KDM4A通过下调BMP9促进乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭

背景与目的:外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)能抑制人乳腺癌的恶性进展,但其在乳腺癌中常异常低表达。本研究拟探索表观遗传修饰的组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶4A(lysine specific demethylase 4A,KDM4A)在乳腺癌中的表达及作用,探究KDM4A与BMP9之间的关系及其可能的调节机制。方法:通过生物信息学方法分析KDM4A在乳腺癌中的表达及其与BMP9之间的关系,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证;采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)验证KDM4A对BMP9的调控作用,采用RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验验证KDM4A对BMP9表达的影响。采用RNA干扰技术及敲低BMP9的腺病毒构建转染KDM4A小干扰RNA(siKDM4A)或感染siBMP9腺病毒(Ad-siBMP9)的外源性重组MDA-MB-231细胞,采用划痕愈合实验、transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力。结果:生物信息学分析结果表明,KDM4A在乳腺癌中的表达明显高于正常组织,KDM4A与BMP9在乳腺癌中的表达呈负相关关系。RTFQ-PCR及Western blot结果显示,KDM4A在不同乳腺癌细胞系中均高表达,敲低KDM4A可显著上调BMP9。ChIP实验证实,KDM4A可显著富集于BMP9基因启动子区域,降低其组蛋白赖氨酸36号位而不是4号位甲基化水平,从而沉默BMP9表达。RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验证实,KDM4A对BMP9的mRNA表达无明显影响,但可影响其蛋白降解。敲低KDM4A后,乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移及侵袭能力均受到明显抑制,而这种作用可被敲低BMP9所部分逆转。结论:KDM4A在乳腺癌组织及乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达,并可通过下调BMP9基因启动子区域组蛋白甲基化水平沉默其表达,以及在蛋白水平而不是mRNA水平影响BMP9稳定性,促进乳腺癌的迁移和侵袭。

SNHG3介导的自噬促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG3调控自噬对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。方法使用生物信息学方法及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中的表达;采用RNAi技术构建敲低SNHG3(siSNHG3)及对照(siNC)的MCF-7重组细胞株,Western blot及细胞免疫荧光检测自噬标志;使用自噬体-溶酶体融合抑制剂BafA1或早期自噬体形成抑制剂3-MA处理敲低或不敲低SNHG3的MCF-7细胞,Western blot检测LC3-Ⅱ或p62表达,观察对自噬囊泡形成或自噬降解的影响;克隆形成实验、CCK-8实验、划痕愈合实验及Transwell实验检测siSNHG3联合或不联合BafA1或3-MA对MCF-7细胞增殖、横向迁移、纵向迁移及侵袭的影响,Western blot检测其对MCF-7细胞EMT的影响。结果生物信息学分析及RT-qPCR证实,SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中高表达;Western blot及细胞免疫荧光证实,敲低SNHG3可激活乳腺癌的自噬;克隆形成、CCK-8、划痕愈合及Transwell实验证实,下调SNHG3表达可通过激活自噬抑制肿瘤的增殖、迁移和侵袭;Western blot证实,SNHG3通过负调控自噬促进乳腺癌的EMT进程。结论SNHG3在乳腺癌中异常高表达并负调控自噬,并可通过负调控自噬增强乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程,提示SNHG3是乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

BMP9下调HIF-1α抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解和迁移侵袭

目的研究骨形成蛋白BMP9对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和迁移侵袭的调控作用。方法实验组使用人BMP9重组腺病毒(AdBMP9)感染MDA-MB-231细胞,对照组用空载的GFP腺病毒感染细胞。采用乳酸、葡萄糖和ATP检测试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量、乳酸和ATP生成量;通过GEPIA2数据库,分析BMP9在泛癌中与糖酵解关键酶基因的相关性;qRT-PCR检测过表达BMP9后,MDA-MB-231中糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA的mRNA表达水平;STRING数据库分析BMP9抑制MDA-MB-231有氧糖酵解潜在靶点;Western blot检测细胞HIF-1α和下游蛋白表达水平;划痕实验和Transwell实验评估不同处理后,细胞的迁移与侵袭能力的改变。结果与对照组相比,BMP9下调乳腺癌MDA-MB-231细胞的葡萄糖摄取、乳酸生成及ATP水平(P<0.01),抑制HIF-1α及其下游蛋白表达;Rescue实验中,过表达HIF-1α能逆转BMP9对MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和迁移侵袭的抑制作用。结论BMP9下调HIF-1α抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231有氧糖酵解和迁移侵袭能力。

miR-619-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的探究miR-619-5p在人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖、迁移和侵袭中的作用及机制。方法乳腺癌和正常乳腺组织及细胞中miR-619-5p的表达利用生物信息学分析或经qRT-PCR法检测;分别转染miR-619-5p模拟物或抑制剂后,qRT-PCR法测定miR-619-5p、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA的表达;CCK-8法用于检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell TM实验观察细胞迁移和侵袭能力转变;EMT相关分子的蛋白表达由Western blot检测。生物信息学预测miR-619-5p靶基因,并对潜在靶基因CREB1作初步分析。结果miR-619-5p在乳腺癌中低表达。与对照组相比,过表达miR-619-5p后,miR-619-5p表达水平上调,EMT上皮标志物表达上调,促EMT分子及间质标志物表达下调,细胞的增殖、迁移与侵袭能力削弱,CREB1表达下调;低表达miR-619-5p组结果与上述结果相反。结论乳腺癌组织及细胞中miR-619-5p表达更低,miR-619-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,其效应可能通过靶向CREB1实现。

煤矿井下电缆故障的原因和查找方法

随着煤矿开采技术的成熟，年产量的不断加大，井下供电的负荷逐渐的增加，煤矿井下的电缆的使用的频繁，同时所受井下特殊环境的限制，电缆事故不断的增多，通过煤矿工作的实际，现对煤矿井下电缆故障和查找作一些简单的阐述。

c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞生物学作用的影响

目的:探讨c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞的生物学作用。方法:通过实时定量PCR(RT-qPCR)法分析c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中的表达情况;生物信息学分析c-Myc与LncRNA SNHG3的调控关系;采用染色质免疫沉淀实验(ChIP)和双荧光素酶报告基因实验验证它们的相互作用,并通过对c-Myc进行RNAi和过表达后,RT-qPCR和Western blot法检测SNHG3的表达变化;CCK8、划痕愈合和Transwell^(TM)实验分别检测细胞的增殖能力、横向迁移能力和纵向迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞的周期分布;RT-qPCR和Western blot法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA和蛋白表达水平。结果:c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中异常高表达(P<0.001);生物信息学发现LncRNA SNHG3是c-Myc转录调控的主要靶标,且c-Myc在LncRNA SNHG3启动子区存在多个结合位点;LncRNA SNHG3与Myc信号通路成正相关(P<0.001)。实验结果证实c-Myc结合LncRNA SNHG3启动子,促进LncRNA SNHG3转录和表达(P<0.001);此外,功能挽救实验结果显示c-Myc靶向LncRNA SNHG3增加MDA-MB-231细胞的增殖数目,迁移与侵袭的穿膜数量(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot结果显示过表达LncRNA SNHG3部分可抵消敲低c-Myc表达对细胞的EMT进程;并下调E-cadherin的表达(P<0.01),上调MMP2(P<0.01)、Vimentin(P<0.05)和Snail(P<0.05)的表达。干扰LncRNA SNHG3表达能将细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.001),cyclinD1表达减少(P<0.001)。结论:由c-Myc激活转录的LncRNA SNHG3一方面通过激活上皮间充质转化(EMT)促进乳腺癌细胞迁移、侵袭;另一方面通过加速G_(1)/S细胞周期进程促进乳腺癌细胞增殖。

论后进生的转化策略

搞好素质教育就不能使一个学生掉队，就必须做好后进生的转化工作。一、用爱心融化捷克教育家夸美纽斯说：“应当像尊敬上帝一样尊敬孩子。”后进生也有较强的自尊心和上进心，都希望得到老师的表扬。因此，教师应尊重后进生的人格和自尊，积极去发现他们的优点，并给予肯定和鼓励。在教学中，我们可利用后进生的长处，点燃他们自信的火种，让他们获得奋进的勇气。

分解图形在平行线教学中的应用

七年级的学生刚接触三线八角的时候，往往都有较强的新鲜感和好奇感。但初学同位角、内错角、同旁内角的概念后，普遍会感到线和角特别多，在判断一个图形中有关的角的关系时，把握不住问题的实质，于是造成学习上的心理障碍，而这更主要的是还会影响到平行线的学习。

基于核心素养背景下的农村小学语文阅读教学方法探究

语文教学是提升学生综合能力的重要学科之一,对学生全面发展有着较好的帮助,就目前的语文教学来说,教师使用阅读、写作的方式来提高学生的语文综合能力,帮助学生养成初步理解和鉴赏文学的能力,让其可以得到综合素质提升。但是在当前的农村小学语文教学上,教师往往忽视了核心素养提升的要求,导致学生只能够在基础知识的提高上进行发展,使得学生出现能力短缺的情况。针对目前存在的相关问题,教师需要作学生的阅读方法进行各种提升和改变,让其能够符合学生的主要发展要求,做到在语文阅读上进行其核心素养的培养,保证学生在语文基础知识提高的同时也可以完成语文能力和思维能力的全方位提高。

五沟煤矿风井井筒与回风水平连接处的优化设计

五沟煤矿地质条件非常复杂，本文认真分析了风井井筒的地质条件，对风井井筒与回风水平连接处的原设计进行了优化，合理的选择回风水平的标高，保证了工程施工的安全顺利进行。

中期妊娠引产的心理护理要点及实施心得分析

研究分析中期妊娠引产的心理护理要点及实施心得。方法:将本院2019年4月至2020年4月妇产科接诊行中期妊娠引产产妇158例为研究对象,采取随机平均分组方式,分配产妇于参照组和实验组,在产妇行引产期间分别实施常规护理干预和心理护理干预,护理开展后对产妇心理状态及临床相关指标数据进行统计比较。结果:经心理状态测试评估,实验组产妇护理后心理状态较护理前改善明显,指标数据优于参照组产妇(P<0.05),临床相关指标对比,实验组指标各项均较参照组更具护理优势性(P<0.05)。结论:采用心理护理对中期妊娠引产产妇进行临床护理干预,能够对产妇心理健康水平、产后恢复等方面起到良好促进作用,缩短患者临床诊疗时长,具有显著临床实施效果及应用价值。

流产后关爱在人工流产术后计划生育服务中的应用

目的探讨对人工流产术后患者采用流产后关爱方式完成计划生育服务干预后获得的效果。方法选取3281例人工流产术患者进行计划生育服务干预研究,按照随机数字表法分为常规组(1640例)与观察组(1641例)。常规组采用常规方式进行干预,观察组在常规组基础上采用流产后关爱方式进行干预。比较两组患者干预结果。结果观察组患者术后月经恢复时间、阴道出血时间均短于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组中文版避孕自我效能量表(C-CSE)评分高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组避孕措施执行率(97.07%)高于常规组(73.17%),差异有统计学意义(P<0.05);观察组紧急避孕、避孕重要性、男性避孕方法、女性避孕方法及术后复查重要性知识掌握率高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论流产后关爱方式在计划生育服务中有效应用,可缩短人工流产术患者术后月经恢复时间、阴道出血时间,提高避孕效能感及避孕措施执行率,掌握避孕相关知识,减少重复流产对流产术后患者的伤害。

探微基于业财融合下的事业单位财务管理转型

随着事业单位各项机制改革的逐步深化,对于财务管理工作的标准日趋严格,注重事后核算和监督的传统财务管理模式已经不能满足当前事业单位实施全面预算管理、绩效目标管理以及内部控制建设等诸多方面的财务管理需求。因此,推行新型财务管理工作模式势在必行,而业财融合作为新型的财务管理模式,不仅能满足财务管理的需求,实现更好的资源配置,还能有效促进单位管理水平和运行效率的提升,在防控风险的同时,进一步引领业务的发展。本文主要针对业财融合视角下,事业单位财务管理转型的重要性和必要性进行阐述,对管理转型中存在的问题及对策进行了探讨。