二氧化氯对香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的消毒效果研究

研究不同浓度二氧化氯(Cl O2)对土壤和水体中香蕉枯萎病菌小型分生孢子和水体中香蕉细菌性软腐病菌的杀灭效果,为控制香蕉枯萎病和软腐病的传播提供依据。通过统计分析消毒前后镰刀菌孢子和细菌的数量发现:3 mg/L以上Cl O2可将待测镰刀菌孢子100%杀灭;20 mg/L的Cl O2淹土不能100%杀死土样中的镰刀菌孢子;800 mg/L以上Cl O2浇灌粉蕉根系周边的土壤可有效减少镰刀菌数量,高于1 500 mg/L Cl O2消毒液可将土壤中镰刀菌100%杀灭。二氧化氯消毒显著降低土壤中细菌的数量,显著增加土壤真菌的数量,并明显减少土壤细菌和真菌的种类。5 mg/L的Cl O2可将水体中香蕉细菌性软腐病菌100%杀灭。研究结果表明,高于5 mg/L的Cl O2进行水体消毒可有效预防枯萎病和软腐病通过水源传播,对发病蕉穴土壤的消毒可以使用1 500 mg/L以上的Cl O2处理以达到清除病原的目的。

温度对西芹黄萎病病原菌生长和繁殖影响的研究

田间流行病学调查发现,气温高于25℃时,西芹黄萎病容易发生和流行。为了解温度对西芹黄萎病流行的影响,室内研究了不同温度下西芹黄萎病病原菌(Fusarium oxyporum f.sp.apii,FOA)的生长和繁殖情况。结果显示,PDA培养的FOA菌丝在25℃时生长最好;埋放在土壤中的FOA小型分生孢子在35℃时萌发率最高;利用土壤浸提液培养的FOA在25℃时菌丝生长速度显著高于其他温度,总孢子产量在30℃和35℃时显著高于其他温度,小型分生孢子在高于25℃时是最主要的孢子。温度高于25℃的确有利于FOA的生长、繁殖,有利于病害在田间流行,与流行病学调查的结果吻合。表明温度是影响西芹黄萎病流行暴发的关键生态因子。

枯草芽胞杆菌TR21喷叶对粉蕉根系分泌酚酸的影响

为探索枯草芽胞杆菌TR21喷叶对广粉1号和粉杂1号粉蕉根系酚酸分泌的影响,测定了不同处理不同时间根系分泌物中的酚酸含量,并利用高效液相色谱测定第13天的根系分泌物中的酚酸组成,以及甲醇溶解物对香蕉枯萎病病原菌1号和4号生理小种孢子萌发的影响。结果显示,广粉1号TR21处理后4d和6d根系酚酸分泌量高于对照,处理后8、9、11、13d低于对照;TR21处理粉杂1号根系酚酸分泌量始终高于对照。广粉1号对照根系处理后13d分泌物中检测到阿魏酸、反式肉桂酸、芥子酸、对香豆酸、水杨酸和邻苯二甲酸,TR21处理仅检测到阿魏酸和反式肉桂酸;粉杂1号对照和TR21处理后13d的根系分泌物只检测到阿魏酸。不同处理的甲醇溶解酚酸显著抑制香蕉枯萎病1号生理小种小型分生孢子萌发,粉杂1号的抑制效果比广粉1号明显,TR21处理的粉杂1号抑制效果最显著。甲醇溶解酚酸对4号生理小种的分生孢子也有显著抑制作用,但不同处理间差异不显著。TR21喷叶可以改变粉蕉根系酚酸的分泌,但在抗感品种中引起的变化存在差异。

利用微生物缓解苯丙烯酸对黄瓜生长的抑制

黄瓜根系分泌的酚酸类物质特别是苯丙烯酸,它是引起黄瓜自毒作用的一种重要的化感物质,对黄瓜连作具有明显的抑制作用。从珠海市污水排放入海口处分离出一株放线菌CellulosimicrobiumcellusansHa8菌株,它具有分解苯丙烯酸、苯甲酸、对氨基苯甲酸和苯酚的能力。通过在水培溶液和盆栽土壤中添加外源苯丙烯酸模拟连作环境,研究菌株Ha8对连作障碍的缓解程度。水培实验证明施用107cfu/L菌株Ha8能够有效缓解苯丙烯酸(浓度分别为2μmol/L和10μmol/L)对水培黄瓜的抑制作用,表现为显著促进黄瓜茎和根系的生长,提高开花数、产量等。土培实验证明,Ha8(≥106cfu/g干有机肥)和有机肥(3mg/kg土壤)联合施用,能够有效缓解苯丙烯酸(100mg/kg土壤)对黄瓜生长的抑制作用,主要表现为促进黄瓜对营养的吸收、提高黄瓜的根系脱氢酶活力、促进黄瓜根系微生物活性、增加有益菌群等。

利用16S rDNA结合gyrA和gyrB基因对生防芽孢杆菌R31的快速鉴定

克隆16S rDNA、DNA促旋酶A亚基编码基因gyrA和B亚基编码基因gyrB对分离自石斛兰(Dendrobiumsp.)叶片的广谱抗真菌生防芽孢杆菌R31进行鉴定。首先通过生理生化测定和克隆16S rDNA序列,分析显示其属于芽孢杆菌属(Bacillus),但不能准确鉴定到种;然后分别利用克隆的gyrA基因和gyrB基因以及其BLAST分析结果构建系统发育树,最终将该菌株确定为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。结果显示利用16S rDNA与gyrA基因组合可以快速鉴定枯草芽孢杆菌,利用16S rDNA与gyrB基因组合可以快速鉴定枯草芽孢杆菌及其近缘种。

黑水虻抗菌肽诱导条件优化及粗提物活性研究

采用不同诱导方法、不同诱导剂量及不同诱导时间诱导黑水虻Hermetia illucens L.幼虫产生抗菌肽,通过研磨提取法提取幼虫抗菌肽粗提物,并对所提取粗提物进行抑菌活性的比较研究,以优化黑水虻幼虫抗菌肽的诱导条件,为黑水虻抗菌肽的分离纯化提供最佳的实验方法。结果表明,不同龄期黑水虻幼虫产生抗菌肽的抑菌活性不同,最佳诱导龄期为5龄;不同诱导方法产生抗菌肽对大肠杆菌抑菌活性不同,大肠杆菌菌液针刺浸泡60s,诱导后饲养24h提取抗菌肽抑菌活性最好,其次为超声波100W诱导20min产生抗菌肽抑菌活性,但二者活性相比差异不显著;大肠杆菌菌液、金黄色葡萄球菌菌液注射诱导、金黄色葡萄球菌菌液针刺浸泡诱导及40w超声波诱导所产生抗菌肽虽有一定的抑菌效果但与前两种方法相比差异显著。

Zn^(2+)胁迫对黑水虻生长发育的影响

利用黑水虻幼虫进行粪便无害化处理是解决我国日益严重禽畜粪便污染问题的新途径之一,但饲料中过量添加禽畜生长所必需微量元素,使粪便中微量元素含量严重超标,对黑水虻的生长发育可能会产生影响。本文通过在人工饲料中添加不同浓度Zn^(2+),研究了连续两代Zn^(2+)胁迫对黑水虻生长发育的影响。结果表明,高浓度Zn^(2+)胁迫可降低黑水虻5龄幼虫、预蛹及蛹的重量,但两个世代间体重差异并不显著;受Zn^(2+)胁迫的第1、2代黑水虻幼虫的存活率、化蛹率及蛹的羽化率未受到显著影响,但低浓度Zn^(2+)可显著缩短幼虫及蛹的发育历期,高浓度Zn^(2+)胁迫可显著延长其发育历期,且与第1代相比,第2代幼虫和蛹的发育历期显著延长;高浓度Zn^(2+)胁迫显著缩短了第2代成虫的寿命,但未对第2代黑水虻卵的孵化率产生显著影响。因此,饲料中过量添加Zn^(2+)会对黑水虻幼虫和蛹的发育历期及成虫寿命产生影响,进而可能影响黑水虻幼虫无害化处理粪便的能力。

一株香蕉枯萎病生防芽胞杆菌的鉴定、生物学特性和抗菌谱研究

API生化鉴定系统对生防芽胞杆菌R31进行鉴定,并研究了该菌株的生物学特性和抗菌谱。结果表明:R31菌株被鉴定为枯草芽胞杆菌,生物学特性数据显示该菌株适宜偏酸或偏碱条件生长,偏酸环境的最佳生长pH为5.13,偏碱环境的最佳pH为8.99,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母浸提物,NA培养基测定的生长曲线显示24h内该菌株生长达到稳定期;抗菌谱研究显示该菌株在平板上对包括多株香蕉枯萎病菌在内的多种植物病原镰刀菌具有明显的抑制效果,主要引起病原菌菌丝肿胀畸形,原生质浓缩,以及菌丝破裂原生质外流。

黑水虻抗菌肽粗提物生物学稳定性观察

目的 观察黑水虻抗菌肽粗提物的生物学稳定性.方法 利用大肠杆菌菌液针刺后浸泡60 s,诱导黑水虻5龄幼虫产生抗菌肽;对所提取抗菌肽粗提物,以大肠杆菌为指示菌进行热稳定性、常温放置时间稳定性、反复冻融稳定性及pH值稳定性研究.结果 经25、37、50℃各处理10 min后,黑水虻抗菌肽粗提物抑菌活性与未处理比较,P均＞0.05;25℃放置96h以下对其抑菌活性影响较小,与-20℃保存抗菌肽比较,P＞0.05;反复冻融4次对抗菌肽抑菌活性无显著影响,冻融6次与未冻融抗菌肽比较,P＜0.05;黑水虻抗菌肽适宜pH范围为5～9.结论 黑水虻抗菌肽粗提物具有很好的热稳定性、反复冻融性,室温存放96 h对其抑菌活性影响较小,其pH适宜范围为5～9.

饲用地衣芽孢杆菌的生物学特性研究

从饲料应用学的角度对地衣芽孢杆菌的各项特性进行测试,并总结出一套可行的试验方法和结果判断标准。通过对地衣芽孢杆菌的形态和生化培养性质观察,不同梯度的温度、酸度、胆盐和人工胃液处理对地衣芽孢杆菌存活率的影响,及常用药物添加剂和微量元素对地衣芽孢杆菌的影响,及地衣芽孢杆菌对几种致病菌和抗营养因子的影响进行研究。结果表明,地衣芽孢杆菌对各种试验处理呈现出特征性表现,这说明,地衣芽孢杆菌具备良好的饲料学特性,是优良的益生菌菌株。

纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究

本试验旨在从饲料应用学的角度对纳豆芽孢杆菌的各项特性进行测试,并总结出一套可行的试验方法和结果判断标准。试验通过对纳豆芽孢杆菌的形态和生化培养性质观察,不同温度、酸度、胆盐、人工胃液处理对纳豆芽孢杆菌存活率的影响,常用药物添加剂、微量元素对纳豆芽孢杆菌生长的影响及纳豆芽孢杆菌对几种致病菌和抗营养因子的影响进行了研究。结果表明,纳豆芽孢杆菌对高温、酸性、胆盐和人工胃液有一定的耐受能力,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用,并能分解饲料中抗营养因子如半纤维素、植酸盐和果胶。结果提示,纳豆芽孢杆菌是优良的饲用微生物添加剂。

枯草芽孢杆菌TR21田间防治巴西蕉枯萎病的效果

本文研究了植物内生枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis TR21菌株灌根对巴西蕉(Musa AAA Cavendish subgroup cv. Brazil)枯萎病的大田防治效果。试验持续开展了两轮。第一轮以新植苗为防治对象,防效达到63.23%,折算的每667m2经济损失率比对照减少8.23%。第二轮以吸芽为处理对象,设3个处理区,处理区1为第一轮灌根的延续,处理区2和3则选择第一轮生产周期未作处理的吸芽,分别用TR21和50%多菌灵600倍液(设为对照)灌根,结果表明处理区1的防效为73.90%,处理区2的防效为63.23%,折算的每667m2经济损失率分别比对照减少31.23%和29.29%。初步田间试验显示菌株TR21对巴西蕉枯萎病具有较好防效,用其发酵稀释液持续灌根或在巴西蕉生长早期灌根有利于提高其对巴西蕉枯萎病的防效。

石斛兰镰刀菌叶斑病的生物防治研究

利用分离自石斛兰叶片的植物内生细菌凝结芽胞杆菌R14和地衣芽胞杆菌R21对引起石斛兰叶斑病的串珠镰孢菌B10b开展了生物防治研究。平板对峙法显示R14和R21在PDA平板上对B10b的抑菌带宽分别为4.94mm和6.33mm,镜检发现两株细菌处理后的B10b菌丝均表现为畸形,膨胀破裂,内含物外流,并且产生畸形分生孢子;两株芽胞杆菌的发酵液对B10b菌株分生孢子的萌发具有明显抑制作用,其EC50分别为538.270μl/ml、498.884μl/ml。温室防治试验显示,R14和R21喷施石斛兰叶片,对由B10b引起的石斛兰叶斑病的最高防效分别达到70.13%和67.53%。

一株香蕉枯萎病生防解淀粉芽胞杆菌的分离、鉴定及其拮抗物质研究

以致病力存在分化的香蕉枯萎病病原菌（Fusariumoxysporum f．sp．cubense）菌株群为靶标，从发病香蕉园香蕉根际土壤中分离获得一株芽胞杆菌R21g9，平板抑菌能力测定结果显示，R21g9不仅对香蕉枯萎病菌的不同菌株具有较强的抑制能力，还对西瓜枯萎病病原菌（Foxysporumf．sp．niveum）、芒果蒂腐病病原菌（BotryodiplodiatheobromaePat）和新月弯孢霉（Curvularialunata）等植物病原真菌有较强的抑制作用。利用生理生化和分子生物学方法对该菌开展鉴定研究，API系统将该菌鉴定为地衣芽胞杆菌（Bacilluslicheniformis）；利用16SrDNA序列开展的系统发育分析仅能确定该菌为枯草芽胞杆菌组成员，不能鉴定到种；利用gyrB基因序列开展的系统发育分析将R21g9鉴定为解淀粉芽胞杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。拮抗机制研究结果显示，R21g9对真菌的作用方式为抑菌，抑菌物质存在于发酵上清中，可以被lO％～90％的硫酸铵沉淀。对硫酸铵沉淀的粗提物进行抑菌活性检测发现40％、50％、60％、70％和80％饱和度硫酸铵沉淀物具有强的抗菌活性，主要拮抗物质可以被50％饱和度硫酸铵盐沉淀．此沉淀物的抑菌率最高，可以达到95．65％。

棕榈科植物叶斑病病原菌的生物学特性及药剂筛选试验

对引起银海枣(Phoenix sylvestris)、加拿利海枣(P.canariensis)、酒瓶椰子(Hyophorbe lagenicaulis)和棍棒椰子(H.verschaffeltii)叶斑病的病原真菌拟盘多毛胞(Pestalotiopsis palmarum)开展了生物学特性研究和防治药剂筛选。试验结果表明,该菌的最适生长温度为20～25℃;12 h光暗交替有利于子座的形成;菌丝生长最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为蛋白胨;甲基托布津、代森锰锌、多菌灵、扑海因、腈菌唑等对该菌的菌丝体生长均有较强的抑制效果,尤其以50%扑海因悬浮剂对其有较好的抑制效果,其EC50值为0.5625 mg/mL。

光照、氧气、pH和盐度对沼泽红假单胞菌2-8菌株生长和亚硝酸盐消除的影响

以1株具有亚硝酸盐消除能力的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)2-8菌株(简称2-8菌株)为材料,研究了不同光照和氧组合、pH、盐度对菌株生长和亚硝酸盐消除能力的影响。结果发现,光照厌氧条件最利于2-8菌株的生长,该条件下菌株亚硝酸盐消除能力最强,25h消除率达(91.33±1.27)%;菌株在pH7.0时生长和亚硝酸盐消除能力最强,25h亚硝酸盐消除率达到(95.58±4.34)%,在pH9.0以上和5.0以下时基本不生长;菌株在w(NaCl)为0和0.4%的培养基中生长和亚硝酸盐消除能力最强,在w(NaCl)为0.8%～2.0%的培养基中,生长和亚硝酸盐消除能力随w(NaCl)增高而减弱。测定的4个环境因子主要通过影响菌株的生长来影响其对亚硝酸盐的消除能力。

绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖研究

为了更直观地了解植物内生枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖情况,评估其定殖能力,为西芹黄萎病生物防治提供依据。通过原生质体转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pHT315-gfp导入枯草芽胞杆菌R31细胞中,对菌株进行gfp标记,然后利用gfp标记菌株灌根处理西芹苗,研究其在西芹根际的定殖形式和能力。结果获得了携带pHT315-gfp质粒的R31-gfp菌株,该质粒可以在R31细胞中稳定表达,标记菌R31-gfp在蓝光激发下可以稳定发出强的绿色荧光。利用标记菌接种西芹幼苗后,可以在根系表皮检测到绿色荧光膜。对其定殖量的检测发现,接种3天后标记菌在根表和根际土中稳定定殖,定殖量分别达到1.4×104cfu/g和7.6×104cfu/g,并长期以该水平稳定定殖,到第65天仍可在根表和根际土检测到9.1×104cfu/g和3.17×105cfu/g的R31-gfp。由此得出,R31可以在西芹根表形成菌膜,并在根际长期稳定定殖。

化学农药与芽孢杆菌M3、S11菌株对西芹黄萎病的防治效果

利用化学药剂与生防菌结合,对由尖孢镰刀菌芹菜专化型引起的西芹黄萎病进行综合防治研究。结果表明:苗期使用50%多菌灵可湿性粉剂(WP)、50%福美双·多菌灵WP(活根菌灭)或40%噁霉灵WP(噁霉敌)灌根均能显著消除育苗基质中的病原菌孢子,孢子下降率达99.00%以上;大田继续使用上述3种化学药剂或改用生防菌芽孢杆菌S11和M3,都能够显著降低西芹黄萎病发病率,防治效果最高为85.98%;其中持续单独使用50%多菌灵WP或苗期使用50%多菌灵WP、大田改用生防菌芽孢杆菌对西芹的生长没有不良影响。

西芹黄萎病防治药剂筛选和毒力测定

针对西芹黄萎病病原菌开展室内防治药剂筛选和药剂毒力测定。按照药剂最大推荐剂量从14种供试药剂中初筛出8种有效药剂,以进口多菌灵、菌哥、新世生、瓜果类太宝、太医最佳,对菌丝生长的抑制率达100%。8种药剂对病原菌菌丝生长的EC50依次为进口多菌灵(0.0063mg/ml)<太医(0.0073mg/ml)<活根菌灭(0.0077mg/ml)<枯萎灵(0.0079mg/ml)<瓜果类太保(0.0092mg/ml)<根腐宁(0.0103mg/ml)<新世生(0.0192mg/ml)<菌哥(0.0844mg/ml),进口多菌灵和活根菌灭对病原菌孢子萌发的EC50分别为1.50×10-4mg/ml和1.55×10-4mg/ml。

几种金属离子对沼泽红假单胞菌2-8生长和亚硝酸盐消除的影响

在培养基中添加一定浓度金属离子,研究了不同浓度铜离子(Cu2+)、镁离子(Mg2+)、锌离子(Zn2+)、铁离子(Fe3+)和锰离子(Mn2+)对沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas palustris)2-8株生长和亚硝酸盐消除能力的影响。结果发现,1×10-7mol.L-1Cu2+刺激菌株生长和亚硝酸盐消除,1×10-4mol.L-1Cu2+抑制生长和亚硝酸盐消除,1×10-6mol.L-1和1×10-5mol.L-1的Cu2+抑制生长,但刺激亚硝酸盐消除;1×10-4mol.L-1Mg2+刺激菌株生长和亚硝酸盐消除;不同浓度Zn2+对菌体生长影响不显著,但浓度为1×10-6mol.L-1和1×10-7mol.L-1时刺激亚硝酸盐消除,浓度大于1×10-6mol.L-1时抑制亚硝酸盐消除;Fe3+促进生长,浓度越高生长越好,对菌株亚硝酸盐消除的影响则刚好相反;不同浓度Mn2+均抑制菌株生长,1×10-6～1×10-3mol.L-1Mn2+抑制亚硝酸盐消除。受测定的5个金属离子中除1×10-4mol.L-1Cu2+对菌株亚硝酸盐消除能力的抑制较强外,其他离子的抑制会随时间推移逐渐消失。