海产食品中的弧菌问题(2)

2.4 河弧菌(V.fluvialis):1975年8月Furmiss等自一名来自巴林的腹泻病人大便中分离到,曾命名为F弧菌。此菌广泛分布于世界各地的河流、港湾水域中,故取名河弧菌。目前有1a和1b两个亚型。 本菌为革兰氏阴性的多形性细菌,呈小杆状、弧状、球杆状,有一端鞭毛,呈活泼的穿梭状运动。需氧或兼性厌氧菌,在无盐及3％NaCl培养基中生长。

肉品中猪丹毒杆菌的快速检验

利用含猪丹毒免疫血清，吖啶橙，卡那霉素，叠氮钠及蚕蛹浸出液等混合配制的增菌培养基，进行猪丹杆菌的增菌培养，结合荧光菌闭检查，在含菌量为５×１０＾２～５×１０＾３ｃｆｕ／ｇ时，经３７℃培养１２ｈ，即可呈现阳性结果。

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

应用PCR－ECL技术检测食品中的沙门氏菌

应用ＰＣＲ－ＥＣＬ技术检测食品中的沙门氏菌卢强，陈贵连，林万明沙门氏菌在食品公共卫生上有重要的意义，需要对其进行快速、敏感、特异的检测。由于聚合酶链反应（ＰＣＲ）有很高的特异性和敏感性，并且能在较短时间内对大量标本同时进行检测，所以是一种较理想的检测...

HRP直接标记属特异性基因探针检测沙门氏菌的研究

以活化辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰ—ＰＢＱ—ＰＥＩ＋—ＮＨ３＋）直接标记沙门氏菌属特异性ＤＮＡ探针ｐＬＳ２和ｐＬＳ３，探针与靶ＤＮＡ杂交后催化发光底物，经增强型化学发光反应（ＥＣＬ），用普通Ｘ光胶片自显影（ＣＰＤ）检测沙门氏菌。经狭缝杂交（Ｓｌｏｔｂｌｏｔ），该法标记探针均可检测到０．１ｐｇ的纯质粒ＤＮＡ及１０３个未经培养的鼠伤寒沙门氏菌。Ｄｏｔ—ｂｌｏｔ杂交结果证明，ＨＲＰ标记的探针仅与沙门氏菌属细菌杂交，而与试验的其他肠道非沙门氏菌不杂交。本研究表明，ＨＲＰ直接标记基因探针化学发光自显影法检测沙门氏菌，安全、快速、简便，且有高度的敏感性和特异性，是一种有较大应用前景的非放射性标记探针杂交检测方法。

沙门氏菌快速、特异检验方法的建立及其应用

1.首次在国内研制出强选择性的PNT增菌液(国外尚未见报道),并建立了以微量复增菌法为基础的常规检验方法。突破点表现在增菌效果好(沙门氏菌生长,杂菌基本被抑制,一次性增菌仅需6h);

PCR扩增invA基因特异性检测沙门氏菌

建立了扩增ｉｎｖＡ基因检测沙门氏菌的ＰＣＲ方法，对收集的５０个血清型１２３株沙门氏菌及７种２７株非沙门菌进行ＰＣＲ，２％琼脂糖电泳检查，结果所有沙门氏菌都扩增出了３００ｂｐ的特异性产物，非沙门氏菌都未扩增出此目的条带。产物的特性由ｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交进一步证实。通过电泳判定结果，该法可检出扩增体系中１０ｐｇ染色体ＤＮＡ及１０＾２ｃｆｕ的纽波特沙门氏菌５００２９。

应用间接血凝抑制试验快速检测食品中沙门氏菌及血清型分型的实验研究

沙门氏菌是重要的人畜共患病及食物中毒性细菌之一,广泛地分布于自然界中及畜禽体内,由该菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的首位,目前虽对沙门氏菌的检测方法的研究做了大量的工作,建立了许多检测方法,但在食品检测中仍以常规方法为主。

PNT—PCR检测食品中沙门氏菌方法的建立及应用

本文将自行研制的一种沙门氏菌强选择性增菌液PNT与PCR技术相结合,建立了快速、特异、敏感地检测食品中沙门氏菌的PNT—PCR技术。通过对食品样品、污水样品的检测,结果表明该检测系统可检出食品中10cfu的沙门氏菌。应用本检测系统检测各类食品及污水样品612份,PNT—PCR法检出沙门氏菌198份,而常规方法检出104份,本法在特异性、敏感性及实际样品检出率方面均显示了很强的优越性。

海产食品中的弧菌问题(1)

弧菌是海洋正常微生物群之一,广泛存在于世界各海洋水域中,其中有许多类群的弧菌是海洋生物的致病菌或条件致病菌,有些对人体健康具有一定的危害,经常引致人的食物感染和食物中毒。因此,

聚合酶链反应检测食品中的沙门氏菌

参考沙门氏菌侵袭性基因invA的序列,设计合成一对引物扩增其中一段序列,建立了特异性检测沙门氏菌的PCR方法。引物两端分别加了Bam HI和EcoR I切点,扩增片段大小为300bp。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种23株非沙门氏菌进行PCR检测,结果仅沙门氏菌有300bp的扩增产物,显示了很强的特异性,为下一步克隆而设计的两个酶切位点对引物的特异性没有影响。经琼脂糖凝胶电泳,PCR的检出极限是10pg染色体DNA和10~2 cfu的细菌。将扩增产物经slot—blot与辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的invA基因探针杂交,经增强型化学发光反应(ECL)及化学发光自显影(CPD)检测,可提高检测的敏感性一个数量级,同时增加了特异性。为推广应用,本文试验了8种模拟食品样品对PCR反应的影响,结果除奶酪外,其余都得到较好扩增。对120份污水及食品样品进行检测,该检测系统检出70份阳性结果,检出率高于常规分离。初步应用显示,PCR检测方法敏感、特异、简便、快速,适合于食品卫生检验和临床标本检验的现场应用。

动物性食品中单核细胞增多性李氏杆菌检验方法的建立及其应用

1、在国内首次建立了动物性食品中单核细胞增多性李氏杆菌检测的常规检验方法,同时研制了自己的增菌培养基吖啶橙增菌液与分离培养基七叶苷琼脂,填补了国内空白。其优点主要表现在单增李氏菌在增菌培养基中生长速度快,抗杂菌干扰能力强。在分离培养基上分离效果好,菌落具有特征性易于辩认.生化鉴定实验快速简捷,整个检测时间仅需5d,1000余份实际样品检测表明,该方法不但适合肉、乳等动物性食品的检测,同时也可用于其它食品检测。

食品中真菌及其毒素检测的研究进展

真菌污染食品不仅会造成食品腐败变质,给食品工业造成严重的经济损失,更重要的是有些真菌能产生毒素,这些真菌毒素可随食品进入人体,给人健康带来极大的危害。近年来,国外对食品中真菌及其毒素的检测研究报道颇多,本文就近年来的进展作一简要综述,以供食品卫生工作者参考。

鼻疽菌定向变异及免疫的研究

利用不同试剂加入甘油琼脂培养基中,对典型的强毒鼻疽杆菌进行驯化培养,经20个月培育(220-291代)的结果,获得了在毒力上致弱,但仍保有免疫原性的菌株。前后用海猪63只进行过三次免疫试验,证明有四组变异菌使海猪对强毒鼻疽菌的攻击有50-87.5%的保护率。

动物性食品中单核白细胞增多症李氏菌的检测

比较了4种增菌液和3种分离琼脂对动物性食品中单核白细胞增多症李氏菌的检测效果,以蛋白陈增菌液和胰蛋白陈琼脂为最佳.用这种方法检测了市售猪肉、分割鸡肉、鲜牛奶、奶皮、奶酪和奶豆腐中的单核白细胞增多症李氏菌,其检出率分别为6.7%,5.45%,5.0%,7.89%,27.03%和58.97%.

生物素-亲和素斑点酶联免疫吸附试验快速检测鱼源副溶血性弧菌的研究

本研究建立了快速检测鱼源副溶血性弧菌的BA-Dot-ELISA方法.用该法可检出每毫升接种10个菌,增菌18h的培养物.该法敏感性为10~4个/mL,比Dot-ELISA敏感10～100倍.不与溶藻性弧菌、亲水气单胞菌等13种杂菌发生交叉反应.增菌前杂菌多于副溶血性弧菌10~6时,对检测结果有影响.可在22～24h报告结果,比常规培养法快4～6d以该法对带鱼、小黄花鱼、马面鱼、鲤鱼等311份样本进行检测,检出率分别为47.0%、41.7%、14.8%和11.8%,与常规培养法相差不显著(P>0.05).生化试验复检结果表明,检出的阳性可凝菌株均为副溶血性弧菌.该法适用于在短时间内对大批样本的检测.

吖啶橙免疫荧光菌团法快速检测鱼贝类副溶血性弧菌的研究

本研究建立了适用于检测鱼贝类副溶血性弧菌的吖啶橙免疫荧光菌团培养—沉淀法.用该法可检出每毫升含10万个细菌的菌悬液,不与沙门氏菌、大肠杆菌、猪丹毒杆菌等7种杂菌发生交叉反应.采用随机抽样法对从长春市各大市场采集的351份海产鱼贝类样品进行了检测,其阳性率为46.4%,常规培养法检出率为49.8%,两者相差不显著(P>0.05).该法可在27h之内报告结果,而常规培养法需5～7d.该法具有特异性强、敏感性高、简便快速、所需仪器简单等特点,适用于大样本的检测和基层单位使用.