EB病毒感染传染性单核细胞增多症和噬血细胞综合征患儿免疫功能分析

目的探讨EB病毒感染传染性单核细胞增多症(EBV-IM)和嗜血细胞综合征(EBV-HPS)患儿外周血淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及血游离EBV-DNA拷贝数的改变特点。方法选取2015年1月至2017年12月经深圳市儿童医院血液科诊治的51例EBV感染患儿为实验组,其中EBV-IM患儿28例,EBV-HPS患儿23例,选取35例体检健康的儿童为对照组。全部受检者采用流式细胞技术检测外周血淋巴细胞、CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、NK细胞的绝对计数及百分比,应用血清免疫球蛋白分析仪检测IgG、IgM、IgA水平,实时荧光定量PCR检测EBV-DNA拷贝数。结果实验组与对照组受检者的淋巴细胞计数、淋巴细胞各亚群计数及百分比比较,差异均有显著统计学意义(P<0.01);EBV-IM组与对照组、EBV-HPS组比较,淋巴细胞计数、CD3+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数及百分比升高、CD4+/CD8+值、CD19+B淋巴细胞百分比降低,差异有统计学意义(P<0.05);EBV-HPS组与对照组比较,淋巴细胞计数、CD3+T细胞计数、CD4+T淋巴细胞计数、CD19+B淋巴细胞计数及NK细胞计数降低,CD3+T淋巴细胞百分比、CD8+T淋巴细胞百分比升高,差异有统计学意义(P<0.05);EBV-IM组患儿的IgG、IgM、IgA较对照组及EBV-HPS组升高,差异有统计学意义(P<0.05),而EBV-HPS组与对照组免疫球蛋白比较,差异无统计学意义(P>0.05);EBV-HPS组较EBV-IM组EBV-DNA拷贝数升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 EBV-IM与EBV-HPS患儿外周血淋巴细胞亚群存在显著差异,各亚群细胞百分比结合绝对计数有助于两者的诊断及鉴别诊断;免疫球蛋白检测及EB病毒拷贝数分析可进一步辅助EBV-IM及EBV-HPS的鉴别诊断。

重型β-地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植术后淋巴细胞亚群重建分析

目的动态监测重型β-地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术前及术后第1、2、3、6和12个月淋巴细胞亚群比例的变化,探讨淋巴细胞的恢复情况及重建特点。方法选取行allo-HSCT的27例重型β-地中海贫血患儿,其中人类白细胞抗原(HLA)全相合移植术20例,HLA不全相合移植术7例。采用流式细胞术(FCM)动态监测患者移植前及术后1年内CD3^+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3^+CD8^+T细胞、CD4^+/CD8^+比值、CD19^+B细胞及CD16^+CD56^+自然杀伤(NK)细胞比例的变化。结果与allo-HSCT术前比较,重型β-地中海贫血患儿术后CD16^+CD56^+NK细胞比例恢复最快,术后第1、2、3、6个月均高于术前(P<0.05),第12个月恢复至术前水平(P>0.05)。CD3^+T细胞比例术后第1个月与术前比较差异无统计学意义(P>0.05),第2个月起降低且低于术前(P<0.01),第12个月仍低于术前(P<0.01)。CD3^+CD8^+T细胞比例术后第1个月明显高于术前(P<0.01),随后逐渐下降,至术后第12个月时仍高于术前(P<0.05)。CD3^+CD4^+T细胞比例术后明显低于术前(P<0.01),且呈缓慢回升趋势,至术后第12个月仍明显低于术前(P<0.01)。CD4^+/CD8^+比值长期倒置,虽然呈缓慢上升趋势,但仍明显低于术前(P<0.01)。CD19^+B细胞比例术后第1个月明显低于术前(P<0.01),术后第2个月恢复至术前水平(P>0.05),术后第6个月和第12个月明显高于术前(P<0.01、P<0.05)。术前及术后同一时间点男性、女性患儿之间及HLA全相合移植与HLA不全相合移植之间各淋巴细胞亚群比例差异均无统计学意义(P>0.05)。结论重型β-地中海贫血患儿allo-HSCT术后淋巴细胞亚群的免疫重建恢复顺序依次为CD16^+CD56^+NK细胞、CD3^+CD8^+T细胞、CD19^+B细胞、CD3^+T细胞、CD3^+CD4^+T细胞。

化疗对急性淋巴细胞白血病患儿性腺功能的影响

目的研究不同强度的化疗对急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童性腺功能激素指标的影响。方法依据华南地区儿童ALL治疗协助组2016化疗方案(SCCLG-ALL-2016),对112例青春期前初发ALL儿童进行队列研究,采用化学发光法检测化疗前、化疗后3、6、12、18月的血清抗缪勒管激素(AMH)和抑制素B(INHB)激素水平,按照性别及危险度分型分组进行比较。结果共纳入112例ALL患儿,男58例、女54例,中位年龄4.1(2.5~6.1)岁;高危型24例、中危型58例、低危型30例。正常对照组57例,男28例、女29例,中位年龄4.0(2.5~6.3)岁。采用重复测量方差分析发现,男童低危型、中危型、高危型之间血清INHB水平差异有统计学意义(F=3.60,P=0.036),化疗前后不同时间之间血清INHB水平差异有统计学意义(F=81.67,P<0.001),化疗时间与危险度分型对于血清INHB水平存在交互效应(F=5.12,P<0.001)。女童低危型、中危型、高危型之间血清AMH水平差异无统计学意义(F=0.62,P=0.551),化疗前后不同时间之间血清AMH水平差异有统计学意义(F=21.32,P<0.001),化疗时间与危险度分型对于血清AMH水平存在交互效应(F=2.33,P=0.029)。结论尽管ALL儿童尚处于青春期前,SCCLG-ALL-2016化疗仍可导致其性腺功能激素指标改变,且高危型化疗影响程度高于低中危型,提示ALL儿童在化疗期间性腺功能存在不同程度的损伤。

儿童免疫性血小板减少症淋巴细胞亚群及血小板相关抗体变化的临床意义

目的观察免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血淋巴细胞亚群比例的变化和血小板相关抗体的表达情况,探讨其诊断效能。方法选取2020年6月至2021年6月深圳市儿童医院临床诊断为ITP患儿98例和健康儿童30例,采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群和血小板相关抗体(PAIgG、PAIgM、PAIgA),同时比对24例患儿治疗前后血小板相关抗体的变化情况,并通过相关性分析和ROC曲线分析其与血小板数量的相关性和对ITP的诊断效能。结果ITP患儿血小板相关抗体PAIgG、PAIgM、PAIgA阳性百分率均高于健康儿童,差异有统计学意义(P<0.01),ITP患儿治疗后血小板相关抗体相比治疗前有所下降,差异有统计学意义(P<0.05),淋巴细胞亚群中CD16^(+)CD56^(+)NK细胞比例低于健康儿童,差异有统计学意义(P<0.05),CD19^(+)B细胞、CD3^(+)T细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞、CD3^(+)CD8^(+)T细胞及CD3^(+)CD16^(+)CD56^(+)NKT细胞比例与健康儿童相比差异无统计学意义(P>0.05)。PAIgG、PAIgM、PAIgA与血小板的数值呈现负相关,淋巴细胞各亚群的比例变化与血小板的降低无相关性。PAIgM对ITP的诊断价值最高,ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.910,cut-off值为21.5%,敏感性85%,特异性90%;血小板相关抗体联合CD16^(+)CD56^(+)NK细胞亚群并不能提高其诊断效能。结论ITP患儿存在一定程度的免疫紊乱,相对于淋巴细胞亚群而言,血小板相关抗体对其诊断及预后评估更具有临床价值。

SiC_(p)/Al复合材料超疏水功能表面的性能及制备

为提高SiC_(p)/Al复合材料的服役性能,本研究采用紫外激光刻蚀与盐酸溶液腐蚀相结合的方法,在SiC_(p)/Al复合材料试样表面构建二级微结构,经低表面能处理后制备出超疏水功能表面。采用超景深三维显微系统、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、能量色散X射线能谱仪(energy dispersive spectrometer,EDS)、接触角仪等设备,以及电化学试验、温度循环试验、摩擦试验等方法,研究了所制备的SiC_(p)/Al复合材料超疏水功能表面的微观形貌、组成成分、疏水性、耐腐蚀性、温度稳定性以及耐磨性。试验结果表明:所制备的试样具备良好的超疏水性能,10μm粒径试样表面的接触角达到了163.8°,且滚动角小于1°。与未处理试样相比,所制备试样的表面具有良好的耐腐蚀性、防污性和温度稳定性,以及一定的耐磨性能。同时,SiC颗粒的粒径越大,激光刻蚀难度越大,所制备试样表面的耐腐蚀性能越好。SiC颗粒粒径对所制备试样表面的防污性、温度稳定性和耐磨性能的影响较小。

1例非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病家系并文献复习

目的鉴定1例非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)基因相关疾病家系的致病突变。方法调查收集先证者和家系成员病史资料,观察其临床特征和实验室检查指标。采用芯片捕获高通量测序方法检测先证者MYH9基因,确定突变位点后,对先证者和家系成员进行Sanger验证。结果该家系三代4名患者均有鼻衄、瘀斑紫癜、外伤血肿或月经量增多病史,长期存在镜下血尿和蛋白尿。血涂片镜检均有血小板减少、巨大血小板和粒细胞异常包涵体“三联征”。所有患者MYH9基因第40内含子供体剪接位点存在错义突变c.5765+2T>A(p.R1922Rfs*43),且该基因突变与疾病表型共分离。结论该家系存在MYH9基因c.5765+2T>A(p.R1922Rfs*43)剪接突变,是MYH9基因相关疾病的致病突变,为国内首次报道。

儿童急性单核细胞白血病骨髓自然缓解1例报告并文献复习

目的探讨急性髓系白血病自然缓解的诱因和可能的发生机制。方法回顾分析1例急性单核细胞白血病发生自然缓解患儿的临床资料,并结合相关文献探讨自然缓解的可能机制。结果 1岁4月龄男性患儿,确诊为急性髓系单核细胞白血病,未经化疗后发生骨髓自然缓解,约1年后出现髓系肉瘤复发,予行HLA半相合造血干细胞移植术,目前预后良好。回顾既往文献发生自然缓解患者大部分缓解之前有发热史,通常由感染导致,也可由药物撤除或输血导致。结论髓系白血病发生自然缓解很少见,未来或许可以通过免疫疗法达到治疗白血病的目的。

IL-23与IL-12诱导NK细胞功能的异同及机制初探

目的探讨细胞因子IL-23与IL-12对NK细胞功能的影响及可能的机制。方法密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMCs)或磁珠纯化NK细胞,不刺激或用IL-23或IL-12刺激,用流式细胞术和ELISA法检测NK细胞产生IFN-γ的情况;以K562或Jurkat细胞作为靶细胞,用流式细胞术检测NK细胞的杀伤功能并分析NK细胞在不同的刺激条件下杀伤相关分子的表达情况及pSTAT的表达情况。结果与未刺激组相比,IL-23和IL-12均可以诱导NK细胞呈剂量和时间依赖方式产生IFN-γ;但IL-12而非IL-23可以增强NK细胞对靶细胞K562或Jurkat细胞的杀伤功能。进一步研究表明,IL-12而非IL-23可以诱导杀伤相关分子TRAIL及CD107a/b的表达。此外,IL-12诱导NK细胞表达更高水平的pSTAT4,而IL-23诱导NK细胞表达更高水平的pSTAT3。结论与IL-12相比,IL-23亦可以诱导NK细胞产生细胞因子但不能增强NK细胞的杀伤功能,IL-23不能诱导杀伤相关分子TRAIL及CD107a/b的表达,IL-23可以诱导低水平的pSTAT4但高水平的pSTAT3的表达。

E6流式细胞仪检测CD34^+细胞百分比和绝对计数方法的建立

目的应用E6流式细胞仪建立检测CD34^+细胞百分比和绝对计数的方法并进行验证。方法收集2019年1月至2019年12月在深圳市儿童医院血液肿瘤科因重型β-地中海贫血行异基因造血干细胞移植的患儿89例,以移植患儿供的骨髓或外周血为研究对象,应用E6流式细胞仪建立ISHAGE法检测CD34^+细胞百分比,应用"流式直接体积法"计算CD34^+细胞的绝对计数,并结合白细胞手工计数对CD34^+细胞绝对计数的结果进行验证。结果结合白细胞手工计数对CD34^+细胞的绝对计数结果的正确性进行验证,Pearson相关分析结果显示:供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞绝对计数流式结果与CD34^+细胞绝对计数计算结果高度相关(r=0.93,R2=0.87,P<0.0001);两次供者外周血干细胞或骨髓干细胞白细胞计数和单个核百分比结果高度一致;同样,两次供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞流式计数百分比和绝对计数结果亦高度一致。结论应用E6流式细胞仪的"流式直接体积法"计算CD34^+细胞绝对计数结果准确,可以作为造血干细胞移植术前计算供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞数目的可靠依据。

毛细管电泳筛查小儿β地中海贫血的应用研究

目的:探讨毛细管电泳在小儿β地中海贫血筛查中的价值,并建立本实验室HbA2、HbF的截断值。方法:分析886例血红蛋白电泳的结果以及它们对应的β地中海贫血基因结果,通过ROC曲线确定HbA2、HbF的截断值。结果:HbA2筛查轻型β地中海贫血的截断值是3.65%,特异度是0.996,敏感度是0.995。HbF筛查轻型β地中海贫血的截断值是1.45%,特异度是0.751、敏感度是0.675;由此还检出了1例Codon5(CCT→C)突变、1例SEA-HPFHβ缺失、1例-28(A→G)合并IVS-Ⅰ-128(T→G)双重杂合突变、1例尚未见报道47bp的β缺失。结论:毛细管电泳在筛查小儿β地中海贫血中具有较高的灵敏度和特异性,尤其是对罕见β地中海贫血的检测具有重要意义。

血液学指标在儿童地中海贫血和缺铁性贫血鉴别诊断中的价值

目的探讨红细胞(RBC)计数、血红蛋白含量(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)及血红蛋白A2(Hb A2)在地中海贫血和缺铁性贫血(IDA)鉴别诊断中的应用价值并确立最佳截断值(cut-off值)。方法选取2015年1月至2017年1月深圳市儿童医院经地中海贫血基因和血清铁、铁蛋白确诊的地中海贫血和缺铁性贫血患儿为研究对象,其中α地中海贫血198例,β地中海贫血204例,缺铁性贫血153例,正常对照组108例。分别比较α、β地中海贫血与缺铁性贫血患儿的RBC计数、Hb、MCV、MCH及Hb A2的值,采用ROC曲线评价鉴别地中海贫血与缺铁性贫血的血液学指标,找出最佳cut-off值,以cut-off值计算上述指标鉴别这两种贫血的灵敏度、特异性、预测值与准确率。结果 RBC计数、Hb、MCV、MCH及Hb A2在鉴别儿童β地中海贫血与缺铁性贫血中差异有统计学意义(P<0.05),其最佳cut-off值分别为5.20×1012/L、92.50 g/L、60.25 fl、17.25 pg、2.85%;MCV、Hb A2在鉴别α地中海贫血与缺铁性贫血中差异无统计学意义,RBC计数、Hb、MCH在鉴别α地中海贫血与缺铁性贫血中差异有统计学意义(P<0.05),其最佳cut-off值分别为5.25×1012/L、101.50 g/L、18.15 pg。结论 MCV、Hb A2在鉴别儿童α地中海贫血和缺铁性贫血中无鉴别价值;RBC计数及Hb分别取最佳cut-off值时,单独或联合使用对鉴别α地中海贫血和缺铁性贫血具有筛查价值;Hb A2在鉴别儿童β地贫与IDA中最具有意义,其灵敏度、特异度等均大于90%,可作为独立的鉴别指标,取cut-off值为2.85%。

MYH9相关疾病六个家系临床特征和基因变异分析

目的分析非肌性肌球蛋白重链9相关疾病(MYH9-RD)家系患者的临床特征、基因变异和实验室检查特点。方法回顾性分析2017年7月至2020年9月在深圳市儿童医院诊断的MYH9-RD 6个家系的一般情况、临床表现、基因变异和实验室检查结果,通过t检验比较血小板计数仪器法与手工法的结果。结果6例先证者中男4例、女2例,年龄4.0(0.5~7.6)岁,主要临床表现为血小板减低6例,鼻衄3例,皮肤淤点淤斑2例,外伤血肿1例,天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、γ谷氨酰转移酶升高1例。其中1例先证者无家族史,余5例均为家系患病。6个家系共12例患者,2个家系2例患者长期存在镜下肾源性血尿,1个家系2例患者有早发性白内障病史,3个家系5例患者天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、γ谷氨酰转移酶水平呈慢性轻度升高。12例患者共发现4种MYH9基因变异,分别为第17号外显子c.2104C>T(p.R702C)变异,第31号外显子c.4270G>A(p.D1424N)变异,第39号外显子c.5521G>A(p.E1841K)变异,第41号外显子c.5797C>T(p.R1933X)变异。经家系验证分析,第一个变异是自发变异,其余变异均来自父亲或母亲。血常规示12例患者血小板数量均下降,仪器法计数结果明显低于手工计数法[(33±17)×10^(9)比(60±21)×10^(9)/L,t=-5.83,P<0.05],血涂片可见巨大血小板、血小板减少、粒细胞异常包涵体“三联征”。MYH9基因变异的位置在编码非肌性肌球蛋白重链ⅡA的N端具有ATP酶活性的动力区域“头部”(R702C)患者血小板数量严重减低(<20×10^(9)/L),包涵体不明显;而C端“体尾部”位置变异患者包涵体明显可见,血小板数量相对较高(40×10^(9)~80×10^(9)/L)。结论MYH9-RD临床表型异质性明显,MYH9基因变异位置与血小板数量和包涵体特征有一定关系。对于病史较长、病因不明和常规治疗效果欠佳的原发性免疫性血小板减少症患者,不管有无家族史,均应警惕MYH9-RD可能。血常规分析和血涂片形态学是筛查和诊断该病的首要步骤,实验室应重视形态学复检规则和规范报告。