毛霉红腐乳蛋白质的研究

毛霉红腐乳蛋白质的研究ＡＳｔｕｄｙｏｆＰｒｏｔｅｉｎｉｎＭｕｃｏｒ－ＲｅｄＴｏｆｕｒｕ，ＣｈｉｎｅｓｅＦｅｒｍｅｎｔｅｄＳｏｙｂｅａｎＣｕｒｄ陈躬瑞＊陈儒明赵晴△郑玉锖倪莉饶平凡（福州大学生物工程研究所，福州３５０００２）ＣｈｅｎＧｏｎｇｒｕｉ，Ｃｈ...

利用变异链球菌特异性吸附筛选蕲蛇毒作用蛋白的初步探讨

首次利用变异链球菌与蕲蛇毒相互作用筛选作用蛋白.考察蛇毒的解吸和结合条件,包括作用缓冲体系、pH、离子强度和时间等因素,采用电泳(SDS PAGE)和毛细管液相色谱(cLC)分析作用蛋白,并探讨了菌体多次与蛇毒相互作用的情况,确定了多个作用蛋白的分子质量.

鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 10 6细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L - 1并低于 97.2mg·L - 1时 ,对UMR 10 6细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L- 1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L- 1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR 10 6细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 。

采用高效离子交换色谱分离分析动物肠道菌群方法初探

报道了利用高效离子交换色谱直接分离动物粪便肠道菌群的有关研究结果.人与兔的粪便样品稀释后经离心分离岀细菌,通过DEAE弱阴离子交换色谱(30cm×2cmi.d)进一步除去杂物,将所得细菌的完整细胞样品直接上样高效液相阴离子交换色谱进行分离.色谱柱采用TSKgelSuperQ-TOYOPEARL650C强阴离子交换树脂,平衡缓冲液为0.02mol/L的哌嗪-HCl缓冲液(pH8.0),吸附于色谱柱上的细菌完整细胞用0～1mol/LNaCl线性梯度进行洗脱,洗岀液由260nm紫外吸收与光散射强度检测器检测.人与兔粪便细菌样品分别获得8个与5个组分,经镜检与培养实验确认为细菌,并且光散射仪洗脱峰峰面积同细菌计数结果具有线性相关性.实验表明,高效离子交换色谱能够应用于肠道菌群这样的复杂细菌体系的分离分析.

TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制

为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的.

酒精性肝炎的治疗进展

酒精性肝炎往往导致肝硬化及肝癌,其重症患者短期死亡率相当高．迄今为止,尚无任何药物可以根治这一顽疾,现有临床治疗仅停留于对病情的缓解和营养补充层次．肝脏移植是酒精性肝炎重症患者最佳的、也是最无奈的选择,但他仍然面临移植手术时机和患者适应症的选择问题．近年随着酒精性肝炎发痛机制的逐渐阐明,揭示了肝细胞凋亡以及各种细胞因子在其病程发展中所扮演的重要角色,由此引发了新一轮寻找酒精性肝炎特效疗法的热潮．

四种传统中国食品中SOD样活性物质的研究

本文报导了采用凝胶色谱方法对四种传统中国食品－酱油、鱼露、豆腐乳和皮蛋进行分离，并对各分离组分进行ＳＯＤ样活性的检测。结果表明：在酱油、鱼露和豆腐乳三种食品中存在有明显ＳＯＤ样活性的物质。其ＩＣ５０值分别为０．０ｌ８、０．０１６和０．２ｍｇ蛋白质／ｍ１。同时测定了各分离组分中的铜、锌和钙等金属的含量，并对ＳＯＤ样活性与金属离子含量之间的可能性关系进行了探讨。

酶促水解大豆分离蛋白动力学模型的研究

本文对AS1.398中性蛋白酶在pH6.9和温度49℃条件下水解大豆分离蛋白的动力学机制进行了研究．结果表明：酶水解速率随水解反呈指数递减．为了解释实验结果，我们提出了如下假设：对底物而言水解反应终为零级反应，水解过程中由于游离酶攻击酶-底物中间络合物而造成的不可逆酶变性是一个二级动力学过程．在此基础上，由实验数据推导得到了描述AS1.398中性蛋白酶催化水解大豆分离蛋白的动力学方程，该方程可用于指导和优化酶解反应实验．

GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定

目的获得融合TAT短肽的融合蛋白GST-TAT-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理。方法以质粒pGEX-GFP为模板,扩增目的基因TAT-GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEX-TAT-GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及细胞跨膜实验鉴定。结果大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约54.3 kD的蛋白,其相对分子质量与GST-TAT-GFP融合蛋白相符;Western blot显示该融合蛋白能够被抗GFP的抗体特异性识别;细胞实验表明融合TAT短肽的融合蛋白能跨膜进入细胞L-02、SMMC-7721、Hela和BEL-7402。结论在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST-TAT-GFP融合蛋白。

色氨酸在TOYOPEARL HW-40S 凝胶填料上非理想排阻行为的研究

在发现１８种氨基酸特别是色氨酸在ＴＯＹＯＰＥＡＲＬＨＷ－４０Ｓ树脂所填色谱柱上表现出非理想排阻行为的基础上，以色氨酸在ＨＷ柱上的保留时间为指标，探讨不同的流动相改良剂对ＨＷ凝胶与色氨酸之间相互作用的影响，从而阐明这种反常行为是疏水、离子交换以及氢键三者综合作用的结果，而疏水作用是最主要的影响因素。实验结果说明流动相组成对ＨＷ凝胶色谱行为有明显的影响作用，这不但有助于确立ＨＷ凝胶理想的排阻色谱条件，而且为利用其所具有的吸附性能分离分析肽类和氨基酸等小分子物质奠定了基础。

花生几丁质酶的纯化及酶学性质研究

本课题利用亲和色谱和凝胶过滤色谱法从花生种子中分离得到了几丁质酶.经SDS-PAGE鉴定,该酶蛋白已达电泳纯,分子量约34.4 kD.在还原和非还原状态下均显示单一区带,表明其为单体蛋白.此外,通过等电聚焦法可测得该酶等电点为5.1.而酶学性质的相关研究则表明:该酶最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.

大黄鱼生长激素基因的克隆、表达及表征

用基因工程的方法将大黄鱼生长激素基因克隆到高效表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导得到目的蛋白。以含大黄鱼生长激素的菌体表达产物投喂玛丽鱼,有明显的促生长作用。这些结果为基因重组大黄鱼生长激素在水产养殖中的应用提供了一定的理论依据。

大豆水解蛋白对乳酸菌增殖的促进作用

大豆分离蛋白（ＳＰＩ）经过Ａｓ１３９８中性蛋白酶水解后，得到大豆水解蛋白（ＳＰＨ）。在保加利亚乳杆菌的培养基中添加大豆水解蛋白，考察大豆水解蛋白对保加利亚乳杆菌的增殖作用的影响。结果表明，添加１％的大豆水解蛋白，能够使保加利亚乳杆菌的增殖速度提高将近一倍，展示了大豆水解蛋白不仅作为强化营养添加剂而且作为提高生产效率的一个因子在酸奶生产上的良好应用前景。

饮料工业发展趋势和国际动向

我国的饮料工业初期只生产含汽的碳酸型“清—色”的汽水饮料,八十年代中期,各种含果汁的易拉罐饮料在市场上销售,随后各种运动饮料、果蔬饮料、含乳饮料、滋补饮料不断出现。进入九十年代初期后,人们普遍追求天然饮料和矿泉水、蒸馏水、茶饮料等新颖产品,每年都有大量的新产品上市。另一方面不少新产品市场销售寿命周期很短,市场竞争非常激烈。据统计1993年我国的饮料产量约有500万吨,但与日本1991年的1145万吨,美国1989年的6900万吨,欧洲的5400万吨相比低的多,若按人均消费量计算,这些发达国家更是数十倍于我国,因此随着经济的发展,人们除主食外可供支配的所得增加,饮料消费量将会不断增加。面对竞争激烈同时又具有非常巨大的市场潜力,究竟饮料发展的趋势如何?国际市场又有什么新动向?本文将提出一些不成熟的看法,供同行参考。

武夷岩茶的感官定量描述分析

采用定量描述分析方法分析6种武夷岩茶标准品(包括大红袍特级、一级,水仙特级、一级,肉桂特级、一级)的香气和滋味特征,分析结果显示,前9个主成分的贡献率达87.04%,第一主成分综合了涩、苦、酸、刺激感、花香、药草香、顺滑7个指标的变异信息,第二主成分综合了回甘、生津、甘甜、草香、奶香、火候香6个指标的变异信息。特级大红袍主要特征为顺滑、火候香,而一级大红袍的甜香较明显;特级水仙有明显的顺滑、甘甜特征,而一级水仙的主要特征为火候香、奶香、草香;特级肉桂主要特征为甘甜、回甘、生津,而一级肉桂与花香、涩、苦、酸、刺激感等的指标相关度较高。

底物亲和法分离纯化蕲蛇胃蛋白酶

利用酶(胃蛋白酶)与其底物(酪蛋白)的亲和性,从蕲蛇胃中提取得到一种胃蛋白酶。让底物和酶在pH 2.5的乳酸缓冲液中充分结合,然后调pH至4.0(底物的等电点)沉淀底物和酶的结合物,随后让沉淀物再溶解于乳酸缓冲液中,添加低浓度的SDS将底物和酶分离,最后用DEAE离子交换色谱柱进行纯化,经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,分离得到的胃蛋白酶为电泳纯,其分子量为33KD。酶的最适pH值小于3.0,最适温度为50℃。该结果证明胃蛋白酶能利用其与酪蛋白的亲合性及SDS沉淀作用有效地分离,这种胃蛋白酶能在食品生产的加热、强酸处理过程中应用。

重组SOD在毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以实验室构建的产SOD重组菌为出发菌株,研究其摇瓶发酵工艺条件以提高表达水平,进而在5 L高密度发酵.以确定接种后诱导时间(16 h)、诱导剂浓度(2%)、温度(30℃)、初始pH值(6.2)和诱导时间72 h为条件,摇瓶水平酶活比初始时提高了64%;经5 L罐发酵实验,酶活达到40 864 U·mL-1,是摇瓶的86倍.

培养条件对发酵乳饮料中酪蛋白颗粒结构和蛋白水解产物的影响

报导了培养条件对发酵乳饮料中酪蛋白颗粒结构和酪蛋白水解程度的影响．结果表明，粒径小的酪蛋白颗粒可在３７℃下而不是在菌种的最适温度下获得．在培养基中添加柠檬酸钠可导致拉径大的酪蛋白颗粒的形成．添加糖则使形成的酪蛋白颗粒的粒径变小．发酵ｓｄ后蛋白质水解物的浓度达到最高值．