热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)对人类ether-a-go-go相关基因(hERG)-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型(WT)、突变型(A561V)、杂合型(WT/A561V)细胞模型,采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载(Itf NC)、Hsp90减表达(Hsp90-)、过表达空载(Ovp NC)或Hsp90过表达(Hsp90+)质粒至各细胞模型(即Itf NC组、Hsp90-组、Ovp NC组、Hsp90+组),另设不加载体的对照(Ctl)组,采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG(135 kDa)蛋白表达水平均较野生型明显升高(均P<0.05)。野生型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)、hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),突变型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),杂合型细胞模型Hsp90+组hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05)。融合Hsp90和hERG蛋白后,Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质,Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少,Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较,Hsp90+组Ikr曲线左移14.709,斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50 mV处达到最高;杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30 mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05),在30、40 mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05)。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用,而上调Hsp90可促进WT/A561V hERG的折叠转运,进而影响通道功能。

分子伴侣Rer1参与人胚胎肾上皮细胞系HEK293T中hERG钾通道蛋白转运

目的探讨分子伴侣Rer1在hERG钾通道蛋白转运中的作用机制,并进行可能恢复hERG转运异常的药物Baf A1研究。方法将A561V突变体及野生型hERG载体瞬时转染人胚胎肾上皮细胞系(HEK293T),建立野生、突变及混合转染细胞模型;运用免疫荧光、蛋白免疫印迹检测hERG及Rer1的表达;采用小干扰RNA技术敲低Rer1表达后检测hERG蛋白的表达;V-ATP酶抑制剂Bafilomycin A1(Baf A1)以1 mmol/L孵育各组细胞6 h后Western blot检测hERG蛋白表达;用膜片钳对有潜在功能的混转细胞给予Baf A1孵育后测定膜电流。结果与野生组相比,A561V突变可致hERG蛋白转运缺陷并表现不同条带水平,突变组hERG蛋白的膜表达明显减少(P<0.01);Rer1在突变、混转组中表达明显下降(P<0.01),进一步敲低Rer1后可促进部分相对成熟hERG蛋白的顺向转运;此外,与对照组相比,Baf A1孵育可使野生、突变组中成熟hERG蛋白明显增加(P<0.05),混转组中未成熟hERG蛋白则显著上调(P<0.05);而在混转细胞中,Baf A1孵育可使尾电流相对密度明显增强(P<0.05)。结论Rer1参与hERG钾通道蛋白的转运,并能抑制部分异常hERG蛋白在细胞中的顺向转运,Baf A1能明显增强混转细胞的尾电流密度。

输尿管结石嵌顿部位与临床特征的相关性分析

目的探讨输尿管结石的不同嵌顿部位与患者临床特征的相关性。方法收集289例输尿管结石患者的临床资料,根据CT扫描结果对患者进行分组,比较各组间一般资料的差异性及相关性,并对不同结石部位和各症状特征的相关性进行分析。结果对289例患者进行分析,男性显著多于女性,按结石嵌顿部位分组后,发现腹段及盆段结石的表现以括约肌功能障碍为主,而壁内段则以尿路刺激症状为主,各组间差异有统计学意义(P<0.05),但不同嵌顿部位输尿管结石与各特征表现分别与年龄、性别进行多元无序logistic回归分析,结果无统计学意义(P>0.05)。结论输尿管结石嵌顿部位不同与临床特征呈一定相关性,括约肌功能障碍在腹段及盆段结石患者中多见,而壁内段则多表现为尿路刺激征,考虑与输尿管平滑肌的神经体液调节机制相关,这对于理解及早期正确诊治输尿管结石及改善患者预后有一定临床价值。

免疫健全者新型隐球菌肺炎合并肺栓塞一例报告

新型隐球菌肺炎是由吸入环境中的新生隐球菌引起，免疫抑制宿主多见，如艾滋病等，而在免疫健全者中，隐球菌的感染率极低。目前肺栓塞的发病率缺乏准确的流行病学资料，既往在临床实践中误诊、漏诊或诊治不规范等普遍存在，但近年来随着临床医生对该病的认识及诊疗水平的不断提高，国内诊治肺血栓栓寒症的病例数也逐年提高。

排汽放空消声器的研究与应用

叙述了排汽放空噪声的产生机理以及排汽消声器的结构及设计原理;介绍了该消声器的特点和良好的应用效果。

探寻小学作文教学效率低下的原因

写作是语文学习的一项重要能力,作文是语文成绩的'半壁江山'。我们的语文教师投入大量的时间与精力进行作文教学,特别是在写前指导和写后批改上。然而,学生的写作兴趣依然不高,写作能力依然不强,写作成果依然不佳。是什么导致了我们小学语文的写作教学效率如此低下呢?一、虚假写作的泛滥真实的写作是什么,是发自内心的热爱与需求。在真实世界里的真实写作,是有着明确的交际语境,有着明确的写作目的、读者意识的。

药物拯救HERG钾通道蛋白转运异常的机制研究进展

长QT综合征（long QT syndrome,LQTS）是一组因细胞膜上有功能的钾离子通道数量减少从而使IKr减弱致动作电位Ⅲ期复极异常而导致的临床综合征,而IKr减弱引起LQTS的原因有很多,主要包括两大类：一类是获得性LQT综合征（acquired long QT syndrom,aLQTS）,引起aLQTS的原因有：电解质紊乱、缺氧和不同的药物阻塞HERG钾通道等.在过去,很多已批准的上市药品因存在引起aLQTS而致TdP的风险被淘汰或者应用被限制,如普罗布考、特非那定、阿司米唑等,这不但大大增加了药品研制的费用,而且增加了病人发生严重不良反应的风险及负担;另一类是遗传性LQT综合征（hereditary long QT syndrom,hLQTS）,多由于基因突变所致,已证实大部分HERG基因突变主要通过影响蛋白质转运过程,而且部分aLQTS也可因HERG钾通道转运异常而致LQTS,所以对于HERG钾通道转运异常的研究越来越受到关注.

宁波市鄞州第二医院急诊抢救病例的流行病学分析

目的探讨某医院急诊抢救患者的流行病学特点。方法对2549例急诊抢救患者资料进行回顾性分析，对疾病谱的构成和年龄构成等进行分析。结果急诊抢救患者年龄以70-≤80岁居多，占30．3％。排在前五位的疾病类别依次为：外伤、呼吸系统、神经系统、循环系统和内分泌系统。70岁以上的患者中，有37．9％（170例）患有慢性阻塞性肺疾病。车祸和工伤在外伤中占有较大的比重。心肌梗死的病例仅占循环系统抢救病例的14．4％。安定类镇静类药物和乙醇中毒约占所有中毒的90．0％。结论某医院急诊抢救患者以老年人呼吸系统、循环系统及神经系统疾病为主。同时，不应忽视危害年轻人健康的危险因素，注意交通安全，倡导健康生活方式。