缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达

背景:国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究,但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。目的:观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。方法:取48 hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验,模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境,通过向水中通入99.999%高纯氮气制造缺氧环境,分别经过6,12,24 h的缺氧处理后,在正常氧体积分数下进行6 h恢复。对照组为正常通气组(溶解氧浓度在7.0 mg/L左右)。采用吖啶橙染色方法,观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR),对c-fos基因表达情况进行定量分析,比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。结果与结论:对照组脑部能检测到微量细胞凋亡,c-fos基因呈低水平表达;实验组经过6,12,24 h缺氧后,脑部凋亡细胞逐渐增多,缺氧24 h组凋亡细胞增幅最大(P<0.05),c-fos基因表达有不同程度升高(P<0.05),尤其是缺氧6 h后,该基因的表达上调幅度最高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-fos基因表达上调,可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。

STX3基因突变致微绒毛包涵体病的基因诊断

目的探讨微绒毛包涵体病(microvillus inclusion disease,MVID)患儿临床表型与基因型的关系,以提高对MVID的认识。方法 2017年4月,1例MVID患儿在南方医科大学珠江医院新生儿科住院治疗,2017年6月采用二代测序法对患儿及其父母进行基因测序,采用一代测序方法对患儿胞兄进行定点突变检测。回顾性分析患儿临床表现、治疗、预后及家系基因测序结果。结果患儿女,胎儿期提示肠管扩张,生后第2天开始出现腹泻,为黄绿色黏液样便,合并多种电解质紊乱及代谢性酸中毒。基因测序结果显示,患儿STX3基因无义突变,突变位点为c.424C>T和c.739C>T,分别遗传自表型正常的父母。患儿胞兄8岁,表型正常,测序结果显示有STX3基因的1个杂合突变,位点为c.424C>T(p.R142),突变来源于表型正常的母亲。该突变为国内首次报道。结论 STX3基因分析有助于微绒毛包涵体病的诊断。

牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑部内质网应激相关因子表达的影响

目的观察牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑组织中内质网应激病理状态标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网应激特异性下游蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达及神经元凋亡的影响,探讨其脑保护机制。方法将受精后5 d的斑马鱼幼鱼随机分为空白对照组、缺氧再灌注模型组以及牛磺酸组,其中牛磺酸组按不同浓度进一步分为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L 3个亚组,每组均100条。观察并记录缺氧后再灌注1 h的斑马鱼幼鱼的行为、苏醒时间、中位生存时间、尼氏染色及原位末端标记法检测神经元凋亡情况,Western blot法测各组幼鱼脑部GRP78、CHOP及caspase-12表达水平。结果与模型组相比,各牛磺酸处理组的苏醒时间缩短、中位生存时间延长、尼氏染色阳性神经元计数增多以及凋亡神经元计数减少,差异均有统计学意义(P<0.05);GRP78、CHOP和caspase-12在模型组及各牛磺酸处理组均有表达,但三者在各牛磺酸处理组的表达均较模型组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧再灌注诱发内质网应激,牛磺酸可能通过下调GRP78、CHOP和caspase-12减少神经元凋亡从而减轻斑马鱼幼鱼缺氧再灌注脑损伤。

MiRNA-1247-3P在急性呼吸窘迫综合征细胞模型中的表达及功能分析

目的:检测脂多糖(LPS)处理A549细胞前后发生显著变化的mi RNAs,并验证mi R-1247-3P在不同浓度LPS处理后细胞中表达量的变化,并探讨其可能机制。方法:对照组是以培养液处理A549细胞,实验组分别以不同浓度的LPS处理A549细胞。通过免疫细胞化学染色法、RT-PCR方法检测各组细胞中的SP-A、SP-C的表达量。用基因芯片检测细胞处理前后的表达谱,找出其中的关键mi RNA,PCR的方法检测各组细胞中mi RNA的表达量。结果:实验组中各组细胞的SP-A、SP-C的表达量较对照组均下降(P<0.05)。mi RNAs芯片检测结果显示:表达显著上调的有31个,显著下调的有3个。实时荧光定量PCR测出各实验组mi RNA-1247-3P的相对表达量较对照组均上升(P<0.05)。结论:mi RNA-1247-3P在实验组有高表达,提示其可能在ARDS的发生发展过程中发挥作用。

脂多糖诱发的小鼠急性肺损伤肺组织中microRNA表达谱的变化

目的研究脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）／急性呼吸窘迫综合征（ARDS）肺组织中microRNA表达谱的改变，探讨microRNA在ALI／ARDS发生机制中的作用。方法C57BL小鼠24只，随机分为实验组和对照组，每组12只。实验组小鼠通过气管切开经呼吸道向肺内注入LPS（6mg／kg），构建小鼠ALI/ARDS模型。对照组用同样的方法注入相应剂量的9g／L盐水。所有小鼠均于手术后24h处死，取左肺组织用于测量干湿质量比，右中肺叶行HE染色观察病理变化。应用microRNA芯片技术检测对照组及实验组小鼠肺组织microRNA表达谱的差异，用生物信息学方法进行靶基因预测及信号通路分析。结果与对照组比较，实验组小鼠出现明显的呼吸系统症状，肺组织干湿质量比明显升高（P〈0．01），病理结果符合ALI／ARDS特征。芯片结果显示ALI／ARDS小鼠肺组织中明显差异表达的microRNA有48个，其中上调的有27个，下调的有21个，这些microRNA的靶基因可能参与调节炎症相关的信号通路。结论在ALI／ARDS小鼠模型中，部分microRNA的表达发生明显的变化，microRNA在ALI／ARDS病理生理过程中起重要作用。

模式生物斑马鱼在新生儿缺氧性脑损伤研究中的应用

围生期多种因素可导致胎儿或新生儿不同程度的缺氧性脑损伤,多见于围生期窒息.缺氧引起脑损伤的机制一直未能充分阐明,且目前尚无有效的药物及治疗方法改善围生期缺氧所致的脑损伤.现就近年来关于斑马鱼作为模式动物研究缺氧性脑损伤的研究进展作一综述,主要从斑马鱼缺氧性脑损伤模型的解剖学和行为学基础、建模方法、研究策略,并结合其在神经营养药物筛查方面的优势进行分析,对斑马鱼研究缺氧性脑损伤的研究前景进行了展望,为研究新生儿缺氧缺血性脑病的治疗方案提供了新思路.

猴脑纹状体边缘区脑啡肽样免疫反应阳性突触的超微结构研究

目的观察猴脑边缘区甲硫氨酸-脑啡肽（MET-ENK）阳性免疫反应神经终末突触的超微结构，为进一步探索其学习记忆功能提供超微结构基础。方法选取健康成年雄性恒河猴6只，常规灌注固定和取脑，冰冻切片后行免疫组织化学染色检测纹状体MET-ENK的表达．取边缘区内免疫组化染色阳性反应区进行超微切片，电镜下观察边缘区MET-ENK阳性反应神经终末突触的超微结构。结果免疫组织化学染色显示在壳核和苍白球之间有一条密集排列的MET-ENK免疫反应阳性细胞带，即纹状体边缘区；电镜下可见边缘区神经元为长梭形或纺锤形，细胞器较少。MET-ENK阳性反应神经终末突触主要有5个类型：轴-树突触、轴-棘突触、轴-体突触、轴-轴突触以及多种类型的复合型突触。结论猴脑纹状体边缘区MET-ENK阳性免疫反应神经终末突触结构具有多样性和复杂性，明显不同于纹状体其他部分。

生物标记物对脑损伤患儿早期诊断及监测价值的研究进展

脑损伤是新生儿期危害严重的疾病之一,可导致脑瘫、运动发育迟缓、认知功能障碍及学习困难等后遗症,严重影响了新生儿的健康发育及生活质量的提高。新生儿脑损伤(NBI)是一种由多种原因导致的范围很广的疾病,其临床表现缺乏特异性,临床上在判断其损伤严重程度、持续时间及产前损伤时间等存在较大的困难,受到广大科研者及临床医师的重视。目前,影像学方法是NBI确诊的主要手段,但影像学检查通常存在滞后性和一定的局限性。体液生物标记物水平在脑损伤后会较早发生变化,通过检测其水平变化可早期预测脑损伤情况。近年来,新生儿各种体液中已检测出多种具有敏感性的脑损伤生物标记物,主要包括神经元特异性烯醇化酶(NSE)、泛素羟基末端水解酶L-1(UCH-L1)、S100B蛋白、Tau蛋白、髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、激活素A等,本研究对上述常用生物标记物在NBI中的应用情况以及研究进展进行综述,探讨其临床应用前景。

miRNA-24-3P靶向调节SP1对RAW264.7细胞功能的影响

目的探讨miRNA-24-3P(miR-24-3P)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)过程中的作用机制。方法在RAW264.7细胞中分别转染miR-24-3Pmimics、miR-24-3Pinhibitor及各自阴性对照,检测各组细胞中miR-24-3P的相对表达水平,检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、SP1、核因子-κB(NF-κB)的相对表达水平,并通过双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-24-3P对SP1的靶向作用。结果TNF-αmRNA、IL-6mRNA在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。SP1 mRNA、NF-κB mRNA在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。SP1在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-24-3P与SP1野生型会显著抑制HEK293细胞中的荧光酶表达(P<0.05)。结论miR-24-3P可通过影响SPI基因的翻译进而影响炎性介质的释放,在ARDS过程中发挥作用。

let-7a-5p在急性呼吸窘迫综合征中作用

目的探讨let-7a-5p靶向调节转化生长因子-β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGF-βR1)在急性呼吸窘迫综合征中作用及机制。方法 NIH3T3细胞经转染let-7a-5p mimics或let-7a-5p inhibitor等后,分为let-7a-5p增强组、let-7a-5p增强对照组、let-7a-5p抑制组、let-7a-5p抑制对照组和阴性对照组,检测各组细胞中let-7a-5p的相对表达量,转染成功后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达量。将HEK293细胞分为实验组和对照组,分别转染let-7a-5p mimic和阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定2组相对荧光素酶活性的荧光值。结果转染后let-7a-5p增强组let-7a-5p相对表达量(191 215.66±115 55.57)高于阴性对照组(251.85±85.12)和let-7a-5p抑制组let-7a-5p(1.14±0.22)(P<0.05),阴性对照组高于let-7a-5p抑制组(P<0.05);let-7a-5p增强组细胞中Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P<0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P<0.05);let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),5组细胞中TGF-βR1mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);let-7a-5p增强组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P<0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P<0.05),let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,对照组细胞相对荧光素酶活性(1.00±0.00)高于实验组(0.34±0.13)(P<0.05)。结论 let-7a-5可通过抑制TGF-βR1蛋白翻译而减轻肺纤维化,进而延缓急性呼吸窘迫综合征进程。