组织中6-OH-MTHβC和5-HT,5-HIAA含量的相关研究。

单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤的方法及进展

单细胞凝胶电泳技术是一种常见的检测DNA损伤的技术,它具有灵敏度高、经济、简便、快速等优点。近30年来,这种技术被广泛地应用于遗传毒理、环境监测、医学诊断、营养研究上。单细胞凝胶电泳技术不单单能检测DNA断裂损伤,在加入断裂剂或者特异性内切酶后,可以检测到DNA交联和紫外线诱导的嘧啶二聚体,氧化碱基和烷基化损伤。近些年单细胞凝胶电泳与荧光原位杂交技术相结合后更是拓宽了它的应用范围,对常规和非常规的单细胞凝胶电泳技术及其操作方法进行了归纳总结,并讨论了它的发展前景。

尼莫司汀和卡莫司汀导致细胞中DNA股间交联的高效液相色谱-电喷雾质谱联用研究

氯乙基亚硝基脲（CENUs）是临床常用的烷化剂类抗癌药物,主要通过导致DNA股间横向交联（dG-dC交联）发挥其抗癌作用。为建立高灵敏度的细胞中交联物的检测方法,评价不同种类CENUs的抗癌活性及耐药性,本研究使用尼莫司汀（ACNU）和卡莫司汀（BCNU）对具有不同O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）活性的NIH/3T3和L1210两种细胞进行药物处理,利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）联用技术对经不同浓度药物处理后细胞中的dG-dC交联进行定量分析。该方法的检测限（S/N=5）和定量限（S/N=17）分别达到2fmol和8fmol,回收率为92.5%~107.4%,灵敏度和准确性均满足定量分析的要求。结果表明：ACNU导致的dG-dC交联率高于BCNU;经相同浓度的同种药物作用后,L1210细胞中交联率显著高于NIH/3T3细胞。这可为新型CENU类烷化剂的抗癌活性评价提供可靠的实验方法。

断裂剂加入顺序对DNA交联检测的影响

[目的]探讨单细胞凝胶电泳技术在检测DNA交联时断裂剂加入顺序及剂量对检测结果的影响。[方法]采用抗肿瘤药物卡莫司汀(BCNU)作为DNA交联剂,对DNA断裂剂过氧化叔丁醇(tBHP)的加入顺序和最佳使用剂量进行分析。将DNA拖尾长度作为检测指标,并采用t检验分析。[结果]BCNU染毒前加入tBHP组与BCNU染毒后加入tBHP组相比,统计学上均无显著差异。此外,随着tB-HP浓度的增加,DNA断裂程度随之增加,且在400μmol/L时断裂效果非常显著。[结论]断裂剂tBHP的加入顺序不会对DNA交联检测的试验结果产生影响;tBHP在浓度为400μmol/L时断裂效果非常显著。

体外细胞转化的应用及其影响因素

细胞转化是指细胞在体外受到一种或多种致癌因子的诱导,从而在形态、行为、生长控制或功能上获得某种肿瘤所具有的恶变特性的过程。体外细胞转化实验是利用体外培养的动物细胞模拟致癌物的体内致瘤作用,从而进行致癌物检测的一种技术。与动物实验相比,它既充分反应了细胞与致癌物之间的相互作用,又缩短了实验周期,减少了实验动物的使用,因此被国际癌症研究署(IARC)评价为筛选致癌物的一种有效方法。本文简要描述了细胞转化实验的目的、靶细胞的选择、影响转化的因素及检测方法等方面,可为今后细胞转化实验的实施提供一定的借鉴。

基于转录组测序技术揭示salsolinol的神经毒性作用

Salsolinol(1-甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉,Sal)是一种儿茶酚异喹啉类化合物,由多巴胺和醛类物质催化生成,其在神经系统中的毒性作用机制仍不清楚。本文主要探究Sal对细胞转录组的影响揭示其神经毒性的调控机制。方法选用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞进行Sal诱导,采用转录组测序分析(RNA-Seq)建立全转录组图谱,对差异基因进行GO分析和KEGG分析,最后采用Western-blot进行验证。结果 RNA-Seq分析Sal处理组和对照组的mRNA丰度差异,共鉴定出2405个显著性差异的表达基因(倍数变化≥2.0),包括740个上调基因,1665个下调基因。信号通路研究显示,这些基因与氧化应激、氧化磷酸化、自噬和溶酶体调节、PI3K-Akt信号通路、AMPK信号通路等密切相关,并发现Sal可以使Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平增加。结论 Sal激活Akt-mTOR信号通路来调控细胞内的自噬水平,从而引发神经毒性作用。

Salsolinol合成酶的高效液相色谱-电化学活性检测方法研究

Salsolinol合成酶是一种催化多巴胺(DA)和乙醛(AcH)生成Salsolinol的酶,它在内源性儿茶酚异喹啉类物质代谢过程中起重要作用。研究显示该类物质具有一定的神经毒性,与帕金森病(PD)发病机制密切相关,因此Salsolinol合成酶可能是PD的一种关键致病因子。本文从雄性SD大鼠鼠脑中分离得到Salsolinol合成酶的粗酶液,采用高效液相色谱结合电化学检测器体系(HPLC-ECD)建立了一套灵敏度高、重复性较好的酶活检测方法,并进行了方法稳定性和灵敏度的验证,方法简便、稳定,适用于不同生物样品中该酶活性的测定;同时也将该方法应用于超滤分离后不同截留分子量样品的活性测定,结果显示该酶的活性主要集中在3K下层滤液。

Pictet-Spengler酶及其相关生物学特性

Pictet-Spengler(P-S)反应在合成异喹啉和β-咔啉衍生物的过程中起着重要作用,它作为多种生物碱合成过程中最基础的一步反应,近年来受到人们广泛的关注。在新形成的杂环体系中,P-S反应催化醛基碳原子形成为新的手性中心。简单P-S反应得到的是外消旋混合物,但具有重要生物活性的物质通常具有立体专一性,因此寻找能催化不对称P-S反应的催化剂已成为该领域的研究热点。"Pictet-Spenglerases"是指催化P-S反应的酶的总称,它能催化产生高立体化学纯度的产物。由酶催化的P-S反应在自然界中很少,至今只有少数几种酶得到纯化和鉴定。基于此,本文从P-S反应出发,综述了近年来分离鉴定得到的Pictet-Spengler酶及其相关的生物学特性,以期为将来该类新酶的发现及系统研究提供借鉴。

DNA股间交联及与细胞癌变关系的研究进展

癌症是目前全球共同面临的重大公共卫生问题。流行病学研究显示,大约80%～90%的人类癌症是由环境因素诱导产生的,其中又以化学因素占主导地位。化学致癌机理的双区理论认为,环境致癌物经体内代谢生成特定的双官能团烷化剂,从而诱导DNA双链互补碱基对之间的交联并最终引发癌症。目前针对DNA股间交联的检测方法已有不少研究,然而DNA股间交联如何引起细胞癌变的机理仍悬而未决,这也成为人们关注的焦点。本文旨在通过综述近年来对DNA股间交联的研究,从其结构、体内形成过程和检测方法等方面,探讨DNA股间交联与细胞癌变的关系,为环境致癌机理的研究提供思路。

酒精处理后鼠脑内单胺氧化酶活性及单胺神经递质代谢变化的测定

应用高效液相色谱法测定了慢性酒精处理后胎鼠脑中单胺氧化酶(MAO)的活性,以及多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)和它们的代谢产物的含量。在怀孕的最后一周内对SD母鼠灌胃酒精,对照组用生理盐水处理,分娩后取胎鼠脑组织进行检测。胎鼠脑线粒体MAO的活性随酒精染毒剂量的增加而递减,呈现出剂量反应关系;与盐水对照组相比,酒精暴露可改变胎鼠全脑中DA和5-HT的水平,但统计结果无显著性差异。其中,HVA和5-HIAA的含量在4.0g/kg酒精处理后显著减少(P<0.05)。慢性酒精暴露后MAO活性的下降及DA、5-HT的代谢变化可能在中枢神经系统的发育障碍中发挥了重要作用。

Salsolinol合成酶的克隆和表达

Salsolinol合成酶是一种催化多巴胺和乙醛生成Salsolinol的酶,与帕金森病发病机制密切相关。研究发现Salsolinol合成酶与泛素的氨基酸序列高度相似,只有4个氨基酸位点有差异。本研究以泛素基因为模板,采用聚合酶链式反应技术对4个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到载体p ET30a-GST上,构建p ET30a-GST-Sal synthase重组载体,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白,经亲和层析柱纯化。结果表明,实现目的位点的定点突变,获得Sal合成酶基因,成功构建了GST-Sal synthase原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高纯度的GST-Sal synthase融合蛋白。

1-甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉的神经生物学功能研究进展

1-甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(Sal)是一种儿茶酚异喹啉类物质,主要存在于哺乳动物脑内并执行多种生理功能。通过机体代谢,Sal可转变成为内源性神经毒素参与帕金森病(PD)的发生,由此引发学者的广泛关注。近年的研究显示,Sal还参与酒精成瘾的形成以及影响神经内分泌系统相关激素的释放,是潜在的多巴胺能神经元调节因子。本文从以上几方面展开探讨Sal的神经生物学功能,为深入研究其具体作用机制提供理论支持。

900MHz手机射频辐射对体外细胞DNA损伤及EB病毒早期抗原的激活作用

[目的]研究900MHz、最大功率密度为10．644laW／cm2的手机射频辐射对体外细胞DNA损伤和病毒癌基因EB病毒早期抗原（EBV．EA）的激活作用。[方法]（1）将NIH／3T3细胞分别暴露在手机辐射下0、1、2、4、6、8、12h，并分别设定相应的正常对照组，用彗星电泳检测细胞DNA受损程度。（2）将Raji细胞分为A辐照（-）TPA（-）、B辐照（-）TPA（＋）、C辐照（＋）TPA（-）、D辐照（＋）TPA（＋）4组，接受手机辐照，强度为4h／d，实验持续4周；每周结束时，B和D两组细胞分别使用促癌剂12-0-十四烷酰佛波醇．13＋乙酸酯（TPA）1ng／mL处理48h。用免疫细胞化学检测各组细胞中EBV—EA的阳性表达情况。[结果]当NIH／3T3细胞辐照2h后，与对照组相比细胞Olive尾距有明显差异（P〈0．05），但在随后的2-12h内的各个检测时间点上，Olive尾距并没有随着时间的增加而增加（P〉0．05）；Raji细胞在实验4周后，辐照C、D组细胞的EBV—EA阳性表达率较A组明显增加（P〈0．05），并且在加入促癌剂TPA的D组，阳性表达率更加明显（P〈0．01）。[结论]900MHz手机射频辐射会对细胞DNA产生-定的损伤，并且能够激活EBV．EA的表达。