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重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
被引量:
1
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作者
刘行辉
刘若兰
+6 位作者
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1436-1444,共9页
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战...
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战。之前的研究已经表明,一种识别GlcNAc的茶树菇凝集素6(Agrocybe aegerita lectin recognizing GlcNAc,AANL6)对末端的GlcNAc糖结构特异性识别,但是亲和力较低。为了改造更高效的末端GlcNAc糖识别工具,AANL6通过二聚化来提高单体的亲和力。将AANL6单体通过中间的接头序列(linker)进行分子水平的二聚化,然后克隆到pET-30a质粒上,转化至大肠杆菌表达菌BL21中。确立最优的表达条件,并大量表达纯化AANL6二聚体蛋白(根据linker命名为PA6和EAA6)。随后对AANL6二聚体进行纯度、分子量和糖结合活性研究。SDS-PAGE结果显示,AANL6二聚体纯度较高(92.5%),分子量介于66.2~116 kD之间,符合预期值88 kD的大小。等温滴定热量法(isothermal titration calorimetry,ITC)检测结果显示,二聚化的AANL6显著提高了对GlcNAc的结合能力(P<0.01)。糖结合活性检测显示,AANL6二聚体对末端的GlcNAc糖基化修饰与单体相比有着更高的特异性。这些结果显示,AANL6二聚体通过二聚化显著提高了对末端GlcNAc糖基化的亲和力和特异性,这不仅为未来的末端GlcNAc糖基化修饰的功能提供有效的识别工具,而且提供了一种新的改造凝集素的策略。
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关键词
N-乙酰葡萄糖胺
糖基化修饰
二聚化
糖识别工具
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职称材料
题名
重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
被引量:
1
1
作者
刘行辉
刘若兰
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
机构
湖北科技学院医学部药学院药理学教研室
湖北科技学院医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室
江汉大学环境与健康研究院持久性有毒污染物环境与健康危害湖北省重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1436-1444,共9页
基金
国家自然科学基金(No.32000906)
湖北科技学院博士启动基金(No.BK202038)
国家级大学生创新创业训练计划(No.202210927009)资助。
文摘
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战。之前的研究已经表明,一种识别GlcNAc的茶树菇凝集素6(Agrocybe aegerita lectin recognizing GlcNAc,AANL6)对末端的GlcNAc糖结构特异性识别,但是亲和力较低。为了改造更高效的末端GlcNAc糖识别工具,AANL6通过二聚化来提高单体的亲和力。将AANL6单体通过中间的接头序列(linker)进行分子水平的二聚化,然后克隆到pET-30a质粒上,转化至大肠杆菌表达菌BL21中。确立最优的表达条件,并大量表达纯化AANL6二聚体蛋白(根据linker命名为PA6和EAA6)。随后对AANL6二聚体进行纯度、分子量和糖结合活性研究。SDS-PAGE结果显示,AANL6二聚体纯度较高(92.5%),分子量介于66.2~116 kD之间,符合预期值88 kD的大小。等温滴定热量法(isothermal titration calorimetry,ITC)检测结果显示,二聚化的AANL6显著提高了对GlcNAc的结合能力(P<0.01)。糖结合活性检测显示,AANL6二聚体对末端的GlcNAc糖基化修饰与单体相比有着更高的特异性。这些结果显示,AANL6二聚体通过二聚化显著提高了对末端GlcNAc糖基化的亲和力和特异性,这不仅为未来的末端GlcNAc糖基化修饰的功能提供有效的识别工具,而且提供了一种新的改造凝集素的策略。
关键词
N-乙酰葡萄糖胺
糖基化修饰
二聚化
糖识别工具
Keywords
N-acetylglucosamine(GlcNAc)
glycosylation modification
dimerization
glycan identification tool
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
刘行辉
刘若兰
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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