简易的杂交瘤细胞载体培养法

在1．0L的搅拌培养瓶内安装一个可转动的不锈钢篮子，内充填8．0g的圆片状聚脂载体Fibra－Cel，杂交瘤细胞r－69B培养在此搅拌瓶中，转动速度为100r／min，结果53.5％细胞固滞在聚脂载体内，细胞浓度和产生抗人r－IFN的单克隆抗体IgG量为常规法的2倍左右。该设备简单，很适用于普通实验室培养杂交瘤细胞，也可以用于培养其他各种类型的人和动物细胞。

简易的杂交瘤细胞载体培养

通常杂交瘤细胞是悬浮培养在扁瓶或搅拌瓶中,其培养的细胞浓度和抗体的产量都不高。大量生产单克隆抗体则要依靠各种细胞培养器、中空纤维、微胶囊、固定化细胞和连续灌注等系统,但这些系统设计复杂,技术要求高,价格昂贵,效果不一。最近Wang G等人采用园片状聚脂载体(Fibra-

杂交瘤细胞在CelliGen培养器中大量连续培养

鼠-鼠杂交瘤细胞DA4-4(ATCC,HB57)分泌抗人IgM的单克隆抗体IgGl,该细胞被培养在1.5L CelliGen-中空纤维柱连续灌注系统中,CelliGen细胞培养器显示很低的机械剪切力,提高搅拌速度到150rpm增加了氧的传递,但不对杂交瘤细胞造成损害。在连续培养时,DA4-4细胞密度可达20×10~6/ml以上,单克隆抗体浓度高达4.75mg/ml,该培养系统每日可收获抗体1.0g左右。

福州地区113株淋球菌的质粒和耐药性

对福州地区分离的113株奈瑟氏淋球菌进行了质粒和耐药性的研究,发现86. 7％菌株携带2.6Md隐蔽性质粒,并检见含4.5Md耐药性质粒26株和24.5Md传递性质粒24株。所分离的淋菌69.9％出现耐药现象,其中耐3种以上抗生素占38.1％。对菌株的青霉素耐药现象和耐药性质粒的关系进行了讨论。

LAK／IL－2治疗恶性肿瘤患者免疫功能的变化

２１例恶性肿瘤患者接受过继性免疫疗法治疗，采用自体血ＬＡＫ细胞（１～５）×１０＾８联合ＩＬ－２，４０万Ｕ静脉入，每周１～２次，连续１０次，观察治疗过程细胞免疫功能的表现。结果显示，１３例晚期肝癌患者治疗后末梢血淋巴细胞Ｔ亚群的ＣＤ４／ＣＤ８比值显著提高，ＮＫ细胞活性增强，８例晚期肺癌和胃癌患者，上述指标无明显变化，表明免疫过继疗法有一定的疗效，但有其适应症。

Hela细胞高密度悬浮培养的研究

应用1.5L Celligen细胞培养罐,通过加大培养基的更换量,实现了Hela细胞高密度悬浮培养,细胞浓度达1.1×10~7/ml,每周可收获10^(10)以上的活细胞。

大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型。本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策。

Leber遗传性视神经病变家系的线粒体基因突变分析

为探讨Leber遗传性视神经病变(Leber′shereditaryopticneuropathy,LHON)家系线粒体DNA(mtDNA)常见致病原发突变的频谱,用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和单链构象多态性(single strandedconformationalpolymorphism,SSCP)以及DNA测序的方法,对13个家系22位临床诊断为LHON的患者及其母系亲属21人的线粒体DNA进行检测,同时检测71例正常人作为对照。临床拟诊为LHON的13个家系中,11个家系存在mtDNA位点11778G→A突变,另2个家系存在14484位点T→C突变。说明中国LHON病人存在线粒体DNA11778或14484位点突变,其中14484位点突变在国内尚未见报道。

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

目的 克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的粘附素基因papG并作序列分析。 方法 根据Ⅰ型papG(papGJ96 )和Ⅱ型 papG(papGIA2 )基因序列设计 3条引物 ,PG2和PG3分别为下游 3’端引物 ,PG1为两型papG上游 5’端共用引物 ,并在各引物 5’端加入限制性内切酶位点。以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增 ,将扩增产物克隆入质粒载体 ,筛选阳性重组质粒作序列分析。结果 UPEC132株以Ⅰ型 papG引物扩增时为阴性结果 ,以Ⅱ型 papG引物扩增时可获得约 110 0bp的DNA片段。扩增产物经克隆获得阳性重组质粒 pGC39和pGC10 3,对其序列分析显示 papG132编码337个氨基酸 ,与 papGJ96的同源性仅为 4 5 % ,而与 papGIA2的同源性为 98.6 %。与papGIA2比较 ,papG132核苷酸序列 +3位缺失 1个三联体密码 ,并在特异性受体结合域 +49位、+16 0位和PapD蛋白亚单位作用区 +2 72位、+314位存在错义突变 ,此外还存在 7处同义突变。结论UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPECJ96株 ,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合 ,后者为F13型 papA与Ⅰ型papG组合。Ⅱ型PapG粘附力较强 ,具有重要的临床意义。

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察(英文)

背景:神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径,也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型,神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础。目的:分离培养和鉴定人脑神经干细胞。设计和方法:采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞,并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。地点和材料:实验在福建医科大学分子医学研究中心实施。实验材料为自然流产的孕龄6～8周的人胚胎脑组织。主要观察指标:人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能。结果:人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖,经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞,是研究神经干细胞诱导分化的良好模型。

呼吸道白色念珠菌耐药基因CDR1、CaMDR1的研究

目的分析白色念珠菌菌株耐药性与耐药基因的表达规律。提供念珠菌临床用药及预后监测的参考。分析白色念珠菌致病性与耐药基因表达的关系。方法抽提白色念珠菌总RNA,通过半定量RT-PCR检测耐药基因CDR1与CaMDR1的相对表达量,分析比较白色念珠菌耐药性与耐药基因的关系。结果耐药性高的菌株其耐药基因CaMDR1的表达量增加;唑类药物诱导耐药菌株后未见耐药基因CDR1及CaMDR1表达增加。结论白色念珠菌的耐药基因CaMDR1的表达与耐药性有关,即耐药性高的菌株其耐药基因CaMDR1的表达量增加;白色念珠菌耐药菌株经唑类抗真菌药诱导后,其耐药基因CDR1及CaMDR1的表达未见明显增加。

福建莱姆病蜱媒及其宿主调查研究

１９９０～１９９５年，对福建莱姆病疫区的蜱媒及其宿主进行调查，查出蜱类１９种，宿主包括家野鼠类、野猪、野兔、獾、山羊等野生动物和狗、牛等家畜。从粒形硬蜱、台湾角血蜱和社鼠、褐家鼠分离出莱姆病病原体，粒形硬蜱可能是福建莱姆病的主要蜱媒。

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附基因群DNA多态性的研究

目的 研究临床分离的致肾盂肾炎大肠杆菌粘附基因群DNA的多态性。方法 以血凝试验 (MRHA)为基础 ,分别用编码P菌毛主体结构和尖端粘附素的基因探针 ,采用DNA杂交方法对临床分离的 95株尿源性大肠杆菌的粘附基因群进行分析。结果MRHA +++～ ++++占 37 9% (36株 ) ,++占 32 6 % (31株 ) ,MRHA阴性占 2 9 5 % (2 8株 )。菌落原位杂交和DNA斑点杂交试验在MRHA +++～ ++++,++和阴性菌株中两个探针均为阳性的分别为 91 7%、9 7%和 2 1 4% ;在MRHA ++和阴性菌株中单一探针阳性的分别为 6 4 5 %和 35 7%。同时 ,选 10株MRHA ++++大肠杆菌提取染色体DNA ,经EcoRⅠ酶切后Southern杂交进行限制性片段长度多态性分析 ,同源性DNA片段大小不一 ,杂交信号的强弱程度也不同。结论 提示致肾盂肾炎大肠杆菌pap粘附基因群的多样性。

唾液HIV抗体的检测

本文报告唾液标本用明胶颗粒凝集试验和快速免疫印迹试验检测4例HIV感染者的HIV抗体,获得与血清一致的结果。结合文献资料分析,唾液可以代替血液作为群体性艾滋病流行病学监测的理想标本。

我国小肠结肠炎耶氏菌毒力株的特征

本文对我国各地分离的小肠结肠炎耶氏菌的毒力特征进行测定,所有毒力株除个别外,均有VW抗原、Vi抗原和毒力因子,它们的检测结果一致。有毒株还有一条40～50MDa的质粒带,即所谓毒力质粒,但有此毒力质粒的菌株并非都是有毒株,视其有否特异性外膜蛋白(约200KDa)而定。自凝性也是检测耶氏菌毒力的一种方法,但其敏感性与特异性均不及VW抗原测定。因此测定菌株毒力,以VW抗原、Vi抗原和毒力因子测定最特异而敏感,特别后两种方法简单、易行、可靠,可在基层单位推广使用。

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素血清型的研究

研究致肾盂肾炎大肠杆菌Ｐ菌毛粘附素血清型，为该菌的临床鉴定奠定基础。方法：利用６个带有致肾盂肾炎大肠杆菌不同血清型Ｐ菌毛粘附素基因群的克隆株免疫新西兰白兔获得抗血清，经吸收后仅保留对各血清型粘附基因群的特异性。采用单价和多价抗血清建立了全菌ＥＬＩＳＡ方法，用于９５株尿源性大肠杆菌的研究，并与血凝试验进行比较。结果：９５株受检菌株中，ＭＲＨＡ阳性菌株中３７．３％（２５／６７株）全菌ＥＬＩＳＡ阳性，其中ＭＲＨＡ＋＋＋～＋＋＋＋菌株占 ８８．０％（２２／２５）株，ＭＲＨＡ阴性菌株中全菌ＥＬＩＳＡ阳性者仅为 ３．６％（１／２８）株。２６株全菌ＥＬＩＳＡ阳性菌Ｐ菌毛粘附素，Ｆ１３型为８８．５％，Ｆ７型为１１．５％。结论：采用Ｆ１３型或多价抗血清建立的全菌ＥＬＩＳＡ方法可用于ＵＰＥＣ的鉴定。

高耐汞菌株的筛选及其生物学特性研究

[目的]从汞污染土壤中寻找高耐汞菌。[方法]用HgCl2选择性培养基，分离和筛选出耐汞菌，测定苴耐Hg^2＋和耐药性水平，检测耐酸碱能力和还原Hg^2＋能力，分析遗传背景。[结果]共筛出7株耐汞菌，形态学观察和生化鉴定分属假单胞菌或枯草杆菌。其中假单胞菌CHY-7菌株耐药性较少，耐Hg^2＋水平高达100mg／L，营养要求低，耐酸碱范围广（pH5．0～10．0）；16S rRNA基因分类鉴定为恶臭假单胞菌；PCR和DNA测序证实该菌株含merA基因，位于细菌染色体上；在Hg^2＋为5～50mg／L时，48h后还原Hg^2＋为Hg^0的效率为94．3％到82．8％。[结论]该菌株有望应用于工业汞污水的处理和汞污染土壤及水体的修复。

致肾盂肾炎大肠杆菌P菌毛粘附素基因的型别鉴定

目的 从基因水平鉴定致肾盂肾炎大肠杆菌 P菌毛粘附素的类型。 方法 根据 P菌毛 型(Pap GJ96 )、 型 (Pap GIA2 )和 型 (Prs GJ96 )粘附素的基因序列 ,选择非同源区设计合成三对引物。以全菌 DNA样品为模板 ,应用普通 PCR和复合 PCR技术获得三型 pap G的扩增。 结果 U PEC J96分别产生 4 6 1bp和 2 5 8bp的DNA片段 ;U PEC132和 U PEC136均产生 190 bp的 DNA片段。无 P菌毛对照株为阴性扩增。复合 PCR结果与普通 PCR完全一致。Pap G1 32 扩增产物的序列分析表明其与 Pap GIA2 之间具有 97.9%的同源性 ,但存在 4处点突变。 结论 U PEC132株 P菌毛粘附素为 型 Pap G,但与国外同型 Pap G比较 ,存在基因变异。复合 PCR技术用于pap

抗生素、亚硝基胍处理吸水链霉菌FC904原生质体对雷帕霉素产量的影响

目的 选择抗生素和化学诱变剂处理雷帕霉素产生菌的原生质体 ,筛选高产菌株。 方法 分别用庆大霉素、丝裂霉素 C、红霉素、亚硝基胍处理吸水链霉菌 FC90 4( S.hygroscopicus FC90 4)原生质体 ,比较它们对雷帕霉素产量的影响 ,并筛选高产菌株。 结果 庆大霉素的处理效果较好 ,从庆大霉素处理株中筛选到高产菌株 C14、C14 - 1,其雷帕霉素的摇瓶发酵水平 (反相高效液相色谱法测定 )分别比原始株提高 36% ,60 %。 结论 用庆大霉素处理吸水链霉菌 FC90 4原生质体是提高雷帕霉素产量的有效手段。

呼吸道感染中白假丝酵母菌的致病性与细胞外水解酶关系

将84株呼吸道分离的白假丝酵母菌分为致病组和非致病组,采用卵黄培养基法检测细胞外磷脂酶的活力,用牛血清白蛋白琼脂培养基法检法分泌型天冬氨酸蛋白酶的活力,并用RT-PCR的方法检测这2种酶相关基因PLB1和SAP2的表达情况,分析其组间差别,结果表明致病组菌株的分泌型天冬氨酸蛋白酶的活力要高于非致病组(P=0.034<0.05),细胞外磷脂酶活力二组未见差别,致病组的PLB1和SAP2基因的表达均高于非致病组(P<0.05),PLB1和SAP2的表达存在着明显的正相关(r=0.776,P<0.01),提示分泌型天冬氨酸蛋白酶是呼吸道白假丝酵母菌重要的毒力因子,PLB1和SAP2的表达上调可能影响菌株的毒力,这2个基因的表达量有正相关的关系。