癌症免疫治疗临床新进展

肿瘤免疫治疗是一种利用患者自身免疫系统实现抗肿瘤作用的治疗方式,现已成为对抗肿瘤的新型有效疗法.然而,抑制性肿瘤微环境的存在可使肿瘤免疫治疗的效果大打折扣.本文将以肿瘤微环境的组成、分类及其对治疗效果的影响为出发点,探讨通过放化疗、免疫检查点、基因修饰免疫细胞以及多种联合治疗等方式应对抑制性肿瘤微环境,使免疫治疗发挥最大疗效.

二肽基肽酶Ⅳ抑制剂对T细胞迁移的影响

目的探讨二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPPⅣ)抑制剂对T细胞迁移的影响。方法流式细胞术检测T细胞表面CXCR3的表达,ELISA检测结肠癌细胞系中DPPⅣ和CXCL10的表达;利用分子克隆技术构建稳定表达全长和DPPⅣ截短型CXCL10的LoVo细胞LoVo-CXCL10(1-77)和LoVo-CXCL10(3-77);通过Transwell实验检测T细胞向不同形式CXCL10的迁移及DPPⅣ抑制剂在T细胞迁移中的作用。结果活化T细胞表面CXCR3表达高达95%,LoVo细胞中DPPⅣ表达量为(1 956.5±95.6)pg/m L,但CXCL10表达量仅为(15.5±0.8)pg/m L;CXCL10(1-77)对T细胞的迁移量为(9.5±0.9)×104,显著高于CXCL10(3-77)对T细胞的迁移量[(4.4±0.7)×104];DPPⅣ抑制剂能使T细胞向LoVo-CXCL10(1-77)的迁移量显著增加,达到(12.3±0.9)×104。结论 CXCL10对T细胞的趋化作用受到DPPⅣ的抑制,DPPⅣ抑制剂能够增强T细胞向肿瘤细胞的迁移。

靶向前列腺干细胞抗原的嵌合抗原受体T细胞构建及其抗肿瘤作用

目的制备表达靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T),研究其嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的表达及其对肿瘤细胞的体内外杀伤作用。方法基因合成靶向PSCA的单克隆抗体的轻链和重链可变区(PSCA Sc Fv),利用酶切将其插入慢病毒载体中。病毒感染T淋巴细胞后,通过流式细胞术检测PSCA-CAR在T淋巴细胞中表达的阳性率。利用体外杀伤实验及ELISA实验分别检测PSCA-CAR-T细胞对PSCA阳性的He La细胞及PSCA阴性的T24细胞的杀伤效果、特异性及其细胞因子分泌情况。利用NOG小鼠背部皮下注射He La细胞建立移植瘤模型。结果酶切结果表明慢病毒载体p L-PSCA-G4H-28TM-28BBζ构建成功,DNA测序结果表明PSCA-CAR的载体序列正确;病毒感染T淋巴细胞后CAR表达阳性率为53.9%;获得的PSCA-CAR-T细胞不管是在高效靶比短时作用条件下还是低效靶比长时作用条件下,其对PSCA阳性肿瘤细胞的杀伤作用均明显强于PSCA阴性肿瘤细胞(P<0.01);同时获得的PSCA-CAR-T在受到PSCA阳性肿瘤细胞刺激时,分泌的细胞因子量显著高于对照的T细胞(P<0.01),而在受到PSCA阴性肿瘤细胞刺激时几乎不分泌细胞因子。体内实验证实PSCA-CAR-T细胞在体内有显著的肿瘤抑制效果(P<0.01)。结论成功制备了靶向PSCA的CAR-T细胞,该CAR-T细胞能特异杀伤PSCA阳性的肿瘤细胞。

尼古丁对大脑奖赏系统的调控作用及脑源性神经营养因子相关机制

目的烟草依赖是严重的公共卫生问题,尼古丁是烟草中的主要精神活性物质。本研究运用颅内自我刺激技术(ICSS)和条件性位置偏爱(CPP)模型,研究尼古丁对大脑奖赏系统功能的影响,并进一步探讨脑源性神经营养因子(BDNF)相关信号通路在尼古丁成瘾中的作用。方法通过立体定位手术在大鼠腹侧被盖区-伏隔核通路上方植入刺激微电极,sc给予不同剂量的尼古丁,检测ICSS的电流阈值以衡量大脑奖赏系统的功能。结果尼古丁≥0.1 mg·kg-1能显著降低ICSS的阈值;此外,与雄性大鼠相比,雌性大鼠的阈值下降更显著,表明尼古丁的奖赏效应存在性别差异。在尼古丁戒断时,ICSS电流阈值显著升高,表明尼古丁戒断能降低大脑奖赏系统的功能。在CPP实验中发现,尼古丁0.5 mg·kg-1组小鼠的CPP得分显著高于生理盐水组,表明尼古丁0.5 mg·kg-1能诱导小鼠形成CPP,而BDNF高亲和力受体TrkB的阻断剂可以降低小鼠CPP得分。单次尼古丁0.5 mg·kg-1注射对小鼠伏隔核和前额叶皮质BDNF表达无影响,但可显著降低海马BDNF的表达;连续7 d给小鼠注射尼古丁0.5 mg·kg-1,停药2 h后,海马BDNFTrkB信号通路表达显著上调,下游AKT表达显著升高,且HipCA3和DG内GluA1蛋白表达增加。结论急性尼古丁能激活大脑奖赏系统,而尼古丁戒断时大脑奖赏系统功能下调;尼古丁对奖赏系统的调控作用可能与BDNF-TrkB信号通路有关。

尼古丁对大脑奖赏系统的调控作用及其BDNF相关机制研究

烟草依赖是严重的公共卫生问题,尼古丁是烟草中的主要精神活性物质。本实验运用颅内自我刺激技术(intracranial selfstimulation,ICSS)和条件性位置偏爱模型(conditioned place preference,CPP),研究尼古丁对大脑奖赏系统功能的影响,并进一步探讨BDNF相关信号通路在尼古丁成瘾中的作用。通过立体定位手术在大鼠腹侧杯盖区(VTA)-伏隔核(NAC)通路上方植入刺激微电极,皮下注射不同剂量的尼古丁,检测ICSS的电流阈值以衡量大脑活奖赏系统的功能。结果发现,0.1mg/kg及以上尼古丁能显著降低ICSS的阈值;此外,与雄性大鼠相比,雌性大鼠的阈值下降更显著,表明尼古丁的奖赏效应存在性别差异。